一种同时构建焦虑和记忆受损小鼠模型的方法

本发明涉及一种可同时构建焦虑小鼠模型、记忆受损小鼠模型的方法，属于医疗评价、检测。

背景技术：

1、在小鼠建模中，不同疾病对应有不同的小鼠模型，如抑郁症小鼠模型、自闭症小鼠模型、急性淋巴细胞白血病小鼠模型、原发性肝癌小鼠模型、焦虑小鼠模型等。药物注射、对小鼠进行打击都是建立这些模型常用的方法。

2、现有的小鼠精神疾病模型的建立，主要是通过药物注射建立。但是注射药物之后，小鼠分子水平的表达也会受到影响，当我们在研究其他因素对精神疾病的影响时，就会受到药物的影响，导致一些分子水平的变化可能并不符合原来的变化趋势。因此，有必要寻找一种不对小鼠进行药物注射的新的小鼠建模方法，以避免注射药物带来的影响，使其他因素对精神疾病影响的研究更加精确。

技术实现思路

1、本发明所要解决的技术问题是，提供一种新的小鼠模型构建方法，该方法对小鼠不注射药物、不进行外来打击，且可同时构建焦虑小鼠模型和记忆受损小鼠模型。

2、为解决以上技术问题，本发明公开了一种同时构建焦虑和记忆受损小鼠模型的方法，该方法包括如下步骤，

3、(1)适应性喂养：随机分两组小鼠进行适应性喂养，两组采用相同的喂养条件，喂养环境温度22-26℃、湿度40-60％rh，光照和黑夜各12h交替进行，喂养一周；

4、(2)经步骤(1)适应性喂养后的两组小鼠分为对照组和实验组，对照组在温度22-26℃、湿度40-60％rh的环境下进行饲养，实验组在温度33-36℃、湿度80-95％rh的环境下进行饲养，光照和黑夜各12h交替进行，连续饲养时间至少四周；

5、(3)小鼠的行为学检测：经步骤(2)喂养后的对照组和实验组小鼠分别进行高架十字迷宫、旷场实验、y迷宫和新物体识别实验的行为学检测。

6、进一步地，步骤(1)中的适应性喂养以及步骤(2)的对照组的饲养环境均为spf级实验动物房；步骤(2)的实验组饲养环境为人工气候箱。spf(specific pathogen free)级实验动物，即无特定病原体动物，不携带主要潜在感染或条件致病和对科学实验干扰大的病原的实验动物。spf级实验动物房，即是能提供能够满足该级别的实验动物在屏障系统或者隔离系统中的场所。spf级实验动物房实行严格的微生物控制，并且实验环境严格控制人员、物品、和空气的进出。

7、进一步地，步骤(1)中的适应性喂养以及步骤(2)对照组和实验组饲养时，小鼠自由进食和饮水，两组小鼠所用饲料和饮水保持一致。

8、进一步地，步骤(3)中，所述高架十字迷宫的行为学检测具体为，将小鼠头朝开臂放置于十字迷宫正中心，从小鼠进入迷宫后计时，监测仪器自动监测5min内小鼠进入开臂的次数和时间。

9、进一步地，步骤(3)中，所述旷场实验的行为学检测具体为，将小鼠放置于旷场正中心，从小鼠进入旷场后计时，监测仪器自动监测5min-10min内小鼠在旷场中心的时间及在旷场的运动距离。

10、进一步地，步骤(3)中，所述y迷宫行为学检测具体为，将小鼠头朝y迷宫两臂交界处放下，从小鼠进入y迷宫开始计时，监测5min-10min内小鼠进入各个臂的顺序，若连续三次不重复进入同一个臂记为正确，然则相反，然后记录自发交替次数，根据记录的自发交替次数计算自发交替率，自发交替率(％)＝[(自发交替次数)/(总进臂次数-2)]×100％。

11、进一步地，步骤(3)中，所述新物体识别的行为学检测具体为，第一天小鼠在没有物体的测试室习惯5min-10min，再送回原饲养环境中；第二天将小鼠放回测试室，在两个原始物体存在的情况下，采集视频5min-10min，再将小鼠送回原饲养环境中；第三天，将小鼠放回测试室，在一个原始物体和一个新物体存在的情况下呆5min-10min，仪器自动监测该5min-10min内小鼠探索新物体和原始物体的次数和时间，第一天测试室习惯所用时间、第二天采集视频时间、第三天小鼠探索新物体和原始物体的被监测时间的时长保持一致。根据监测得到的新物体探索时间和原始物体探索时间计算新物体辨别指数，新物体辨别指数(％)＝新物体探索时间/(新物体探索时间+原始物体探索时间)×100％，辨别指数大于50％时表明动物更多地关注新物体。

