细胞球计数板的制作方法

1.本发明涉及生物实验技术领域，尤其涉及细胞实验领域，涉及一种细胞球计数板。


背景技术：

2.造血干细胞、神经干细胞和某些肿瘤细胞等细胞在悬浮培养增殖生长过程中逐渐形成球形细胞集落，也即是细胞微球或细胞球，部分实验中需要了解单位体积细胞培养液中细胞球的数量，然而悬浮培养形成的细胞球漂浮不定，难于准确计数。
3.血细胞计数板只用于单个悬浮细胞的计数，细胞球体积较大不能通过血细胞计数板进行计数，直接在显微镜下培养皿或培养瓶中进行计数时，因为个人因素、计数方法等影响使得实验结果无法统一标准化，而且数据重复性差，因此，需要一种简单易于操作针对细胞球计数能够实现重复性标准化的装置。


技术实现要素：

4.为了解决上述技术问题，本发明提供了一种细胞球计数板，本计数板的长宽高分别为127毫米、85毫米和22.5毫米，由透明塑料制成，包含计数板体和板盖。
5.所述的计数板体上横排12个计数孔竖排8个计数孔共有96个计数孔，各计数孔之间有侧壁相隔，每个计数孔的长宽深分别是10毫米、10毫米和18毫米，计数孔内容积约1800微升，工作容积200-400微升，每个计数孔底部均刻有三纵三横透明细线为纵横线，纵横线将每个计数孔底部划分成均匀大小的16个方格，计数孔底部方格的存在可避免计数过程中出现细胞球错计和漏计的情况。
6.所述的计数板体的上下边缘和左右边缘分别设有上下坐标轴和左右坐标轴，上下坐标轴和左右坐标轴用来标记相应计数孔的位置坐标，位置坐标可用来区分相应的计数孔，便于使用过程中快速查找相应计数孔。
7.所述的计数板左上角设有标记方向的缺角，也即是，有缺角的一角为计数板左上角。
8.所述的计数孔之间有侧壁相隔，侧壁的顶部设有卡槽，侧壁顶部的卡槽与板盖内侧的凸起相对应，并能相互吻合。
9.所述的板盖内侧设有凸起与计数孔侧壁顶部的卡槽相对应，当盖上板盖时凸起与卡槽吻合，板盖、侧壁和底部将每一个计数孔形成独立的单元，以免使用的过程中各计数孔之间相互干扰。
10.所述计数孔的底部内侧涂有一层多聚赖氨酸，多聚赖氨酸具有粘附效果，使细胞球粘附在计数孔的底部，防止的计数过程中细胞球漂动。
11.本发明的另一目的是提供上述细胞球计数板的使用方法，具体包括如下方法：s1从37摄氏度正常培养的细胞培养孵箱中取出细胞培养瓶或培养皿，将其放置在冰上或者向培养液中加入4摄氏度的培养液使培养液快速降温，将其温度快速降至10摄氏度左右，快速降温的目的是使正常培养时相对疏松的细胞球变得紧密，以减轻因吹打重悬等操
作造成细胞球破裂或融合，以免影响计数操作；s2将培养瓶或培养皿中细胞球培养液收集到离心管中，重悬混匀细胞球，使用微量加液器向计数孔中每孔加入200-400 微升细胞球悬液，重复5至10个计数孔（根据实验精确度的要求情况可适当增加重复的计数孔数），将计数板放置到离心机中，200转每分的速度离心5分钟，使细胞球沉到计数板底部，再静置10-20分钟，使细胞球粘附在计数板底部；s3在低倍显微镜下进行计数，每孔含有细胞球数，根据公式可计算出单位培养基中细胞球的浓度：单位培养液细胞球浓度=每孔细胞球数/每孔培养液体积。
12.本发明的有益效果是：所述的细胞球计数板解决了细胞球计数过程中准确性、重复性和标准化的问题，本发明简单易于操作，造价低。
附图说明
13.图1为本发明的俯视示意图。
14.图2为本发明单个计数孔的示意图。
15.图3为本发明的侧面示意图。
16.图中：1-计数孔，2-上下坐标轴，3-左右坐标轴，4-侧壁，5-缺角，6-纵横线，7-方格，8-板盖，9-计数板体，10-底部，11-凸起，12-卡槽。
具体实施方式
17.下面结合附图具体实施方式对本发明的方法作进一步详细地说明。可以理解的是，此处所描述的具体实施例仅用于解释相关发明，而非对该发明的限定。
18.参照图1-3，一种细胞球计数板，包括计数板体9和板盖8，所述的计数板由透明塑料制成，计数板的长宽高分别为127毫米、85毫米和22.5毫米，计数板体9上有横竖排列共有96个计数孔1，各计数孔1之间侧壁4相隔；每个计数孔1的长宽深分别是10毫米、10毫米和18毫米，计数孔1内容积约1800微升，工作容积200-400微升，每个计数孔1底部10均刻有三纵三横透明细线纵横线6，纵横线6将每个计数孔1底部10划分成均匀大小的16个方格7，方格7的存在可显示细胞球在显微镜下的相对位置，避免计数过程中出现细胞球错计和漏计的情况；为了标记计数孔1在计数板体9上的位置，计数板体9的上下边缘和左右边缘分别设有上下坐标轴2和左右坐标轴3，上下坐标轴2和左右坐标轴3用来标记相应计数孔的位置坐标，位置坐标可用来区分相应的计数孔1，比如左上角横向上第二竖向上第三个计数孔1的坐标为b3；为了更进一步的确定计数板使用的方向，在计数板左上角设有标记方向的缺角5，也就是，在使用的过程中需将计数板有缺角5的一角处在左上角的位置。
19.参照图1和3，所述的计数孔1之间有侧壁4相隔，侧壁4的顶部设有卡槽12，侧壁4顶部的卡槽12与板盖8内侧的凸起11相对应，并能相互吻合，当盖上板盖8时凸起11与卡槽12吻合，板盖8、侧壁4和底部10将单个计数孔1形成独立的单元，以免使用的过程中各计数孔之间相互干扰，计数孔1的底部10涂有一层多聚赖氨酸，多聚赖氨酸具有粘附效果，使细胞球粘附在计数孔1的底部10，防止的计数过程中细胞球漂动。
20.本发明还提供了上述细胞球计数板的使用方法，具体包括以下内容：s1从37摄氏度正常培养的细胞培养孵箱中取出细胞培养瓶或培养皿，将其放置在冰上或者向培养液中加入4摄氏度的培养液使培养液快速降温，将其温度快速降至10摄氏度左
右，快速降温的目的是使正常培养时相对疏松的细胞球变得紧密（降温过程中部分细胞球肉眼可见其体积缩小），以减轻因吹打重悬等操作造成细胞球破裂或融合，以免影响计数操作；s2将培养瓶或培养皿中细胞球培养液收集到离心管中，重悬混匀细胞球，使用微量加液器向计数孔中每孔加入200-400 微升细胞球悬液，重复5至10个计数孔（当实验需要更高精度时可重复更多孔数），将计数板放置到离心机中，200转每分的速度离心5分钟，使细胞球沉到计数板底部，再静置10-20分钟，使细胞球粘附在计数板底部；s3在低倍显微镜下进行计数每孔含有细胞球数，根据公式可计算出单位培养液中细胞球的浓度：单位培养液细胞球浓度=每孔细胞球数/每孔培养液体积。
21.以上所述，仅为本发明较佳的具体实施方式，本发明的保护范围不限于此，任何熟悉本技术领域的技术人员在本发明披露的技术范围内，可显而易见地得到的技术方案的简单变化或等效替换均落入本发明的保护范围内。


