一种具有舒缓控油抑菌功效的青蒿发酵产物的制备方法及其产品和应用与流程

本发明属于物质提取，涉及一种具有舒缓控油抑菌功效的青蒿发酵产物的制备方法及其产品和应用。

背景技术：

1、青蒿作为我国传统中药，始见于《五十二病方》，后在多个本草典籍中均有收录，广泛分布于我国重庆、安徽、湖北、山东等地，青蒿作为传统中医用药主要用来治疗发热和风寒，在《神农百草经》、《肘后备急方》、《本草纲目》中均有记载。黄花蒿具有清热解毒、凉血、健胃等功效，含有黄酮、多糖、多酚、挥发油等多种生物活性成分。

2、青蒿发酵多应用于食品保健品领域，其发酵提取产物尚无在化妆品领域中的应用。植物经过发酵后会产生有显著护肤功效的活性物质，我国拥有丰富的中草药资源，已有不少研究报道通过中草药的微生物发酵得到护肤功效显著的化妆品原料。然而对于青蒿发酵利用的研究较为有限。

技术实现思路

1、针对现有技术的不足，本发明的目的在于提供一种具有舒缓控油抑菌功效的青蒿发酵产物的制备方法及其产品和应用。

2、为达到此发明目的，本发明采用以下技术方案：

3、第一方面，本发明提供一种具有舒缓控油抑菌功效的青蒿发酵产物的制备方法，所述制备方法包括：

4、（1）向含有青蒿的培养基中接种短双歧杆菌菌液、酿酒酵母菌液，发酵，得到第一发酵产物；

5、（2）将第一发酵产物灭菌，冷却后接种枯草芽孢杆菌菌液，发酵，得到第二发酵产物；

6、（3）将第二发酵产物离心，除菌，即得。

7、本发明采用多重发酵即采用短双歧杆菌、酿酒酵母和枯草芽孢杆菌进行发酵，不添加任何有机试剂，发酵条件温和，保持植物的天然活性，避免了提取方法造成的活性成分流失。短双歧杆菌和酿酒酵母间存在着相互配合的效果，两种菌株同时用于发酵的效果更优。

8、短双歧杆菌发酵青蒿、黄花蒿，有助于青蒿酸、有机酸的产生和多糖类物质的富集，与发酵滤液中的益生菌发酵产物成分具有协同作用，同时再使用内生菌枯草芽孢杆菌（bacillus subtilis）进行二次发酵，从而具有显著地抗氧化及舒缓敏感和控油抗炎抑菌功效。

9、优选地，所述含有青蒿的培养基的制备方法包括：

10、（1）将青蒿3-5份、黄花蒿1-3份、马齿苋1-2份、苦参1-2份粉碎，与10-15份水混合研磨，得到浆体；

11、（2）将浆体酶解，得到酶解液；

12、（3）将酶解液与碳源0.2-2.5份、无机盐0.05-0.1份、菊粉0.5-1份和水70-80份混合，灭菌，即得。

13、所述青蒿的质量份数可以选择3份、3.2份、3.4份、3.6份、3.8份、4份、4.2份、4.4份、4.6份、4.8份、5份等，黄花蒿的质量份数可以选择1份、1.2份、1.4份、1.6份、1.8份、2份、2.2份、2.4份、2.6份、2.8份、3份等，马齿苋的质量份数可以选择1份、1.1份、1.2份、1.3份、1.4份、1.5份、1.6份、1.7份、1.8份、1.9份、2份等，苦参的质量份数可以选择1份、1.1份、1.2份、1.3份、1.4份、1.5份、1.6份、1.7份、1.8份、1.9份、2份等，步骤（1）中水的质量份数可以选择10份、11份、12份、13份、14份、15份等，碳源的质量份数可以选择0.2份、0.5份、0.8份、1份、1.2份、1.5份、1.8份、2份、2.2份、2.5份等，无机盐的质量份数可以选择0.05份、0.06份、0.07份、0.08份、0.09份、0.1份等，菊粉的质量份数可以选择0.5份、0.55份、0.6份、0.65份、0.7份、0.75份、0.8份、0.85份、0.9份、0.95份、1份等，水的质量份数可以选择70份、71份、72份、73份、74份、75份、76份、77份、78份、79份、80份等，上述数值范围内其他具体点值均可选择，在此便不再一一赘述。

