一种检测肝病标记物CHI3L1的样品垫处理液的制作方法

本发明涉及生物，具体涉及一种检测肝病标记物chi3l1的样品垫处理液。

背景技术：

1、肝纤维化是慢性肝病的一个病理过程，也是肝炎向肝硬化和肝癌发展的重要阶段，由于肝硬化和肝癌难以治愈的，所以早期监测肝纤维化，将肝病控制在纤维化阶段，可避免其发展到肝硬化和肝癌的的严重阶段。

2、壳多糖酶3样蛋白1（chi3l1，简称壳酶蛋白）是一种含383个氨基酸，在炎症和组织重塑中起重要作用。chi3l1在肝脏中高度特异表达且可能直接参与肝纤维化的形成和维持。在肝纤维化过程中，chi3l1的浓度与肝纤维化的进展速度呈现正相关。因此，chi3l1作为一种高灵敏度和高特异性的肝纤维化分期和诊断的血清检测标志物。

3、目前，市面检测chi3l1的方法包括荧光免疫层析法、磁微粒化学发光法、酶联免疫吸附法和胶体金法等。

4、而在胶体金法中，是以胶体金为显色媒介，利用免疫学中抗原抗体能够特异性结合原理，达到检测的目的。胶体金法通过胶体金试纸来实现上述检测目的，胶体金试纸中的试纸条由样品垫、胶体金垫、硝酸纤维素膜(nc膜)和吸水垫组成，各部分衔接粘贴在pvc底板上。样品垫是试纸条的重要组成部分，样品垫用于接收检测样品，使样品均匀分布，还能起到预过滤的作用。样品垫的物理性质、化学成分、处理方式等都会对胶体金试纸条检测产生重要影响。样品垫在使用前一般需要经过样品垫处理液的处理。因此，样品垫处理液具有重要作用，会影响胶体金试纸条在检测时的灵敏度和特异性。

5、综上，研发一种能提高胶体金试纸条灵敏度的样品垫处理液是有重要意义的。

技术实现思路

1、本发明的目的在于提供一种检测肝病标记物chi3l1的样品垫处理液，提高胶体金试纸条检测chi3l1的灵敏度。

2、为解决上述技术问题，本发明提供了一种样品垫处理液，包含缓冲液、封闭剂和表面活性剂。

3、优选的，表面活性剂包括一种非离子双子表面活性剂，该非离子双子表面活性剂由甲醇、麦芽糖、戌二酸酐和2-羟基丁酸制备得到。

4、优选的，表面活性剂的添加量为1-2wt%。

5、优选的，样品垫处理液的ph为7.0-8.0。

6、优选的，缓冲液包含tris-hcl缓冲液、磷酸盐pb缓冲液、硼酸盐缓冲液中的至少一种。

7、优选的，缓冲液的浓度为0.1m-1m。

8、优选的，封闭剂包含酪蛋白、牛血清白蛋白（bsa）中的至少一种。

9、优选的，封闭剂的添加量为0.1-1wt%。

10、本发明一实施例中，该非离子双子表面活性剂的制备步骤包括：

11、合成甲醇麦芽糖苷。称取甲醇、麦芽糖和磷酸进行反应，反应完成后进行过滤，收集滤液，在滤液中加入naoh溶液，调节滤液的ph至中性，然后蒸馏除去甲醇，得到甲醇麦芽糖苷。

12、优选的，甲醇、麦芽糖和磷酸以质量比10-1000：10-500：1-10的比例使用。

13、优选的，反应条件为：真空，100-120℃。

14、优选的，naoh浓度为0.1-1m。

15、优选的，蒸馏条件为：100-120℃，1-5kpa。

16、合成甲醇麦芽糖苷戌二酸双酯。称取甲醇麦芽糖苷、戌二酸酐和对甲苯甲酸进行反应，反应完成后，加入naoh溶液，调节ph至中性，真空干燥，过滤，收集滤液，得到甲醇麦芽糖苷戌二酸双酯。

17、优选的，甲醇麦芽糖苷、戌二酸酐和对甲苯甲酸以质量比100-500：100-500：1-10的比例使用。

18、优选的，反应条件为：100-120℃。

19、优选的，naoh浓度为0.1-1m。

20、合成非离子双子表面活性剂。称取甲醇麦芽糖苷戌二酸双酯、2-羟基丁酸和对甲苯甲酸进行反应，反应完成后，用乙醇洗涤，静置分层，加入naoh溶液，调节ph至中性，真空干燥后，加入甲醇溶解，经洗涤、分离提纯后得到纯的非离子双子表面活性剂。

21、优选的，甲醇麦芽糖苷戌二酸双酯、2-羟基丁酸和对甲苯甲酸以质量比10-100：100-500：1-10的比例使用。

22、优选的，反应条件为：100-120℃，反应4-8h。

23、优选的，naoh浓度为0.1-1m。

24、更优选的，非离子双子表面活性剂的具体制备步骤如下：

25、合成甲醇麦芽糖苷，以质量比10-1000：10-500：1-10的比例称取甲醇、麦芽糖和磷酸，然后把反应温度控制在100-120℃，并保持反应体系真空。采用斐林试剂确定反应是否到达终点，确定反应完全后，进行过滤，收集滤液，待滤液温度下降到60-80℃左右，在滤液中加入0.1mol/l的naoh溶液，调节滤液的ph至中性。然后在100-120℃，1-5kpa条件下用旋转蒸发器蒸馏除去甲醇，得到甲醇麦芽糖苷。

