草鱼sPLA2蛋白在制备用于增强鱼类抗病力的产品中的应用

本发明涉及分子生物，特别涉及一种草鱼spla2蛋白在制备用于增强鱼类抗病力的产品中的应用。

背景技术：

1、草鱼是我国淡水鱼类养殖产量最高的一种经济鱼类。草鱼性温、味甘；具有平肝、祛风、活痹、截疟、暖胃的作用；还含有丰富的不饱和脂肪酸，对血液循环和心血管患者很有益处，是温中补虚的养生品。草鱼营养成分较丰富，使其具有较高的食用价值。但是近几年来，草鱼的细菌病害问题日趋严重，严重阻碍了水产养殖业的绿色、健康和可持续发展。目前，针对草鱼细菌疾病的预防和治疗，主要依靠抗生素等化学药物。然而抗生素的长期使用，不仅扰乱了水体的生态系统，而且可能导致出现抗生素耐药、药物残留和食品安全等严重问题。

2、因此，研制具有广谱、高效和安全的生物杀菌活性制剂，则显得尤为重要。利用分子生物学方法研制草鱼抗菌活性蛋白，可以避免抗生素带来的种种弊端。但是，目前可应用于鱼类增强抗病力的活性蛋白仍鲜有报道。

技术实现思路

1、基于此，有必要提供一种能够增强鱼类抗病力的活性蛋白的应用。

2、本发明的一个方面，提供了一种草鱼spla2蛋白在制备用于增强鱼类抗病力的产品中的应用。

3、在其中一个实施例中，上述增强鱼类抗病力包括强化鱼类肠黏膜屏障、提高鱼类抗菌能力和提高鱼类抗氧化能力。

4、在其中一个实施例中，上述产品为药物或饲料。

5、在其中一个实施例中，上述药物的剂型为片剂、胶囊剂、颗粒剂或注射剂，上述饲料为植物性饲料或动物性饲料。

6、在其中一个实施例中，上述鱼类为草鱼。

7、在其中一个实施例中，上述草鱼spla2蛋白的制备方法包括以下步骤：以草鱼肝脏cdna为模板，使用引物进行pcr扩增，获得草鱼spla2核酸片段；将上述草鱼spla2核酸片段进行双酶切，并与经过相同酶切的质粒连接，获得重组质粒；将上述重组质粒转化到大肠杆菌中，加入诱导剂诱导表达，经蛋白纯化即获得草鱼spla2蛋白。

8、在其中一个实施例中，上述引物的核苷酸序列如seq id no：2和seq id no：3所示，上述质粒为pet28a，上述诱导剂为iptg。

9、本发明的另一方面还提供了一种用于增强鱼类抗病力的药物，包括草鱼spla2蛋白以及药用辅料。

10、本发明的另一方面还提供了一种用于增强鱼类抗病力的饲料，其特征在于，包括草鱼spla2蛋白以及标准鱼饲料。

11、本发明的另一方面还提供了一种草鱼spla2蛋白作为鱼类肠道紧密连接分子、肠道抗菌肽或抗氧化酶的表达促进剂的应用，上述肠道紧密连接分子选自zo-1和occludin中的一种或多种，上述肠道抗菌肽选自il-22、hepcidin-1、leap-2和lyzl中的一种或多种，上述抗氧化酶选自超氧化物歧化酶、过氧化氢酶、酸性磷酸酶和碱性磷酸酶中的一种或多种。

12、本发明的上述方案具有如下的有益效果：

13、本发明通过研究发现，草鱼spla2蛋白能够显著提高鱼类肠道紧密连接分子zo-1和occludin的表达，并降低血浆lps和d-乳酸的含量，从而强化肠道黏膜屏障，减少肠道黏膜的通透性；草鱼spla2蛋白能够显著提高鱼类肠道抗菌肽il-22、hepcidin-1、leap-2和lyzl的表达，从而提高鱼类抗菌能力；同时，草鱼spla2蛋白还能够显著提高鱼类血清中超氧化物歧化酶(sod)、过氧化氢酶(cat)、酸性磷酸酶(acp)和碱性磷酸酶(akp)的表达，从而提高鱼类抗氧化能力。因此，草鱼spla2蛋白通过强化鱼类肠黏膜屏障、提高鱼类抗菌能力和提高鱼类抗氧化能力，综合增强了鱼类抗病力、抗感染能力，能够更好地抵抗细菌侵染，提高鱼类存活率，可作为新型的饲料添加剂或治疗剂用于制备鱼类药物或饲料。

技术特征：

1.草鱼spla2蛋白在制备用于增强鱼类抗病力的产品中的应用。

2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述增强鱼类抗病力包括强化鱼类肠黏膜屏障、提高鱼类抗菌能力和提高鱼类抗氧化能力。

3.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述产品为药物或饲料。

4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述药物的剂型为片剂、胶囊剂、颗粒剂或注射剂，所述饲料为植物性饲料或动物性饲料。

5.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述鱼类为草鱼。

6.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述草鱼spla2蛋白的制备方法包括以下步骤：以草鱼肝脏cdna为模板，使用引物进行pcr扩增，获得草鱼spla2核酸片段；将所述草鱼spla2核酸片段进行双酶切，并与经过相同酶切的质粒连接，获得重组质粒；将所述重组质粒转化到大肠杆菌中，加入诱导剂诱导表达，经蛋白纯化即获得所述草鱼spla2蛋白。

7.根据权利要求6所述的应用，其特征在于，所述引物的核苷酸序列如seq id no：2和seq id no：3所示，所述质粒为pet28a，所述诱导剂为iptg。

8.一种用于增强鱼类抗病力的药物，其特征在于，包括草鱼spla2蛋白以及药用辅料。

9.一种用于增强鱼类抗病力的饲料，其特征在于，包括草鱼spla2蛋白以及标准鱼饲料。

10.草鱼spla2蛋白作为鱼类肠道紧密连接分子、肠道抗菌肽或抗氧化酶的表达促进剂的应用，其特征在于，所述肠道紧密连接分子选自zo-1和occludin中的一种或多种，所述肠道抗菌肽选自il-22、hepcidin-1、leap-2和lyzl中的一种或多种，所述抗氧化酶选自超氧化物歧化酶、过氧化氢酶、酸性磷酸酶和碱性磷酸酶中的一种或多种。

技术总结本发明提供了一种草鱼sPLA2蛋白在制备用于增强鱼类抗病力的产品中的应用。本发明通过研究发现，草鱼sPLA2蛋白能够显著提高鱼类肠道紧密连接分子ZO‑1和Occludin的表达，并降低血浆LPS和D‑乳酸的含量；显著提高鱼类肠道抗菌肽IL‑22、Hepcidin‑1、LEAP‑2和Lyzl的表达；显著提高鱼类血清中SOD、CAT、ACP和AKP的表达。因此，草鱼sPLA2蛋白通过强化鱼类肠黏膜屏障、提高鱼类抗菌能力和提高鱼类抗氧化能力，综合增强了鱼类抗病力，能够更好地抵抗细菌侵染，提高鱼类存活率，可作为新型的饲料添加剂或治疗剂用于制备鱼类饲料或药物。技术研发人员：周泽军,覃钦博,刘少军,魏泽宏,曾琼瑶,李平元受保护的技术使用者：湖南师范大学技术研发日：技术公布日：2024/6/11