ActivinA在制备NEC诊断试剂和治疗药物中的用途

本发明涉及生物医药，特别是涉及activin a在制备新生儿坏死性小肠结肠炎诊断试剂和治疗药物中的用途。

背景技术：

1、新生儿坏死性小肠结肠炎(neonatal necrotizing enterocolitis，nec)是新生儿期常见且极为严重的胃肠道急重症，主要见于早产儿和低出生体重的新生儿，是新生儿特有的一种疾病，其特点是肠道损伤由黏膜损伤到全层坏死、穿孔等不同程度的损伤。据统计，妊娠≤33w或出生体重≤2500g的婴儿nec发病率高达13％，nec死亡率约为20％～30％；接受手术的儿童死亡率高达50％。当前，nec的临床诊断和治疗仍面临诸多困境。诊断方面，目前主要依据临床表现和影像学检查，由于临床表现不特异，且受限于医务人员的医疗水平，易发生漏诊或误诊；影像学检测可以较准确的发现合并肠穿孔以及大面积肠坏死的情况，但很难做到早期诊断。目前尚无用于nec诊断的血清学标志物，当肠道病变发生在分子层面、细胞层面或局部组织层面等微观情况时，影像学无法辨别，但某些血清学生物标志物会发生显著改变，通过检测血液或体液中的生物标志物可以早期及时诊断，做到早诊断早治疗。目前nec的临床治疗仍以内科保守治疗为主要方式，因为手术治疗的患儿在术后往往会并发诸多的并发症，如短肠综合症、胆汁淤积、生长显著受损以及神经发育不良等疾病。此外，这些婴儿需要长期护理，治疗复杂且花费高昂。因此，仅当合并肠穿孔或内科保守治疗无效或疾病进展，需进行外科手术治疗。目前公认的观点是，早期及时治疗仍然是提高nec患儿生存率的最佳方式。因此，发现新型标志物用于nec的早期诊断和免疫新疗法对nec的临床治疗具有重要意义。

2、激活素(activin)是一种多功能的细胞因子，属于转化生长因子β(transforminggrowth factor-β,tgf-β)超家族，该家族的其他成员还包括抑制素(inhibin)、骨形态发生蛋白(bmps)、生长分化因子(gdfs)等。其中，激活素a(activin a)是一种由两个βa亚基组成的二聚体蛋白。有研究表明激活素参与了机体的多种生理和病理过程，包括炎症，代谢，体内平衡，修复，细胞保护作用，免疫应答和内分泌调节等功能。作为激活素家族最丰富的成员，activin a表达的增加与多种炎症、自身免疫性疾病的进展有关，包括炎症性肠病、脑膜炎、类风湿性关节炎等。然而，activin a在nec中的作用仍不清楚。本技术发明人近期研究发现activin a在nec期间，在病变肠组织中表达水平增高，是潜在的诊断标志物；并进一步通过动物实验和细胞实验揭示了activin a通过诱导小肠上皮细胞凋亡而促进肠组织损伤，而阻断activin a可有效治疗nec介导的肠损伤，提示其是nec的治疗新靶点。基于此，我们提出activin a作为nec的新型标志物在nec诊断和治疗中具有重要临床意义。

技术实现思路

1、鉴于以上所述现有技术的缺点，本发明的目的在于提供activin a在制备nec诊断试剂和治疗药物中的用途，通过探讨activin a在nec中的作用，研究activin a中和抗体对nec的干预作用，为临床上nec的诊断、预后、疗效评估以及治疗提供一个具有潜在和良好应用价值的新靶点和新策略。

2、为实现上述目的及其他相关目的，本发明第一方面提供activin a作为生物标志物在制备nec诊断试剂、预后试剂或疗效评估试剂中的用途。

3、在一些实施例中，所述试剂用于测定血液体液样品和/或组织样本中activin a的浓度。

4、在一些实施例中，所述试剂检测activin a浓度的方法包括但不限于酶联免疫吸附实验(enzyme linked immunosorbent assay,elisa)法、化学发光法、免疫比浊法、免疫荧光法、胶体金法、质谱法、微流控芯片法等。