14、本发明创造性地发现，青蒿、黄花蒿、马齿苋、苦参在提升发酵产物舒缓控油抑菌的效果上具有潜在的协同效果。缺少其中任何一种，效果均不好。

15、优选地，所述碳源包括甘露醇，无机盐包括磷酸二氢钾和硫酸镁。

16、本发明发现，甘露醇作为碳源时，效果比其他碳源更优。

17、优选地，所述与酶混合的温度为40-50℃，时间为1-2 h。

18、所述温度可以选择40℃、41℃、42℃、43℃、44℃、45℃、46℃、47℃、48℃、49℃、50℃等，时间可以选择1 h、1.1 h、1.2 h、1.3 h、1.4 h、1.5 h、1.6 h、1.7 h、1.8 h、1.9 h、2h等，上述数值范围内其他具体点值均可选择，在此便不再一一赘述。

19、优选地，所述酶的添加量为50000-100000 u/g，例如50000 u/g、55000 u/g、60000u/g、65000 u/g、70000 u/g、75000 u/g、80000 u/g、85000 u/g、90000 u/g、95000 u/g、100000 u/g等，上述数值范围内其他具体点值均可选择，在此便不再一一赘述。

20、优选地，所述酶包括纤维素酶、果胶酶或蛋白酶中的任意一种或至少两种的组合。

21、优选地，所述酶为纤维素酶、果胶酶和蛋白酶的组合。

22、优选地，所述纤维素酶、果胶酶、蛋白酶的酶活比为(2-3):(1-2):(1-2)。

23、其中(2-3)中的具体点值均可选择2、2.1份、2.2份、2.3份、2.4.份、2.5份、2.6份、2.7份、2.8份、2.9份、3份等，(1-2)中的具体点值均可选择1份、1.1份、1.2份、1.3份、1.4份、1.5份、1.6份、1.7份、1.8份、1.9份、2份等，上述数值范围内其他具体点值均可选择，在此便不再一一赘述。

24、优选地，培养基灭菌的温度为115-121℃，时间为15-20 min。

25、所述温度可以选择115℃、116℃、117℃、118℃、119℃、120℃、121℃等，时间可以选择15 min、16 min、17 min、18 min、19 min、20 min等，上述数值范围内其他具体点值均可选择，在此便不再一一赘述。

26、优选地，所述含有青蒿的培养基的ph为6-7，例如6、6.1、6.2、6.3、6.4、6.5、6.6、6.7、6.8、6.9、7等，上述数值范围内其他具体点值均可选择，在此便不再一一赘述。

27、优选地，所述酿酒酵母菌液的活菌数为(1×106) cfu/ml-(5×106) cfu/ml，接种量为3-5%。

28、活菌数可以选择1×106 cfu/ml、1.2×106 cfu/ml、1.5×106 cfu/ml、1.8×106cfu/ml、2×106 cfu/ml、2.2×106 cfu/ml、2.5×106 cfu/ml、2.8×106 cfu/ml、3×106cfu/ml、3.2×106 cfu/ml、3.5×106 cfu/ml、3.8×106 cfu/ml、4×106 cfu/ml、4.2×106cfu/ml、4.5×106 cfu/ml、4.8×106 cfu/ml、5×106 cfu/ml等，接种量可以选择3%、3.2%、3.4%、3.6%、3.8%、4%、4.2%、4.4%、4.6%、4.8%、5%等，上述数值范围内其他具体点值均可选择，在此便不再一一赘述。

29、优选地，所述短双歧杆菌菌液的活菌数为(1×106) cfu/ml-(5×106) cfu/ml，接种量为3-5%。

30、活菌数可以选择1×106 cfu/ml、1.2×106 cfu/ml、1.5×106 cfu/ml、1.8×106cfu/ml、2×106 cfu/ml、2.2×106 cfu/ml、2.5×106 cfu/ml、2.8×106 cfu/ml、3×106cfu/ml、3.2×106 cfu/ml、3.5×106 cfu/ml、3.8×106 cfu/ml、4×106 cfu/ml、4.2×106cfu/ml、4.5×106 cfu/ml、4.8×106 cfu/ml、5×106 cfu/ml等，接种量可以选择3%、3.2%、3.4%、3.6%、3.8%、4%、4.2%、4.4%、4.6%、4.8%、5%等，上述数值范围内其他具体点值均可选择，在此便不再一一赘述。

