一种利用混合菌种的改进食细菌线虫培养及扩繁方法

本发明涉及微生物研究领域，更具体涉及一种利用混合菌种的改进食细菌线虫培养及扩繁方法。

背景技术：

1、土壤食物网的结构及其动态性是一个复杂的生态系统，其涵盖了多种生物组成，如土壤动物和微生物。在这种复杂的网络中，食物选择或猎物偏好是决定土壤群落结构和功能的关键因素。特别是线虫作为土壤中的重要组成部分，其种类繁多，包括食细菌线虫、食真菌线虫、杂食线虫和捕食线虫等。

2、目前，大肠杆菌(op50)成为了线虫培养的主要食物来源，但这种单一的培养方式并不能满足大部分线虫种类的需求。考虑到土壤食物网的复杂性和线虫种类的多样性，开发一种更加综合和高效的培养方法变得尤为关键。

3、因此，解决如何有效、高效地培养和扩繁线虫种类，特别是考虑到它们在土壤食物网中的功能和重要性，已经成为技术和生物学领域中的一个迫切挑战。通过综合考虑土壤食物网的动态性和食细菌线虫的生态需求，所以如何将这种有益食细菌线虫快速高效的培养及扩繁是一项亟待解决的问题。

技术实现思路

1、本发明的目的是在于提供了一种改进食细菌线虫培养及扩繁的方法。通过对市场购买的多种菌种以不同比例混合用于食细菌线虫的培养和扩繁，可以推广适用于土壤中广泛存在的各类食细菌线虫。

2、为了实现上述的目的，本发明采用以下技术措施：

3、一种利用混合菌种的改进线虫培养及扩繁的方法，包括如下步骤：

4、a、取购买于市场的菌种制备混合物、菌种及其配比为：费氏中华根瘤菌(sinorhizobium fredii)、大豆根瘤菌(bradyrhizobium japonicum)；其配比为1：1；另取购买于市场的食细菌线虫，所述食细菌线虫为：秀丽隐杆线虫(caenorhabditis elegans)

5、b、将步骤a中配置好的菌种混合物接种入lb液体培养基，取200微升均匀涂布于ngm线虫生长固体培养基中，在25～28℃培养箱中黑暗培养48～72小时；

6、c、从步骤a中购买的线虫于24小时内，在离心机中2000～3000rpm 1～3分钟，慢慢移去上清液至2ml，放入10ml的离心管中。

7、d、在超净台内加5ml线虫清洗液，对步骤c所得的线虫的清洗多次；

8、e、将步骤d清洗后的含有线虫的离心管以1300rpm 30～60秒离心，沉淀线虫后移去上清液至2ml，添加无菌水至5ml摇晃30～60秒钟；

9、f、重复步骤e3-4次，得到上清液；

10、g、移去步骤f所得的上清液至0.5ml，用移液枪将其中清洗后的线虫接种于步骤b所得ngm线虫生长培养基的平板中；

11、f、利用倒置显微镜观察平板中线虫生长数量。

12、其中关键步骤为：菌种的选择和其配比：

13、所述lb液体培养基配置方法为：在1l无菌水中加入蛋白胨10.0g、酵母膏粉5.0g、葡萄糖1.0g、ph为7.0±0.2；

14、所述ngm线虫生长固体培养基配置方法为：在1l无菌水中加入2.5g蛋白胨、3.0g氯化钠、0.111g氯化钙、0.12g硫酸镁、0.005胆固醇、3.4g磷酸二氢钾、17.0g琼脂。

15、所述的步骤a中的菌种混合物菌悬液培养条件为：25℃180rmp 48小时

16、所述的步骤a中的菌种混合物培养条件为：25℃相对湿度50％，48小时。

17、所述的步骤b中的线虫生长培养且扩繁的条件为：25℃相对湿度50％。

18、通过上述八个步骤的技术措施：

19、最关键步骤在于，将所述菌种进行混合后，按照1：1比例，涂布于ngm线虫生长培养基中，与传统单一培养基(如大肠杆菌)相比，利用菌种混合物为基础的培养方法更加多元化，更好地模拟了土壤生态系统中的多样性，可能提供更为丰富的营养和生长因子，从而有望提高线虫的产量。利用菌种混合的培养方式可能提供更为适宜的生存环境，增强了线虫的适应性。这有助于提高线虫的存活率和健康状态，使其更能保持其天然的生物学特性。

20、本发明与现有技术相比，具有以下优点和效果：

21、利用本方法中一定比例的菌种混合物培养食细菌线虫与利用大肠杆菌培养相比，能更好的符合线虫的取食偏好，对食细菌线虫的培养效率更好，生长速度更快，符合食细菌线虫的原生生长条件，更适合用于食细菌线虫的培养和扩繁，可以推广适用于土壤中广泛存在的各类食细菌线虫。

技术特征：

1.一种利用混合菌种的改进食细菌线虫培养及扩繁方法，其特征在于，包括如下步骤：

2.根据权利要求1所述的培养及扩繁的方法，其特征在于：所述的步骤(a)是的菌种混合物菌悬液培养条件为：25℃180rmp 48小时。

3.根据权利要求1所述的培养及扩繁的方法，其特征在于：所述的步骤(a)中的菌种混合物培养条件为：25℃相对湿度50％，48小时。

4.根据权利要求1所述的培养及扩繁的方法，所述的步骤(b)中的线虫生长培养且扩繁的条件为：25℃相对湿度50％。

技术总结本发明公开了一种利用混合菌种的改进食细菌线虫培养及扩繁方法，步骤是：A、取菌种配置混合物和线虫；B、将配置的菌种混合物接种入LB液体培养基，均匀涂布于NGM线虫生长固体培养基中，在培养箱中黑暗培养；C、在超净台内加5ml线虫清洗液，对线虫进行清洗；D、将清洗后的含有线虫的离心管离心，沉淀线虫后移去上清液，添加无菌水摇晃；E、重复步骤D，得到上清液；F、移去所得上清液，用移液枪将其中清洗后的线虫接种于NGM线虫生长培养基中；G、利用倒置显微镜观察培养基中线虫生长数量。通过对食细菌线虫的菌种混合物培养，对线虫进行培养，用于线虫的培养和扩繁。技术研发人员：俞瑶,赵杰,林雅萍受保护的技术使用者：中国科学院亚热带农业生态研究所技术研发日：技术公布日：2024/6/2