NCOA7环状RNA纳米脂质体在制备治疗卵巢早衰或卵巢储备功能减退相关药物中的应用

本发明属于生物医药，具体涉及ncoa7环状rna纳米脂质体在制备治疗卵巢早衰或卵巢储备功能减退相关药物中的应用。

背景技术：

1、公开该背景技术部分的信息仅仅旨在增加对本发明的总体背景的理解，而不必然被视为承认或以任何形式暗示该信息构成已经成为本领域一般技术人员所公知的现有技术。

2、对于大部分正常女性，以卵巢老化为标志的生殖衰老，一般发生在45至55岁之间。但卵巢早衰或卵巢储备功能减退(diminished ovarian reserve，dor)逐渐成为育龄期女性不孕的最主要发病原因之一。卵巢作为女性生殖系统的重要组成，卵巢衰老会促进全身性的衰老，导致心血管疾病、全因死亡率及神经退行性疾病风险大幅增加，最终缩短女性的预期寿命。因此及时并安全有效地挽救生理性卵巢衰老或者dor女性的卵巢功能和生育力具有重要意义。探寻有效的的治疗方案并延缓这一进程，对女性而言，意义重大。

3、颗粒细胞在维持卵巢的生理功能、保障女性的生殖健康方面发挥重要作用。颗粒细胞是与卵母细胞直接接触的唯一体细胞，同时也是雌孕激素的主要来源，其形态和功能的变化直接影响卵母细胞的生长和分裂。作为卵泡内主要的功能细胞，通过与卵母细胞双向的信息物质交流，调控卵泡的发育成熟和排卵受精过程。然而，颗粒细胞自噬活性异常会引起卵泡异常募集和闭锁，在dor的发生发展中起主导作用。

技术实现思路

1、为了解决现有技术的不足，本发明的目的是提供ncoa7环状rna纳米脂质体在制备治疗卵巢早衰或卵巢储备功能减退相关药物中的应用。本发明的发明人发现核受体共激活子7(ncoa7)能够缓解卵巢衰老，明显改善dor患者的卵巢功能和生育力。对此，发明人设计了脂质纳米颗粒(lipid nanoparticles，lnps)搭载ncoa7环状rna的ncoa7环状rna纳米脂质体，进一步探索ncoa7环状rna-lnps能否安全有效的干预卵巢衰老进程。本发明通过制备加入ncoa7 mrna-lnps的培养基、体外培养dor患者卵巢颗粒细胞，安全有效的提高卵巢颗粒细胞中ncoa7的表达水平，改善卵巢颗粒细胞生长活性、减轻卵巢颗粒细胞衰老表型，从而提供了一种简单、安全且有效的挽救卵巢颗粒细胞衰老的治疗方法，为dor的治疗提供了参考，具有良好的实际应用价值。

2、为了实现上述目的，本发明的技术方案为：

3、本发明的第一个方面，提供促进ncoa7基因表达或促进ncoa7基因表达产物的试剂在制备治疗卵巢早衰或卵巢储备功能减退药物中的应用。

4、在本发明的一些实施例中，所述促进ncoa7基因表达或促进ncoa7基因表达产物的试剂包括但不限于核酸分子、碳水化合物、脂类、小分子化学药、抗体药、多肽、蛋白或干扰慢病毒；；优选的，所述核酸分子包括但不限于：反义寡核苷酸、双链rna(dsrna)、小干扰rna(sirna)或者短发夹rn(shrna)。

5、优选的，所述促进ncoa7基因表达或促进ncoa7基因表达产物的试剂为ncoa7环状rna纳米脂质体；

6、所述ncoa7环状rna纳米脂质体包括：脂质纳米颗粒和被脂质纳米颗粒封装的ncoa7环状rna；

7、所述ncoa7环状rna的核酸序列为：

8、gggtacacggacagaccatttattttcattgcaaaaaaaaaaa

9、aaaccaaaaaaaaaaaacaaaaaaaaaaaataattgactaatt

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91、tcctccccttcctgcacccgtacccccgtggtctttgaataaag

92、tctgagtgggcggcaggtctgtccgtgcatagcaacccgggaaccgggttgcaatgaattcggatc(seq id no.1)；

