一种蒿属植物组织培养的方法

本发明涉及植物组织培养领域，特别涉及一种植物组织培养的方法。

背景技术：

1、青蒿药材基原植物黄花蒿(artemisia annua l.)，又名苦蒿、黄花蒿，菊科，蒿属一年生草本植物，为我国传统中药，有两千多年的记载历史，最早见于春秋战国时期的《五十二病方》。青蒿的主要有效成分青蒿素是治疗疟疾的首选药物，被世界卫生组织确认为目前全球治疗疟疾唯一安全、有效的新型药品。黄花蒿广布于欧洲及亚洲，欧洲中部、东部、南部及亚洲北部、中部、东部分布最多。全世界蒿属植物约350种，中国有186种，44变种，但只有黄花蒿中含青蒿素。世界大部分地区的黄花蒿中青蒿素含量低于0.2％，我国黄花蒿资源中青蒿素含量由北到南逐渐增高，秦岭-淮河以北部分地区青蒿素含量均低于0.6％，而以南部分地区青蒿素含量较高。由于全球优质黄花蒿资源主要集中在中国的秦岭-淮河以南部分地区，如海南、贵州、广西、湖南等省区，在资源上我国具有极显著的优势，成为青蒿素的主要原料供应国。

2、采用组织培养技术可以短时间内大量地培养出黄花蒿苗，但传统黄花蒿组织培养过程中，外植体形成愈伤组织然后再分化形成不定芽的过程较为漫长，周期长。

技术实现思路

1、本发明之一提供了一种蒿属植物组织培养的方法，其包括如下步骤：

2、1-1)将所述蒿属植物的外植体在愈伤组织分化培养基中培养，得到丛生芽；

3、2-1)将所述丛生芽在丛生芽增殖培养基中培养，得到未生根的幼苗；

4、或

5、1-2)将所述蒿属植物的外植体在愈伤组织分化培养基中培养，得到未生根的幼苗；

6、3)将步骤2-1)或步骤1-2)所述未生根的幼苗在生根培养基中培养，得到生根苗；

7、4)移栽所述生根苗，培养，得到完整的蒿属植物植株。

8、在一个具体实施方式中，所述愈伤组织分化培养基的组成包括ms液体培养基、第一凝固剂、第一糖和第一激素，所述愈伤组织分化培养基的ph值为5.8至6.2；以所述ms液体培养基的体积计作1000ml，所述第一凝固剂的用量为5至10g/l，所述第一糖的用量为25至35g/l，所述第一激素的用量为2.2至2.8mg/l。

9、在一个具体实施方式中，所述第一凝固剂为琼脂，所述第一糖为蔗糖；所述第一激素为6-苄氨基嘌呤(6-ba)和α-萘乙酸(naa)。

10、在一个具体实施方式中，所述6-苄氨基嘌呤和α-萘乙酸的质量比为1：(0.08至0.15)。

11、在一个具体实施方式中，所述丛生芽增殖培养基的组成包括ms液体培养基、第二凝固剂、第二糖和第二激素，所述丛生芽增殖培养基的ph值为5.8至6.2；以所述ms液体培养基的体积计作1000ml，所述第二凝固剂的用量为5至10g/l，所述第二糖的用量为25至35g/l，所述第二激素的用量为0.55至0.85mg/l。

12、在一个具体实施方式中，所述第二凝固剂为琼脂，所述第二糖为蔗糖；所述第二激素为6-苄氨基嘌呤(6-ba)和吲哚-3-丁酸(iba)。

13、在一个具体实施方式中，所述6-苄氨基嘌呤和吲哚-3-丁酸的质量比为(5至15)：1。

14、在一个具体实施方式中，所述生根培养基的的组成包括ms液体培养基、第三凝固剂、第三糖和第三激素，所述生根培养基的ph值为5.8至6.2；以所述ms液体培养基的体积计作1000ml，所述第三凝固剂的用量为5至10g/l，所述第三糖的用量为25至35g/l，所述第三激素的用量为0.11至0.22mg/l。

15、在一个具体实施方式中，所述第三凝固剂为琼脂，所述第三糖为蔗糖；所述第三激素为吲哚-3-丁酸(iba)和α-萘乙酸(naa)。

16、在一个具体实施方式中，所述吲哚-3-丁酸和α-萘乙酸的质量比为(5至20)：1。

17、在一个具体实施方式中，在步骤1-1)、步骤2-1)、步骤1-2)和步骤3)中，培养的条件独立地为22至27℃，光照强度1000至1400lx，光周期l：d＝12:12至14:10。