31、优选地，所述枯草芽孢杆菌菌液的活菌数为(1×107) cfu/ml-(5×107) cfu/ml，接种量为2-4%。

32、活菌数可以选择1×107 cfu/ml、1.2×107 cfu/ml、1.5×107 cfu/ml、1.8×107cfu/ml、2×107 cfu/ml、2.2×107 cfu/ml、2.5×107 cfu/ml、2.8×107 cfu/ml、3×107cfu/ml、3.2×107 cfu/ml、3.5×107 cfu/ml、3.8×107 cfu/ml、4×107 cfu/ml、4.2×107cfu/ml、4.5×107 cfu/ml、4.8×107 cfu/ml、5×107 cfu/ml等，接种量可以选择2%、2.2%、2.4%、2.6%、2.8%、3%、3.2%、3.4%、3.6%、3.8%、4%等，上述数值范围内其他具体点值均可选择，在此便不再一一赘述。

33、优选地，步骤（1）中发酵的温度为30-35℃，时间为12-16 h，ph为5-6。

34、所述温度可以选择30℃、31℃、32℃、33℃、34℃、35℃等，时间可以选择12 h、12.5h、13 h、13.5 h、14 h、14.5 h、15 h、15.5 h、16 h等，ph可以选择5、5.1、5.2、5.3、5.4、5.5、5.6、5.7、5.8、5.9、6等，上述数值范围内其他具体点值均可选择，在此便不再一一赘述。

35、优选地，步骤（1）在无氧条件下进行发酵。

36、优选地，步骤（1）所述发酵在搅拌条件下进行，搅拌的转速为60-100 rpm，例如60rpm、65 rpm、70 rpm、75 rpm、80 rpm、85 rpm、90 rpm、95 rpm、100 rpm等，上述数值范围内其他具体点值均可选择，在此便不再一一赘述。

37、优选地，步骤（2）所述灭菌的温度为80-85℃，时间为15-20 min。

38、所述温度可以选择80℃、80.5℃、81℃、81.5℃、82℃、82.5℃、83℃、83.5℃、84℃、84.5℃、85℃等，时间可以选择15 min、16 min、17 min、18 min、19 min、20 min等，上述数值范围内其他具体点值均可选择，在此便不再一一赘述。

39、优选地，步骤（2）中发酵的温度为35-36℃，时间为20-28 h，ph为6-6.5。

40、所述温度可以选择35℃、35.2℃、35.4℃、35.6℃、35.8℃、36℃等，时间可以选择20 h、21 h、22 h、23 h、24 h、25 h、26 h、27 h、28 h等，ph为6.1、6.2、6.3、6.4、6.5等，上述数值范围内其他具体点值均可选择，在此便不再一一赘述。

41、优选地，步骤（2）在发酵过程中通入空气，通气量为10-20 m3/h，例如10 m3/h、11m3/h、12 m3/h、13 m3/h、14 m3/h、15 m3/h、16 m3/h、17 m3/h、18 m3/h、19 m3/h、20 m3/h等，上述数值范围内其他具体点值均可选择，在此便不再一一赘述。

42、优选地，步骤（3）所述离心的转速为8000-10000 rpm，时间为4-6 min。

43、所述转速可以选择8000 rpm、8200 rpm、8400 rpm、8600 rpm、8800 rpm、9000rpm、9200 rpm、9400 rpm、9600 rpm、9800 rpm、10000 rpm等，时间可以选择4 min、4.2min、4.4 min、4.6 min、4.8 min、5 min、5.2 min、5.4 min、5.6 min、5.8 min、6 min等，上述数值范围内其他具体点值均可选择，在此便不再一一赘述。

44、优选地，所述除菌的方法为过滤除菌。

45、第二方面，本发明提供一种根据第一方面所述的具有舒缓控油抑菌功效的青蒿发酵产物的制备方法制备得到的青蒿发酵产物。

46、第三方面，本发明提供一种根据第二方面所述的青蒿发酵产物在制备化妆品中的应用。

47、优选地，所述化妆品中青蒿发酵产物的添加量为化妆品质量的1-3%，例如1%、1.2%、1.4%、1.6%、1.8%、2%、2.2%、2.4%、2.6%、2.8%、3%等，上述数值范围内其他具体点值均可选择，在此便不再一一赘述。

48、与现有技术相比，本发明具有如下有益效果：

49、本发明采用多重发酵即采用短双歧杆菌、酿酒酵母和枯草芽孢杆菌进行发酵，不添加任何有机试剂，发酵条件温和，保持植物的天然活性，避免了提取方法造成的活性成分流失。

50、短双歧杆菌发酵青蒿、黄花蒿，有助于青蒿酸、有机酸的产生和多糖类物质的富集，与发酵滤液中的益生菌发酵产物成分具有协同作用，同时再使用内生菌枯草芽孢杆菌（bacillus subtilis）进行二次发酵，从而具有显著地抗氧化及舒缓敏感和控油抗炎抑菌功效。