一种4-辛基衣康酸在高脂血症模型中对心肌的保护方法

本发明属于有机化学，具体涉及一种4-辛基衣康酸在高脂血症模型中对心肌的保护方法。

背景技术：

1、随着生活质量的提高，伴之不良的生活习惯，高脂血症已成为严重危害人群身体健康的疾病。以往，我们更多关注的是高脂血症，尤其是高胆固醇血症在心脑血管方面的危害。但不容忽视的是高脂血症对心肌组织造成的影响。

2、高脂血症是心血管疾病重要的危险因素之一。高脂血症会导致动脉粥样硬化，严重影响人们的身体健康。在高血脂导致动脉硬化的过程中，炎症反应和氧化应激起着关键作用。在高脂血症动物模型的心肌组织内，研究人员同样发现了炎症反应和氧化应激反应所造成的心肌损伤。

3、nrf2/ho-1是体内重要的抗炎抗氧化因子。nrf2激活后可以通过上调ho-1、、醌氧化还原酶1(nqo-1)等对机体起到抗氧化保护。nrf2/ho-1途径的激活同时具有对抗炎症反应的作用，降低炎性细胞对机体的损伤。

4、衣康酸是一种不饱和有机酸，其和其衍生物在多种实验中表现出了抗炎及抗氧化的作用。更重要的是，实验证明了衣康酸能够激活nrf2，通过nrf2/ho-1途径起到抗炎、抗氧化作用。

技术实现思路

1、本发明要解决的技术问题是克服现有的缺陷，提供一种4-辛基衣康酸在高脂血症模型中对心肌的保护方法，以解决上述背景技术中提出的高脂血症增加心血管疾病的发病风险的问题。

2、为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：一种4-辛基衣康酸在高脂血症模型中对心肌的保护方法，包括以下步骤：

3、步骤一：准备实验材料；

4、步骤二：准备实验所需动物；

5、步骤三：模型组和实验组给予高脂高胆固醇饮食饲养4周，空白组和药物组给予普通小鼠饲料喂养，实验组和药物组每日按照50mg/kg剂量给予腹腔注射4-辛基衣康酸溶液，空白组和模型组给予同样剂量生理盐水腹腔注射，4周后记录体重，并对小鼠腹腔注射戊巴比妥钠(50mg/kg)进行麻醉处理，打开胸腔暴露心脏，心尖区取血，离心后留取血清置于-80℃冻存，将4℃预冷的pbs溶液从左心室注入，用组织剪将右心耳剪掉，将残余血液洗干净后取出心脏；

6、步骤四：取出冻存各组小鼠血清，检测各组小鼠血清中甘油三酯(tg)、总胆固醇(tc)、高密度脂蛋白(hdl)及低密度脂蛋白(ldl)的水平，对结果进行统计分析，比较4-辛基衣康酸对血脂的影响，取出-80℃冻存的心肌组织，每个样本切下少量组织，放入预冷的pbs溶液中清洗掉残存血液及破碎组织；

7、步骤五：取-80℃冻存下的心肌组织，放入预冷pbs溶液中清洗掉残存血液和破碎组织，将心肌组织切成1mm3大小；

8、步骤六：对实验结果进行统计分析。

9、优选的，所述步骤一中，实验材料包括：0.25％胰蛋白酶溶液(美国invitrogen)，bca蛋白定量试剂盒(中国碧云天生物技术有限公司)，ecl发光试剂盒(上海翊盛生物科技有限公司)，he染液试剂盒(中国碧云天生物技术有限公司)，ripa裂解液(强)(中国碧云天生物技术有限公司)，小鼠il-1β、il-6、tnf-αelisa试剂盒(武汉伊莱瑞特生物科技公司)，抗ho-1抗体(英国abcam公司)，抗nrf2抗体(美国thermofisher公司)，抗β-actin抗体(中国sungene生物)。