12、进一步地，测试室至少为50×50×40cm3大小的方形空间，也可采用100×100×40m3的方形空间，原始物体和新物体形状具有明显差异。

13、进一步地，所述小鼠为6-8周的处于青春期的小鼠。

14、进一步地，步骤(1)中的光照时间为早上8:00-晚上8:00，黑夜时间为晚上8:00-早上8:00。

15、本发明通过调控小鼠生存温度和湿度，经一定周期，即连续高温高湿刺激，观测到小鼠的焦虑程度和记忆均发生了变化，成功建立了小鼠焦虑模型和小鼠记忆受损模型。我国约有超过55％的地区属于高温高湿环境并且每年湿热天气的天数有逐年增加的趋势。人们的生产和生活受到热的影响，体温调节有关的生理机能紧张，心理状态失衡，严重威胁职业健康和人身安全。因此，本发明通过高温高湿刺激构建小鼠模型具有现实意义，为后期调控高温高湿给人们带来不利影响提供了实验基础。

16、本发明提供的小鼠模型的构建方法，采用的是外在环境刺激，对小鼠不进行药物注射，避免了在研究其他因素对精神疾病影响时受到所注射的药物的影响，避免了一些分子水平的变化可能引起的并不符合精神疾病原来变化趋势的发生。本发明对小鼠不造成伤害，小鼠进行了人道主义保护，更加人性化。

技术特征：

1.一种同时构建焦虑和记忆受损小鼠模型的方法，其特征在于：该方法包括如下步骤，

2.根据权利要求1所述的同时构建焦虑和记忆受损小鼠模型的方法，其特征在于：步骤(1)中的适应性喂养以及步骤(2)的对照组的饲养环境均为spf级实验动物房；步骤(2)的实验组的饲养环境为人工气候箱。

3.根据权利要求1所述的同时构建焦虑和记忆受损小鼠模型的方法，其特征在于：步骤(1)中的适应性喂养以及步骤(2)中的对照组和实验组饲养时，小鼠自由进食和饮水，两组小鼠所用饲料和饮水保持一致。

4.根据权利要求1所述的同时构建焦虑和记忆受损小鼠模型的方法，其特征在于：步骤(3)中，所述高架十字迷宫的行为学检测具体为，将小鼠头朝开臂放置于十字迷宫正中心，从小鼠进入迷宫后计时，监测仪器自动监测5min内小鼠进入开臂的次数和时间。

5.根据权利要求1所述的同时构建焦虑和记忆受损小鼠模型的方法，其特征在于：步骤(3)中，所述旷场实验的行为学检测具体为，将小鼠放置于旷场正中心，从小鼠进入旷场后计时，监测仪器自动监测5min-10min内小鼠在旷场中心的时间及在旷场的运动距离。

6.根据权利要求1所述的同时构建焦虑和记忆受损小鼠模型的方法，其特征在于：步骤(3)中，所述y迷宫行为学检测具体为，将小鼠头朝y迷宫两臂交界处放下，从小鼠进入y迷宫开始计时，监测5min-10min内小鼠进入各个臂的顺序，若连续三次不重复进入同一个臂记为正确，然则相反，然后记录自然交替次数。

7.根据权利要求1所述的同时构建焦虑和记忆受损小鼠模型的方法，其特征在于：步骤(3)中，所述新物体识别的行为学检测具体为，第一天小鼠在没有物体的测试室习惯5min-10min，再送回原饲养环境中；第二天将小鼠放回测试室，再两个原始物体存在的情况下，采集视频5min-10min，然后将小鼠送回原饲养环境中；第三天，将小鼠放回测试室，在一个原始物体和一个新物体存在的情况下呆5min-10min，仪器自动监测该5min-10min内小鼠探索新物体和原始物体的次数和时间。

8.根据权利要求7所述的同时构建焦虑和记忆受损小鼠模型的方法，其特征在于：测试室至少为50×50×40cm3大小的方形空间，原始物体和新物体形状具有明显差异。

9.根据权利要求1所述的同时构建焦虑和记忆受损小鼠模型的方法，其特征在于：所述小鼠为6-8周的处于青春期的小鼠。

10.根据权利要求1所述的同时构建焦虑和记忆受损小鼠模型的方法，其特征在于：步骤(1)中的光照时间为早上8:00-晚上8:00，黑夜时间为晚上8:00-早上8:00。

技术总结本发明公开了一种同时构建焦虑和记忆受损小鼠模型的方法，(1)适应性喂养：随机分两组小鼠进行适应性喂养，两组采用相同的喂养条件，喂养环境温度22‑26℃、湿度40‑60％RH，光照和黑夜各12h交替进行，喂养一周；(2)两组小鼠分为对照组和实验组，对照组在温度22‑26℃、湿度40‑60％RH的环境下进行饲养，实验组在温度33‑36℃、湿度80‑95％RH的环境下进行饲养，光照和黑夜各12h交替进行，连续饲养至少四周；(3)经步骤(2)喂养后的对照组和实验组小鼠分别进行高架十字迷宫、旷场实验、Y迷宫和新物体识别实验的行为学检测。本发明采用外在环境刺激，避免药物影响，对小鼠不造成伤害，更加人性化。技术研发人员：王保红,邓德芳,张立将受保护的技术使用者：浙江大学技术研发日：技术公布日：2025/1/6