一种基于rpb2序列杂合位点鉴定茯苓同核、异核菌株的方法

技术特征：
1.一种基于rpb2序列杂合位点鉴定茯苓同核、异核菌株的方法，其特征在于所述方法包括如下步骤：提取待测茯苓菌株菌丝体dna；对所述菌丝体dna的rpb2序列进行pcr扩增；对扩增产物进行测序；以及对测序峰图进行特异性杂合位点检查，从而确定所述待测茯苓菌株是同核菌株还是异核菌株。2.如权利要求1所述的方法，其特征在于用于所述pcr扩增的引物为rpb2-5f和rpb2-7cr：rpb2-5f：5
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gaygaymgwgatcayttygg-3’(seq id no:1)，rpb2-7cr：5
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cccatrgcttgyttrcccat-3’(seq id no:2)。3.如权利要求1所述的方法，其特征在于所述pcr扩增的反应体系如下：2
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rapidtaqmastermix 12.5μl；引物rpb2-5f(10μmol/l) 1μl；引物rpb2-7cr(10μmol/l) 1μl；ddh2o 8.5μl；dna模板：2μl。4.如权利要求4所述的方法，其特征在于所述pcr扩增的反应程序如下：步骤1：95℃ 5min；步骤2：95℃ 60sec；步骤3：55℃ 120sec；步骤4：72℃ 90sec；步骤5：重复步骤2～4，35个循环；以及步骤6：72℃ 10min。5.如权利要求1所述的方法，其特征在于所述特异性杂合位点为所述rpb2序列内tgtat*tctgt或tatctc*gtcggc中的*位点，其中，若所述*位点在所述测序峰图中为单峰，则所述待测茯苓菌株为同核菌株，若所述*位点在所述测序峰图中为双峰，则所述待测茯苓菌株为异核菌株。6.用于鉴定茯苓同核、异核菌株的试剂盒，其特征在于包含用于扩增rpb2序列的引物rpb2-5f和rpb2-7cr：rpb2-5f：5
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gaygaymgwgatcayttygg-3’(seq id no:1)，rpb2-7cr：5
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cccatrgcttgyttrcccat-3’(seq id no:2)。

技术总结
本发明属于分子生物学技术领域，公开了一种基于rpb2序列杂合位点鉴定茯苓同核、异核菌株的方法，该方法包括如下步骤：提取待测茯苓菌株菌丝体DNA；对菌丝体DNA的rpb2序列进行PCR扩增；对扩增产物进行测序；以及对测序峰图进行特异性杂合位点检查，从而确定待测茯苓菌株是同核菌株还是异核菌株，若该位点在测序峰图中为单峰，则待测茯苓菌株为同核菌株，若该位点在测序峰图中为双峰，则待测茯苓菌株为异核菌株。本发明的方法稳定性强、适用性广，可以准确鉴定茯苓同核菌株和异核菌株。准确鉴定茯苓同核菌株和异核菌株。


技术研发人员：李寿建 董彩虹
受保护的技术使用者：中国科学院微生物研究所
技术研发日：2021.12.29
技术公布日：2022/4/29