10、优选的，所述步骤二中，实验所需动物为4周龄雄性c57bl6/j小鼠24只适应性饲养1周后随机分为4组并记录初始体重：空白组(对照组)、模型组、实验组、药物组，每组6只。

11、优选的，所述步骤三中，将取出的每个心脏分为两部分，一部分置于4％多聚甲醛中浸泡，另一部分液氮速冻后置于-80℃冻存，待用作后续实验。

12、优选的，所述步骤三中，取出之前浸泡在4％多聚甲醛溶液中的心脏组织，制作成5μm厚度的石蜡切片，按照常规标准步骤进行苏木精-伊红(he)染色，光镜下观察心肌组织结构变化。

13、优选的，所述步骤四中，将清洗后心肌组织称重切碎，与预冷生理盐水按照质量1:10的比例混合，应用超声匀浆机匀浆。

14、优选的，所述步骤四中，按照elisa试剂盒说明书要求，将匀浆液放入离心机中，4℃、3000转/分钟的条件下离心30分钟，取上清液作为组织匀浆液，按照elisa试剂说明进行操作，通过elisa法测定各样本小鼠心肌组织内的白介素1β(il-1β)、白介素6(il-6)及肿瘤坏死因子α(tnf-α)水平，并通过tba法测定各组小鼠心肌组织丙二醛(mda)水平，分析比较各组小鼠心肌组织内的炎性因子水平和氧化应激水平。

15、优选的，所述步骤五中，将心肌组织放入液氮预冷的研钵中，加入液氮后将心肌组织研磨碎，将碾碎的心肌组织转移到ep管中，按照1mg组织加入10ul裂解液比例加入混合蛋白酶抑制剂的裂解液，使用超声匀浆机进行匀浆，离心后提取组织蛋白液。

16、优选的，所述步骤五中，蛋白印迹实验完成后，用bca试剂盒测定总蛋白浓度。

17、优选的，所述步骤六中，应用graph pad prism9软件进行统计分析并绘图，应用单因素方差分析法进行统计分析，数据满足单因素方差分析条件，数据以平均数±标准差(x±sd)表示。

18、与现有技术相比，本发明提供了一种4-辛基衣康酸在高脂血症模型中对心肌的保护方法，具备以下有益效果：

19、1、本发明通过腹腔注射4-辛基衣康酸是否能够通过激活nrf2/ho-1途径对心肌组织起到保护，本发明通过使用衣康酸作为nrf2的激活剂18，具有良好的抗炎、抗氧化作用，4-辛基衣康酸激活抗氧化因子nrf2，进一步提高机体内ho-1的含量，从而通过nrf2/ho-1路径起到对抗炎症和氧化应激的作用，对机体产生保护作用；

20、2、本发明在高脂血症模型中，观察到对小鼠给予4-辛基衣康酸腹腔注射干预，能够激活小鼠体内nrf2/ho-1路径，从而降低小鼠心肌内丙二醇水平和炎性因子il-1β、il-6以及tnf-α的水平，为高脂血症心肌损伤的研究提供了一个新的方向。

技术特征：

1.一种4-辛基衣康酸在高脂血症模型中对心肌的保护方法，其特征在于：包括以下步骤：

2.根据权利要求1所述的一种4-辛基衣康酸在高脂血症模型中对心肌的保护方法，其特征在于：所述步骤一中，实验材料包括：0.25％胰蛋白酶溶液(美国invitrogen)，bca蛋白定量试剂盒(中国碧云天生物技术有限公司)，ecl发光试剂盒(上海翊盛生物科技有限公司)，he染液试剂盒(中国碧云天生物技术有限公司)，ripa裂解液(强)(中国碧云天生物技术有限公司)，小鼠il-1β、il-6、tnf-αelisa试剂盒(武汉伊莱瑞特生物科技公司)，抗ho-1抗体(英国abcam公司)，抗nrf2抗体(美国thermofisher公司)，抗β-actin抗体(中国sungene生物)。

