一种草鱼脑细胞CIB及其应用和培养方法与流程

本发明涉及医学生物，特别是涉及一种草鱼脑细胞cib及其应用和培养方法。

背景技术：

1、草鱼(ctenopharyngodon idellus)属鲤形目鲤科雅罗鱼亚科草鱼属，一种草食性鱼类，饲养成本低，养殖地域广，是我国淡水养殖的重要品种，除新疆，青藏高原外，在我国各地均有养殖，也是广东省的淡水主养品种之一。但是草鱼养殖期间易发生病害问题，其中以病毒性出血病最甚，对我国草鱼养殖业造成巨大损失。草鱼呼肠孤病毒(grass carpreovims，gcrv)感染导致的草鱼出血病已经成为制约草鱼产业健康发展的重要因素之一。目前，对于草鱼出血病的防治，还没有特异有效的治疗药物和方法，最为有效的办法仍然是免疫预防。鱼类细胞系正是研究病毒感染途径、感染机理以及研制病毒疫苗的重要研究体系。因此，建立草鱼细胞系，是进行草鱼呼肠孤病毒的分离与鉴定，研究其致病机理，疫苗制备和免疫预防技术的重要基础。

2、迄今为止，虽然有草鱼肾脏细胞系(中国水产科学研究院长江水产研究所，左文功，水产学报，1986,10(1):11-16)、草鱼吻端组织细胞株zc-7901及其亚株zc-7901s1(浙江省淡水水产研究所，张念慈，水产学报，1981,5(2)：111-119)吻端成纤维细胞系psf(中国水产科学研究院珠江水产研究所，国家科技成果，2005，s943.112；s941.411)、草鱼尾鳍组织二倍体细胞系(中国科学院水生生物研究所，魏彦章，水生生物学报，1986,10(3):293-294)、草鱼囊胚细胞系、肝细胞系等几个细胞系的文献报道，但是仍未见脑细胞系的报道。

技术实现思路

1、为了解决上述问题，本发明提供了一种草鱼脑细胞cib及其应用和培养方法，本发明提供的草鱼脑细胞cib对草鱼出血病病毒(gcrv)和罗非鱼湖病毒(tilv)具有敏感性，为后期草鱼出血病和罗非鱼湖病毒病病原学研究及疫苗的研制奠定了基础。

2、为了实现上述目的，本发明提供如下技术方案：

3、本发明提供了一种草鱼脑细胞(ctenopharyngodon idellus)cib，所述草鱼脑细胞cib于2024年03月08日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为cctcc no：c2023388。

4、本发明还提供了一种培养上述技术方案所述草鱼脑细胞cib的方法，包括以下步骤：

5、将所述草鱼脑细胞cib接种于培养基中，得到待培养物；

6、将所述待培养物在22～32℃下进行培养。

7、优选的，所述培养基包括m199细胞培养基和/或l-15细胞培养基。

8、优选的，所述待培养物中草鱼脑细胞cib的细胞密度为4×105个/ml。

9、优选的，所述培养基中胎牛血清的体积百分含量为5～20％。

10、优选的，所述培养基中胎牛血清的体积百分含量为10～15％。

11、优选的，所述培养的温度为27℃。

12、优选的，所述培养的时间在7d以上(培养24h即可长成细胞单层)。

13、本发明还提供了上述技术方案所述的草鱼脑细胞cib在培养草鱼出血病病毒中的应用。

14、本发明还提供了上述技术方案所述的草鱼脑细胞cib在草鱼出血病病毒疫苗研制中的应用。

15、本发明的有益效果为：

16、本发明提供的草鱼脑细胞cib可以连续传代，对草鱼出血病病毒(gcrv)具有敏感性，接毒后出现细胞病变(cpe)，电镜观察可以发现增殖的病毒粒子。经这种方法传代的草鱼脑细胞系现已传至130代。

17、本发明提供的草鱼脑细胞cib，其最适培养基为m199培养基，最适胎牛血清浓度为10％，最适生长温度为27℃，生长曲线正常，可以进行连续传代，也可以对其进行冷冻保存。以草鱼呼肠孤病毒(gcrv)病毒感染细胞系可以检测到病毒粒子的存在，证实草鱼脑细胞系可以直接应用于病毒感染试验及疫苗研究。同时，该细胞对罗非鱼湖病毒tilv敏感，可用于罗非鱼湖病毒病原学研究及罗非鱼湖病毒病防控产品开发。

18、本发明提供的草鱼脑细胞cib生长快，配制的培养液营养成分全面，取材的草鱼体重恰当，该构建方法可以适用于构建其他鱼类的脑组织来源的鱼类细胞系，应用价值极大。

技术特征：

1.一种草鱼脑细胞(ctenopharyngodon idellus)cib，其特征在于，所述草鱼脑细胞cib于2024年03月08日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为cctcc no：c2023388。

2.一种培养权利要求1所述草鱼脑细胞cib的方法，其特征在于，包括以下步骤：

3.根据权利要求2所述的培养方法，其特征在于，所述培养基包括m199细胞培养基和/或l-15细胞培养基。

4.根据权利要求2所述的培养方法，其特征在于，所述待培养物中草鱼脑细胞cib的细胞密度为4×105个/ml。

5.根据权利要求2或3所述的培养方法，其特征在于，所述培养基中胎牛血清的体积百分含量为5～20％。

6.根据权利要求5所述的培养方法，其特征在于，所述培养基中胎牛血清的体积百分含量为10～15％。

7.根据权利要求5所述的培养方法，其特征在于，所述培养的温度为27℃。

8.根据权利要求5所述的培养方法，其特征在于，所述培养的时间在7d以上。

9.权利要求1所述的草鱼脑细胞cib在培养草鱼出血病病毒中的应用。

10.权利要求1所述的草鱼脑细胞cib在草鱼出血病病毒疫苗研制中的应用。

11.权利要求1所述的草鱼脑细胞cib在培养罗非鱼湖病毒中的应用。

技术总结本发明涉及医学生物技术领域，特别是涉及一种草鱼脑细胞CIB及其应用和培养方法。所述草鱼脑细胞CIB于2024年03月08日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC NO：C2023388。本发明提供的草鱼脑细胞CIB，其最适培养基为M199培养基，最适胎牛血清浓度为10％，最适生长温度为27℃，生长曲线正常，可以进行连续传代，也可以对其进行冷冻保存。以草鱼呼肠孤病毒(GCRV)病毒感染细胞系可以检测到病毒粒子的存在，证实草鱼脑细胞系可以直接应用于病毒感染试验及疫苗研究。技术研发人员：王英英,王庆,李莹莹,尹纪元,莫绪兵,任燕,张德锋,石存斌,王亚军受保护的技术使用者：中国水产科学研究院珠江水产研究所技术研发日：技术公布日：2024/6/18