一种基于金黄色葡萄球菌的皮肤炎症体外评价模型的构建方法、评价模型及其应用

技术特征：
1.一种基于金黄色葡萄球菌的皮肤炎症体外评价模型的构建方法，其特征在于，所述构建方法包括如下步骤：s1、制备致炎产物，并梯度稀释至不同浓度，备用，所述致炎产物由金黄色葡萄球菌增殖和/或代谢后产生；将复苏后的hacat细胞经细胞传代培养后，将对数生长期的hacat细胞以6000-100000个细胞/孔的密度接种于培养板上培养后；s2、于所述培养板上培养有所述hacat细胞的不同孔内分别添加不同浓度的所述致炎产物后，置于实时无标记细胞分析仪上进行培养；s3、通过实时无标记细胞分析仪监测细胞生长曲线，选择对hacat细胞的细胞增殖造成有影响且hacat细胞总存活率变化较为稳定的所述致炎产物的添加浓度，用于构建基于金黄色葡萄球菌的皮肤炎症体外评价模型。2.根据权利要求1所述的构建方法，其特征在于，步骤s1中，于培养板上接种hacat细胞后的培养时间为20~30h；步骤s2中，于实时无标记细胞分析仪上进行培养的时间为45~52h。3.根据权利要求1所述的构建方法，其特征在于，所述致炎产物为灭菌的金黄色葡萄球菌液或者去除金黄色葡萄球菌后的金黄色葡萄球菌细胞培养液。4.根据权利要求3所述的构建方法，其特征在于，所述金黄色葡萄球菌细胞培养液由包括如下步骤的方法得到：取金黄色葡萄球菌于lb培养基中培养15~20h后，去除金黄色葡萄球菌菌体，留上清液即为金黄色葡萄球菌细胞培养液。5.根据权利要求1所述的构建方法，其特征在于，步骤s1中，复苏hacat细胞的步骤包括：将hacat细胞悬浮于含有包括8~12vol.%胎牛血清、0.8~1.3vol.%青链霉素混合液的dmem高糖培养基中，培养至细胞占据培养器底面75~85%时即可。6.一种采用权利要求1-5任一所述构建方法得到的基于金黄色葡萄球菌的皮肤炎症体外评价模型，其特征在于，所述评价模型采用包括以下步骤的方法得到：于hacat细胞中添加浓度为10~25vol.%的所述致炎产物，作用hacat细胞10~15h，即得到所述评价模型。7.根据权利要求6所述的评价模型，其特征在于，所述添加终浓度为12.5~25vol.%。8.根据权利要求6所述的评价模型，其特征在于，所述添加终浓度为12.5vol.%。9.根据权利要求6所述的评价模型，其特征在于，评价模型中，通过对相关指标的含量分析来进行炎症评价；所述指标选自细胞活性氧、白介素-1、肿瘤坏死因子、人前列腺素e2、环氧合酶和核因子κb中的至少一种。10.权利要求6-9任一所述评价模型的应用，其特征在于，所述应用包括探究金黄色葡萄球菌在皮肤炎性中的反应机制、筛选抗炎原料和/或组合物和/或药物、筛选具有皮肤屏障修复作用的化妆品原料和/或组合物和/或产品中、化妆品安全性和/或功效评价中的至少一种。

技术总结
本申请涉及皮肤炎症治疗用药物、化妆品筛选方法的技术领域，具体公开了一种基于金黄色葡萄球菌的皮肤炎症体外评价模型的构建方法、评价模型及其应用。构建方法包括如下步骤：S1、制备致炎产物，并梯度稀释至不同浓度；培养得到HaCaT细胞；S2、于HaCaT细胞内分别添不同浓度的致炎产物，并进行培养；S3、通过监测细胞生长曲线，确定添加浓度，得到评价模型。本申请的评价模型可用于探究金黄色葡萄球菌在皮肤炎性中的反应机制、筛选抗炎原料和/或组合物和/或药物、筛选具有皮肤屏障修复作用的化妆品原料和/或组合物和/或产品中、化妆品安全性和/或功效评价；本申请的评价模型具有操作简单方便且应用广泛的优点。便且应用广泛的优点。便且应用广泛的优点。


技术研发人员：张甜甜 王敏 徐鹤然 张晓娜 朱姿英 曹毓琳 白志惠
受保护的技术使用者：北京工商大学
技术研发日：2022.01.27
技术公布日：2022/6/4