18、在一个具体实施方式中，在步骤1-1)和步骤1-2)中，培养的条件独立地为23至27°c，光照强度1200lx，光周期l：d＝12:12；。

19、在一个具体实施方式中，在步骤2-1)中，培养的条件为23至27℃，光照强度1200lx，光周期l：d＝14:10。

20、在一个具体实施方式中，在步骤3)中，培养的条件为22至26℃，光照强度1200lx，光周期l：d＝14:10。

21、在一个具体实施方式中，在步骤1-1)或1-2)之前，还包括如下步骤：

22、p1)获得所述蒿属植物的外植体；

23、p2)对所述外植体消毒，获得消毒的外植体；以及任选地

24、p3)对所述消毒的外植体进行预培养。

25、在一个具体实施方式中，在步骤p1)中，所述外植体为叶片；优选地为幼嫩叶片。

26、在一个具体实施方式中，在步骤p3)中，进行预培养的培养基的组成包括ms液体培养基、第四凝固剂和第四糖，ph值为5.8至6.2。

27、在一个具体实施方式中，以所述ms液体培养基的体积计作1000ml，所述第四凝固剂的用量为5至10g/l，所述第四糖的用量为25至35g/l。

28、在一个具体实施方式中，所述第四凝固剂为琼脂，所述第四糖为蔗糖。

29、在一个具体实施方式中，遮光预培养两天。

30、在一个具体实施方式中，所述蒿属植物为黄花蒿。

31、在一个具体实施方式中，所述黄花蒿为“海青一号”黄花蒿。

32、在一个具体实施方式中，在步骤4)中，将所述生根苗移栽至土壤中或栽培基质中培养。

33、本发明的有益效果：

34、本发明提供的黄花蒿的组织培养方法通过使用改良培养基可以显著缩短外植体形成丛生芽的周期，进而缩短整个组织培养时间，快速有效保存性状良好的黄花蒿植株，可周年进行黄花蒿的快速繁殖。

35、此外，本发明还通过将培养未生根幼苗的传统两步法(愈伤组织分化培养和丛生芽增殖培养)减少增殖培养的步骤，进而缩减为一步法，这进一步使培养周期显著缩短。

36、本发明的组织培养方法可解决在优良种苗需求量或繁殖材料较少时尤其是优选的单株较少时，短时间内难以得到大量优选种苗的技术难题，加快人工选育进程。

技术特征：

1.一种蒿属植物组织培养的方法，其包括如下步骤：

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述愈伤组织分化培养基的组成包括ms液体培养基、第一凝固剂、第一糖和第一激素，所述愈伤组织分化培养基的ph值为5.8至6.2；

3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述第一凝固剂为琼脂，所述第一糖为蔗糖；所述第一激素为6-苄氨基嘌呤和α-萘乙酸；

4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述丛生芽增殖培养基的组成包括ms液体培养基、第二凝固剂、第二糖和第二激素，所述丛生芽增殖培养基的ph值为5.8至6.2；

5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，所述第二凝固剂为琼脂，所述第二糖为蔗糖；所述第二激素为6-苄氨基嘌呤和吲哚-3-丁酸；

6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述生根培养基的的组成包括ms液体培养基、第三凝固剂、第三糖和第三激素，所述生根培养基的ph值为5.8至6.2；

7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，所述第三凝固剂为琼脂，所述第三糖为蔗糖；所述第三激素为吲哚-3-丁酸和α-萘乙酸；

8.根据权利要求1至7中任意一项所述的方法，其特征在于，在步骤1-1)、步骤2-1)、步骤1-2)和步骤3)中，培养的条件独立地为22至27℃，光照强度1000至1400lx，光周期l：d＝12:12至14:10；

9.根据权利要求1至7中任意一项所述的方法，其特征在于，在步骤1-1)或1-2)之前，还包括如下步骤：

10.根据权利要求9所述的方法，其特征在于，所述蒿属植物为黄花蒿；

技术总结本发明涉及一种蒿属植物组织培养的方法，其包括如下步骤：1‑1)将所述蒿属植物的外植体在愈伤组织分化培养基中培养，得到丛生芽；2‑1)将所述丛生芽在丛生芽增殖培养基中培养，得到未生根的幼苗；或1‑2)将所述蒿属植物的外植体在愈伤组织分化培养基中培养，得到未生根的幼苗；3)将步骤2‑1)或步骤1‑2)所述未生根的幼苗在生根培养基中培养，得到生根苗；4)移栽所述生根苗，培养，得到完整的蒿属植物植株。技术研发人员：马婷玉,丁自勉,向丽,师玉华受保护的技术使用者：中国医学科学院药用植物研究所技术研发日：技术公布日：2024/6/5