一种肠组织保存液及其保存方法和应用与流程

本发明涉及生物学试剂，具体涉及一种肠组织保存液及其保存方法和应用。

背景技术：

1、研究显示，ii期和iii期新药临床试验在安全性上的失败率分别达到25%和14%[harrison rk. phase ii and phase iii failures: 2013–2015. nat rev drugdiscov. 2016； 15(12):817–8]。因此，在新药开发的早期阶段更快速的发现药物开发可能的失败风险能够提高药物研发成功率并节约药物开发成本。

2、把新药研发失败的风险尽量在动物试验前就显现出来，这需要在新药筛选阶段就建立合适的评价体系。对于那些体内代谢率低、毒性大或缺少灵敏的检测手段的药物来说，药物体外代谢研究可以排除内因素的干扰，为整体实验提供可靠的理论数据。研究小肠黏膜功能及小肠对口服药物生物利用度的影响已经成为临床和药学的热点。

3、肠道中药物代谢酶主要分布于黏膜上皮细胞，包含i相代谢酶和ii相代谢酶，故肠黏膜上皮细胞在体外药物的代谢研究的良好工具。使用来源于人肠组织的原代肠黏膜上皮细胞进行的代谢评价相对其他种属更能预测后续体内研究的代谢情况。

4、肠组织各种酶含量较为丰富，离体后肠组织中凋亡或坏死的细胞释放的各种酶易引发其他细胞的损伤及细胞内蛋白的降解，经储存和运输后进行原代肠黏膜上皮细胞的分离成功率较低，分离的肠黏膜上皮细胞较难贴壁。离体后应立即进行细胞分离才能获得数量和活力可用于试验的原代肠黏膜上皮细胞，这无疑限制了原代肠黏膜上皮细胞的获取和应用。

技术实现思路

1、本发明的目的在于提供一种肠组织保存液，其能够减缓肠组织离体后细胞的损伤和细胞内蛋白的降解，进而能够储存和运输，提高原代肠黏膜上皮细胞分离的成功率。

2、为实现上述目的，本发明提供了一种肠组织保存液，包括二硫苏糖醇、亮抑酶肽、半胱氨酸蛋白酶9（caspase-9）抑制剂、胎牛血清、青链霉素双抗的高糖dmem培养基、胎牛血清、青链霉素双抗的高糖dmem培养基。

3、所述二硫苏糖醇浓度为1mm-5mm；亮抑酶肽浓度为5-20um；所述caspase-9抑制剂为z-lehd-fmk或z-lehd-fmk tfa，z-lehd-fmk或z-lehd-fmk tfa的浓度为1um-5um。

4、所述还原型谷胱甘肽的浓度为60-120mg/l。

5、所述胎牛血清浓度为10-20%。

6、所述青链霉素双抗浓度为1-2%。

7、本发明所述肠组织保存液用于肠组织的运输和保存。

8、肠组织的保存方法为将离体的肠组织置于权利要求1-6所述肠组织保存液中降温保存。

9、所述肠组织保存液和肠组织的体积比不小于2:1。

10、与现有技术相比，本发明具有如下有益效果：

11、目前尚无专用的人肠组织保存液。通用组织保存液的组织保存液对于肠组织并不适用。本发明针对肠组织的特点，在dmem中添加了抗氧化剂、蛋白酶抑制剂、凋亡和坏死相关因子抑制剂，消除或降低肠组织保存和运送过程中的损伤，使人肠组织黏膜上皮原代细胞的分离实现异地取材，并提高原代肠黏膜上皮细胞分离的成功率。

12、使用本发明所述的肠组织保存液保存肠组织24小时，成功分离获得原代肠黏膜上皮细胞，活力90%以上。

技术特征：

1.一种肠组织保存液，其特征在于，包括二硫苏糖醇、亮抑酶肽、半胱氨酸蛋白酶9（caspase-9）抑制剂、胎牛血清、青链霉素双抗的高糖dmem培养基、胎牛血清、青链霉素双抗的高糖dmem培养基。

2.根据权利要求1所述肠组织保存液，其特征在于所述二硫苏糖醇浓度为1mm-5mm；亮抑酶肽浓度为5-20um；所述caspase-9抑制剂为z-lehd-fmk或z-lehd-fmktfa，z-lehd-fmk或z-lehd-fmktfa的浓度为1um-5um。

3.根据权利要求1所述肠组织保存液，其特征在于所述还原型谷胱甘肽的浓度为60-120mg/l。

4.根据权利要求1所述肠组织保存液，其特征在于所述胎牛血清浓度为10-20%。

5.根据权利要求1所述肠组织保存液，其特征在于所述青链霉素双抗浓度为1-2%。

6.权利要求1-5任意一项所述保存液在保存肠组织的应用。

7.一种肠组织的保存方法，其特征在于，将离体的肠组织置于权利要求1-6所述肠组织保存液中降温保存。

8.根据权利要求8所述的保存方法，所述肠组织保存液和肠组织的体积比不小于2:1。

技术总结本发明公开了一种肠组织保存液及其保存方法和应用。该肠组织保存液为包括二硫苏糖醇、亮抑酶肽、半胱氨酸蛋白酶9（Caspase‑9）抑制剂、胎牛血清、青链霉素双抗的高糖DMEM培养基。所得肠组织保存液用于肠组织的保存，经肠组织保存液保存的肠组织分离提取获得的肠黏膜上皮细胞活力较高。技术研发人员：请求不公布姓名受保护的技术使用者：江苏齐氏生物科技有限公司技术研发日：技术公布日：2024/6/5