5、在一些实施例中，所述体液样品和/或组织样本中activin a的浓度与nec的严重程度正相关。

6、在一些实施例中，所述血液样本包括但不局限于血清、血浆、全血等。

7、在一些实施例中，所述体液样本包括但不局限于尿液、脑脊液、胸水、腹水等。

8、在一些实施例中，所述组织样本包括但不局限于肠组织等。

9、在一些实施例中，所述试剂用于诊断或监测nec的存在和/或过程和/或严重程度和/或预后。

10、本发明第二方面提供activin a中和抗体和/或activin a的其他潜在抑制剂和/或阻断剂在制备用于改善和/或治疗nec的药物中的用途。

11、在一些实施例中，所述药物的有效成分包括以下组分中的至少一种：activin a中和抗体，除activin a中和抗体之外的用于抑制和/或阻断activin a表达或活性的物质，activin a中和抗体经化学修饰后所得的衍生物，除activin a中和抗体之外的用于抑制和/或阻断activin a表达或活性的物质经化学修饰后所得的衍生物。所述化学修饰会改变蛋白质的结构，从而影响蛋白质的稳定性、生物活性和功能，但不会影响蛋白质主要功能，同时，所述化学修饰的目的是为了进一步有效控制和提高药物质量和安全性，例如，氧化修饰、糖基化、磷酸化、乙酰化等。

12、在一些实施例中，所述药物具有以下功效(ⅰ)至(ⅲ)中的至少一种：

13、(ⅰ)抑制nec介导的炎症因子的表达和释放；

14、(ⅱ)减少nec诱导的肠上皮细胞凋亡；

15、(ⅲ)减轻肠道损伤。

16、在一些实施例中，所述nec介导的炎症因子包括但不局限于白细胞介素-6(interleukin-6，il-6)、白细胞介素1β(interleukin-1β，il-1β)等。

17、在一些实施例中，所述药物通过下调促凋亡因子的表达和/或活化水平和/或上调抗凋亡因子的表达和/或活化水平以减少肠上皮细胞凋亡，所述促凋亡因子包括但不局限于bax、cleaved-caspase 9等，所述抗凋亡因子包括但不局限于bcl-2等。

18、在一些实施例中，所述药物使用时，所述有效成分的有效给药剂量不低于50μg/kg体重。

19、在一些实施例中，所述药物可以为单成分物质，亦可为复方制剂。

20、在一些实施例中，所述药物还包括药学上可接受的载体和/或辅料。

21、在一些实施例中，所述药物的形式无特殊限制，可以为固体、液体、凝胶、半流质、气雾等各种物质形式。

22、在一些实施例中，所述药物主要针对的对象为哺乳动物，所述哺乳动物优选为啮齿目动物、偶蹄目动物、奇蹄目动物、兔形目动物、灵长目动物等，所述灵长目动物优选为猴、猿或人。

23、在一些实施例中，所述药物的给药形式可以比较丰富，可以是胃肠道给药亦可以是非胃肠道给药。一般推荐针对各化学药物的已知给药途径给药，如静脉注射、腹腔注射、肌肉注射、皮下注射等。在动物学实验中，通常采用腹腔注射或尾静脉注射，腹腔注射操作简单；而对于人类nec的治疗，通常采用静脉注射或其他的方式。

24、如上所述，本发明的activin a在制备nec诊断试剂和治疗药物中的用途，具有以下有益效果：

25、本发明首次发现activin a在nec期间表达水平升高并促进了nec的发生发展。基于此，本发明进一步研究并探讨了activin a中和抗体对nec的治疗作用，发现activin a中和抗体能显著抑制nec介导的炎症因子的表达和释放，有效减轻肠上皮细胞的凋亡，显著改善nec肠道损伤。因此，本发明提出了activin a作为生物标志物和治疗靶点在nec中的用途，为nec的诊断试剂和治疗nec原创新药的研发和制备提供了依据，为nec的临床内科治疗提供了新策略，对nec治疗具有重要意义。