26、合成甲醇麦芽糖苷戌二酸双酯，以质量比100-500：100-500：1-10的比例称取甲醇麦芽糖苷、戌二酸酐和对甲苯甲酸，然后把反应温度控制在100-120℃，反应一段时间后，根据是否有水生成来判断反应是否达到终点，反应结束后，冷却到60-80℃，然后加入0.1mol/l的naoh溶液，调节ph至中性，真空干燥，过滤，收集滤液，得到甲醇麦芽糖苷戌二酸双酯。

27、合成非离子双子表面活性剂，以质量比10-100：100-500：1-10的比例称取甲醇麦芽糖苷戌二酸双酯、2-羟基丁酸和对甲苯甲酸，然后把温度控制在100-120℃，反应4-8h后，用乙醇洗涤，除去过量的2-羟基丁酸，静置分层，然后加入0.1mol/l的naoh溶液，调节ph至中性，真空干燥后，加入甲醇溶解，经洗涤、分离提纯后得到纯的非离子双子表面活性剂。非离子双子表面活性剂有良好的润湿作用，使抗原蛋白容易被润湿，实现与标记的胶体金特异性结合。当非离子双子表面活性剂在上述样品垫处理液中的添加量为1-2%时，能改善胶体金的释放情况，能促进标记的胶体金的释放，减少nc膜对标记的胶体金的吸附。

28、本发明一实施例中，样品垫的处理步骤包括：

29、将样品垫浸泡在上述样品垫处理液中，浸泡4-8h后取出样品垫，在30-40℃烘箱干燥8-16h。

30、与现有技术相比，本发明的有益效果为：本发明提供了一种非离子双子表面活性剂，该非离子双子表面活性剂具有较好的润湿作用，能使抗原蛋白与标记的胶体金实现特异性结合。本发明还提供了一种样品垫处理液，样品垫处理液中包括1-2wt%非离子双子表面活性剂和1-5wt% α-甲基-d-甘露糖苷，将样品垫用该样品垫处理液处理后，组装成用于检测肝病标记物chi3l1的胶体金试纸条时，由于1-2wt%非离子双子表面活性剂能促进标记的胶体金的释放，减少nc膜对标记的胶体金的吸附，1-5wt% α-甲基-d-甘露糖苷通过和蛋白结合，对蛋白起到保护作用，最终使得胶体金试纸条在检测时具有较好的检测灵敏度。

技术特征：

1.一种样品垫处理液，包括缓冲液、封闭剂和表面活性剂，其特征在于，所述表面活性剂包括一种非离子双子表面活性剂，所述非离子双子表面活性剂由甲醇、麦芽糖、戌二酸酐和2-羟基丁酸制备得到。

2.根据权利要求1所述的样品垫处理液，其特征在于，所述样品垫处理液的ph为7.0-8.0；所述缓冲液包含tris-hcl缓冲液、磷酸盐pb缓冲液、硼酸盐缓冲液中的至少一种；所述封闭剂包含酪蛋白、牛血清白蛋白中的至少一种。

3.根据权利要求1所述的样品垫处理液，其特征在于，所述缓冲液的浓度为0.1-1m；所述封闭剂的添加量为0.1-1wt%；所述表面活性剂的添加量为1-2wt%。

4.一种非离子双子表面活性剂的制备方法，包括如下步骤：

5.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，甲醇、麦芽糖和磷酸以质量比10-1000：10-500：1-10的比例使用。

6.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，甲醇麦芽糖苷、戌二酸酐和对甲苯甲酸以质量比100-500：100-500：1-10的比例使用。

7.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，甲醇麦芽糖苷戌二酸双酯、2-羟基丁酸和对甲苯甲酸以质量比10-100：100-500：1-10的比例使用。

8.一种样品垫，其特征在于，所述样品垫采用如权利要求1-3任一项所述的样品垫处理液进行处理。

9.根据权利要求8所述的样品垫，其特征在于，所述样品垫的处理包括：

10.权利要求8所述的样品垫在检测肝病标记物chi3l1的胶体金试纸中的应用。

技术总结本发明涉及生物技术领域，具体涉及一种检测肝病标记物CHI3L1的样品垫处理液。该样品垫处理液包括缓冲液、封闭剂和表面活性剂，其中表面活性剂包括一种非离子双子表面活性剂，由甲醇、麦芽糖、戌二酸酐和2‑羟基丁酸制备得到。该非离子双子表面活性剂具有良好的润湿作用，使抗原蛋白容易被润湿，实现与标记的胶体金特异性结合；还能促进标记的胶体金的释放，减少NC膜对标记的胶体金的吸附。将本发明的样品垫处理液对样品垫进行处理，然后将样品垫组装成用于检测肝病标记物CHI3L1的胶体金试纸条，该胶体金试纸条在检测时具有较好的检测灵敏度。技术研发人员：请求不公布姓名受保护的技术使用者：杭州普望生物技术有限公司技术研发日：技术公布日：2024/7/25