93、所述脂质纳米颗粒由可电离阳离子脂质、磷脂、胆固醇以及聚乙二醇脂质混合而成。

94、在本发明的一些实施例中，所述ncoa7环状rna纳米脂质体的制备方法包括如下步骤：

95、将可电离阳离子脂质、磷脂、胆固醇以及聚乙二醇脂质按摩尔比40:16:41.5:2.5溶于乙醇中，得到溶液a，可电离阳离子脂质的浓度为5mg/ml；

96、采用缓冲液稀释ncoa7环状rna，得到溶液b；

97、将溶液a和溶液b混合，得到ncoa7环状rna纳米脂质体；所得ncoa7环状rna纳米脂质体在depc-pbs溶液中透析以去除乙醇和游离ncoa7环状rna。

98、其中，所述可电离阳离子脂质为ppz-a10，所述磷脂为二亚油酰基磷脂乙醇胺，所述聚乙二醇脂质为dmg-peg 2000。

99、其中，所述缓冲液为ph＝4的枸橼酸-磷酸氢二钠缓冲液。

100、其中，所述透析的mwco为100kda，透析10-15h。

101、在本发明的一些实施例中，所述药物如有如下任意一种或多种功能：

102、(1)提高卵巢颗粒细胞中ncoa7的表达；

103、(2)降低卵巢颗粒细胞中β-半乳糖苷酶含量；

104、(3)提高卵巢颗粒细胞的生长速率；

105、(4)降低卵巢颗粒细胞中il-1β、il8、mmp3、ccl2的表达水平；

106、(5)降低卵巢颗粒细胞中细胞周期相关因子p21、p16的表达水平；

107、(6)改善卵巢颗粒细胞生长活性；

108、(7)改善卵巢颗粒细胞衰老。

109、在本发明的一些实施例中，所述ncoa7基因及所述ncoa7基因表达产物均为人源。

110、本发明的第二个方面，提供一种ncoa7环状rna纳米脂质体，其包括：脂质纳米颗粒和被脂质纳米颗粒封装的ncoa7环状rna；

111、所述ncoa7环状rna的核酸序列如seq id no.1所示；

112、所述脂质纳米颗粒由可电离阳离子脂质、磷脂、胆固醇以及聚乙二醇脂质混合而成。

113、本发明的第三个方面，提供一种第二个方面所述的ncoa7环状rna纳米脂质体的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：

114、将可电离阳离子脂质、磷脂、胆固醇以及聚乙二醇脂质按摩尔比40:16:41.5:2.5溶于乙醇中，得到溶液a，可电离阳离子脂质的浓度为5mg/ml；

115、采用缓冲液稀释ncoa7环状rna，得到溶液b；

116、将溶液a和溶液b混合，得到ncoa7环状rna纳米脂质体；所得ncoa7环状rna纳米脂质体在depc-pbs溶液中透析以去除乙醇和游离ncoa7环状rn。

117、其中，所述可电离阳离子脂质为ppz-a10，所述磷脂为二亚油酰基磷脂乙醇胺，所述聚乙二醇脂质为dmg-peg 2000。

118、其中，所述缓冲液为ph＝4的枸橼酸-磷酸氢二钠缓冲液。

119、其中，所述透析的mwco为100kda，透析10-15h。

120、本发明的第四个方面，提供一种药物组合物，所述药物组合物的活性物质为第二个方面所述的ncoa7环状rna纳米脂质体。

121、在本发明的一些实施例中，所述药物组合物还包括药学上可接受的辅料。本领域技术人员可选择制成不同剂型所需的辅料，采用本领域熟知的方法将所述药物组合物制成不同的剂型，如注射剂、粉针剂等。

122、本发明的第五个方面，提供第四个方面所述的药物组合物在制备治疗卵巢早衰或卵巢储备功能减退药物中的应用。

123、与现有技术相比，本发明的有益效果为：

124、1.本发明证明核受体共激活子7(ncoa7)能够缓解卵巢衰老，明显改善dor患者的卵巢功能和生育力。

125、2.为了延缓女性生殖衰老，逆转dor所致的生育困局，本发明提供了一种ncoa7环状rna纳米脂质体，通过其治疗挽救dor患者的卵巢颗粒细胞衰老。本发明经过研究发现，ncoa7环状rna纳米脂质体治疗能够明显提高dor女性卵巢颗粒细胞的ncoa7蛋白表达水平，改善其衰老表型及生长速率，并且对卵巢颗粒细胞的生物学特性等不产生显著影响。这为挽救dor女性的卵巢功能和改善生育力提供了新的方案，具有很好的应用前景。