3.根据权利要求1所述的一种4-辛基衣康酸在高脂血症模型中对心肌的保护方法，其特征在于：所述步骤二中，实验所需动物为4周龄雄性c57bl6/j小鼠24只适应性饲养1周后随机分为4组并记录初始体重：空白组(对照组)、模型组、实验组、药物组，每组6只。

4.根据权利要求1所述的一种4-辛基衣康酸在高脂血症模型中对心肌的保护方法，其特征在于：所述步骤三中，将取出的每个心脏分为两部分，一部分置于4％多聚甲醛中浸泡，另一部分液氮速冻后置于-80℃冻存，待用作后续实验。

5.根据权利要求1所述的一种4-辛基衣康酸在高脂血症模型中对心肌的保护方法，其特征在于：所述步骤三中，取出之前浸泡在4％多聚甲醛溶液中的心脏组织，制作成5μm厚度的石蜡切片，按照常规标准步骤进行苏木精-伊红(he)染色，光镜下观察心肌组织结构变化。

6.根据权利要求1所述的一种4-辛基衣康酸在高脂血症模型中对心肌的保护方法，其特征在于：所述步骤四中，将清洗后心肌组织称重切碎，与预冷生理盐水按照质量1:10的比例混合，应用超声匀浆机匀浆。

7.根据权利要求1所述的一种4-辛基衣康酸在高脂血症模型中对心肌的保护方法，其特征在于：所述步骤四中，按照elisa试剂盒说明书要求，将匀浆液放入离心机中，4℃、3000转/分钟的条件下离心30分钟，取上清液作为组织匀浆液，按照elisa试剂说明进行操作，通过elisa法测定各样本小鼠心肌组织内的白介素1β(il-1β)、白介素6(il-6)及肿瘤坏死因子α(tnf-α)水平，并通过tba法测定各组小鼠心肌组织丙二醛(mda)水平，分析比较各组小鼠心肌组织内的炎性因子水平和氧化应激水平。

8.根据权利要求1所述的一种4-辛基衣康酸在高脂血症模型中对心肌的保护方法，其特征在于：所述步骤五中，将心肌组织放入液氮预冷的研钵中，加入液氮后将心肌组织研磨碎，将碾碎的心肌组织转移到ep管中，按照1mg组织加入10ul裂解液比例加入混合蛋白酶抑制剂的裂解液，使用超声匀浆机进行匀浆，离心后提取组织蛋白液。

9.根据权利要求1所述的一种4-辛基衣康酸在高脂血症模型中对心肌的保护方法，其特征在于：所述步骤五中，蛋白印迹实验完成后，用bca试剂盒测定总蛋白浓度。

10.根据权利要求1所述的一种4-辛基衣康酸在高脂血症模型中对心肌的保护方法，其特征在于：所述步骤六中，应用graphpadprism9软件进行统计分析并绘图，应用单因素方差分析法进行统计分析，数据满足单因素方差分析条件，数据以平均数±标准差(x±sd)表示。

技术总结本发明公开了一种4‑辛基衣康酸在高脂血症模型中对心肌的保护方法，本发明通过腹腔注射4‑辛基衣康酸是否能够通过激活Nrf2/HO‑1途径对心肌组织起到保护，本发明通过使用衣康酸作为Nrf2的激活剂18，具有良好的抗炎、抗氧化作用，4‑辛基衣康酸激活抗氧化因子Nrf2，进一步提高机体内HO‑1的含量，从而通过Nrf2/HO‑1路径起到对抗炎症和氧化应激的作用，对机体产生保护作用，在高脂血症模型中，观察到对小鼠给予4‑辛基衣康酸腹腔注射干预，能够激活小鼠体内Nrf2/HO‑1路径，从而降低小鼠心肌内丙二醇水平和炎性因子IL‑1β、IL‑6以及TNF‑α的水平，为高脂血症心肌损伤的研究提供了一个新的方向。技术研发人员：孟春,刘晓红,郝杰受保护的技术使用者：潍坊医学院附属医院技术研发日：技术公布日：2024/7/25