可存活胰岛样细胞结构及其制备方法与流程

技术特征：
1.组合物，其包含人工培养的球状胰岛样细胞结构的群体，所述群体含有在蛋白质水平上表达胰腺激素胰岛素、胰高血糖素、胰多肽、生长抑素和食欲刺激素的分化的成体干细胞，其特征在于所述分化的细胞在静态或动态条件二者下响应于高葡萄糖(hg)刺激能够产生胰c肽的量是响应于低葡萄糖(lg)刺激产生的量的至少1.5倍，并且其特征还在于通过荧光素二乙酸酯(fda)和碘化丙啶(pi)测定法测量的所述群体中该球状胰岛样细胞结构的生存力高于93％。2.根据权利要求1所述的组合物，其中所述分化的细胞能够在静态或动态条件二者下响应于hg刺激产生至少50pg/ml/400ieq的量的胰c肽。3.根据权利要求1或2所述的组合物，其中所述群体中该球状胰岛样细胞结构的至少50％的直径为等于或小于100μm，优选51至100μm。4.根据权利要求1至3中任一项所述的组合物，其中所述球状胰岛样细胞结构的群体的平均直径小于100μm。5.根据权利要求1至4中任一项所述的组合物，其中球状胰岛样细胞结构的所述高葡萄糖刺激是用28mm葡萄糖进行的。6.根据权利要求1至5中任一项所述的组合物，其中所述分化的细胞还表达选自pdx1、ngn3、嗜铬粒蛋白a(cga)、nkx6.1、mafa及其任意组合的至少一种标志物。7.根据权利要求1至6中任一项所述的组合物，其中所述成体干细胞是人肝干细胞(hlsc)。8.根据权利要求1至7中任一项所述的组合物，其用于通过胰岛移植治疗糖尿病。9.制备人工培养的球状胰岛样细胞结构的群体的方法，其包括在有氧条件下在包含聚阳离子物质的分化液体细胞培养基中培养成体干细胞5至21天时间，并随后阻断培养，其中所述培养以单次培养传代进行而不更换所述分化液体细胞培养基。10.根据权利要求9所述的方法，其中所述成体干细胞在所述分化液体细胞培养基中的培养进行5至13天时间，优选5至11天时间。11.根据权利要求9或10所述的方法，其中所述成体干细胞在固体支持物上培养，并且所述固体支持物的表面上该分化液体细胞培养基中的氧浓度为至少5mg/l。12.根据权利要求11所述的方法，其中在培养期期间，所述分化液体细胞培养基中的氧浓度为初始氧浓度的100％至80％。13.根据权利要求9至12中任一项所述的方法，其中所述聚阳离子物质是聚赖氨酸或鱼精蛋白的可溶性盐。14.根据权利要求13所述的方法，其中所述鱼精蛋白的可溶性盐是鱼精蛋白硫酸盐或鱼精蛋白盐酸盐。15.根据权利要求14所述的方法，其中所述鱼精蛋白硫酸盐或鱼精蛋白盐酸盐的浓度为5至50μg/ml，优选10至30μg/ml。16.根据权利要求11至15中任一项所述的方法，其中所述固体支持物是透气性支持物。17.根据权利要求11至16中任一项所述的方法，其中所述固体支持物由聚合物材料制成，所述聚合物材料经修饰以使得细胞对它的附着与未经修饰的聚合物材料相比显著增强。18.根据权利要求11至17中任一项所述的方法，其中所述成体干细胞在包含多个分层
细胞培养固体支持物的培养容器中进行培养。19.根据权利要求9至18中任一项所述的方法，其中所述成体干细胞是人肝干细胞(hlsc)。20.包含根据权利要求1至7中任一项所述的球状胰岛样细胞结构的群体的组合物在用于鉴定能够促进由胰岛细胞表达一种或更多种胰腺激素的物质或者用于鉴定能够对胰岛细胞施加细胞毒性作用的物质的体外筛选方法中的用途。

技术总结
本发明涉及制备胰岛样细胞结构的方法，所述胰岛样细胞结构的特征在于高生存力与形态和功能特征的独特组合，这使所述胰岛样细胞结构特别适合用于临床和药物筛选应用这二者，并且涉及由此获得的胰岛样细胞结构。且涉及由此获得的胰岛样细胞结构。


技术研发人员：维克托
受保护的技术使用者：联合细胞胰岛股份公司
技术研发日：2020.10.28
技术公布日：2022/6/10