技术特征：
1.一种细胞球计数板，包括计数板体（9）和板盖（8），以及设在计数板体（9）上的多个计数孔（1），其特征在于：计数孔（1）的底部（10）内侧刻有纵横线（6），纵横线（6）为雕刻在计数孔（1）底部（10）内侧相互垂直的透明细线，纵横线（6）将每个计数孔（1）的底部（10）划分成多个方格（7）。2.根据权利要求1所述的细胞球计数板，其特征在于：计数孔（1）之间有侧壁（4）相隔，计数板体（1）上下边缘处设有上下坐标轴（2），计数板体（9）的左右边缘处分别设有左右坐标轴（3），上下坐标轴（2）和左右坐标轴（3）用来标记相应的计数孔（1）的位置坐标，计数板体（9）的左上角设有标记方向的缺角（5）。3.根据权利要求1所述的细胞球计数板，其特征在于：所述计数孔（1）的侧壁（4）的顶部设有卡槽（12）。4.根据权利要求1所述的细胞球计数板，其特征在于：所述板盖（8）内侧设有凸起（11）与计数孔（1）的侧壁（4）顶部的卡槽（12）相对应，当盖上板盖（8）时凸起（11）与卡槽（12）吻合，板盖（8）、侧壁（4）和底部（10）使每个计数孔（1）形成独立的单元。5.根据权利要求1所述的细胞球计数板，其特征在于：所述计数孔（1）的底部（10）内侧包被有一层多聚赖氨酸。6.根据权利要求1所述的细胞球计数板，其特征在于：整个细胞球计数板是使用透明的聚苯乙烯塑料制成。7.根据权利要求1-6所述的细胞球计数板的使用方法，其特征在于，包括如下步骤：s1从37摄氏度正常培养的细胞培养孵箱中取出细胞培养瓶或培养皿，将其放置在冰上或者向培养液中加入4摄氏度的培养液快速降温，使培养液温度快速降至10摄氏度左右；s2将培养瓶或培养皿中细胞球培养液收集到离心管中，重悬混匀细胞球，使用微量加液器向计数孔中每孔加入200-400微升细胞球悬液，将计数板放置到离心机中，200转每分的速度离心5分钟，再静置10-20分钟；s3在低倍显微镜下进行计数每孔含有细胞球数，根据公式可计算出单位培养液中细胞球的浓度：单位培养液细胞球浓度=每孔细胞球数/每孔培养液体积。

技术总结
本发明专利公开了一种细胞球计数板，它包括计数板体和板盖，以及设在计数板体上的计数孔，其特征在于计数孔底部设有纵横线将计数孔底划分成方格；其特征还在于计数板体的上下边缘处和左右边缘处设有坐标轴，使每一个计数孔都有相应的位置坐标；本发明同时提供了细胞球计数板的使用方法；本发明所述的细胞球计数板可便于细胞实验过程中对培养液中的细胞球数进行计数，实现标准化和重复性。实现标准化和重复性。实现标准化和重复性。


技术研发人员：韩宁 黄惠勇 张若青 康娜 张惠敏 马振军 马月华
受保护的技术使用者：厦门市中医院
技术研发日：2020.06.11
技术公布日：2021/12/16