洋川芎内酯A在制备抗真菌药物中的应用

本发明属于医药，具体的说，涉及一种洋川芎内酯a在制备抗真菌药物中的应用。

背景技术：

1、药用川芎为伞形科植物川芎的干燥根茎，具有活血行气、祛风止痛的功效。目前研究证实，川芎富含挥发油，挥发油中的主要成分为苯酞类、萜类和脂肪酸。苯酞类成分主要含有藁本内酯、洋川芎内酯、丁苯酞等。有研究表明川芎乙醇提取物对10种植物病原真菌有广谱抑菌活性，而且通过硅胶柱色谱分离、hplc制备、ei-ms,1h-nmr,13c-nmr等技术确定了藁本内酯和洋川芎内酯a是植物杀菌剂的主要成分[chen h,zhao y,qin g,etal.antifungal effects and active components of ligusticumchuanxiong.molecules.2022，27(14):4589.]。还有研究开发了化学计量学结合统计学设计方法，从66种精油中寻找到6种抗人病原微生物白色念珠菌活性化合物，其中z-藁本内酯有较强的抗真菌活性[rodrigues ams,eparvier v,odonne g,et al.the antifungalpotential of(z)-ligustilide and the protective effect of eugenol demonstratedby a chemometric approach.sci rep.2019,9(1):8729.]。除此之外，采用微量稀释法研究发现，川芎挥发油及其中的两种成分藁本内酯和丁烯基苯酞对6种毛癣菌有显著的抑制作用，而且改善了毛癣菌对酮康唑和伊曲康唑的敏感性[sim,y.and s.shin,combinatorial anti-trichophyton effects of ligusticum chuanxiong essentialoil components with antibiotics.arch pharm res.2008,31(4):497-502.]。丁苯酞对白色念珠菌具有抗菌活性，与氟康唑联合对耐药的白色念珠菌表现出协同抗菌作用[yinggong,weiguo liu,xin huang,et al.antifungal activity and potential mechanismofn-butylphthalide alone and in combination with fluconazole against candidaalbicans.front microbiol.2019,10:1461.]。

2、高效薄层-生物自显影(high performance thin layer chromatography-bioautography，hptlc-bioautography)技术是一种将薄层色谱分离和生物活性测定相结合的有效活性成分高通量筛选技术，在中药效应-成分分析方面具有独特的优势。样品经tlc展开，溶剂蒸发后的薄层板上保留了许多经过分离后的成分，通过直接与酶相互作用，进行微化学反应或抑制细菌生长等生化和生物方法的检测，可以实现从复杂体系中筛选出效应成分的目的。近些年来被用于筛选具有酶抑制、抗细菌/真菌、清除自由基等活性的天然产物成分[[5].krüzselyi d,nagy r,ott pg,et al.rapid,bioassay-guided processfor the detection and identification ofantibacterial neem oil compounds.jchromatogr sci，2016,54(7):1084-9.[6].dewanjee s,gangopadhyay m,bhattacharyan,et al.bioautography and its scope in the field of natural productchemistry.j pharm anal.2015,5(2):75-84.[7].ramallo ia,salazar mo,furlanrl.thin layer chromatography-autography-high resolution mass spectrometryanalysis:accelerating the identification of acetylcholinesteraseinhibitors.phytochem anal.2015,26(6):404-12.[8].wojtanowski kk，mroczekt.study of a complex secondary metabolites with potent anti-radical activityby two dimensional tlc/hplc coupled to electrospray ionization time-of-flightmass spectrometry and bioautography.analytica chimica acta.2018,1029:104-115.]。目前为止，采用hptlc-bioautography对川芎挥发油中成分洋川芎内酯a的抗菌活性研究未见报道。

技术实现思路

1、本发明的目的是提供一种洋川芎内酯a在制备抗真菌药物中的应用。

2、为了实现上述目的，本发明采用的技术方案如下：

3、本发明的第一方面，提供了一种洋川芎内酯a或其药用盐在制备抗真菌药物中的应用。

4、所述洋川芎内酯a的结构(chen h,zhao y,qin g,et al.antifungal effectsand active components of ligusticum chuanxiong.molecules.2022，27(14):4589.león a,m,jl,et al.phthalides:distribution in nature,chemicalreactivity,synthesis,and biological activity.prog chem orgnat prod.2017,104:127-246.)如下所示：

5、

6、所述真菌选自白色念珠菌(c.albicans(cmcc(f)98001)、c.albicans(flz901)、c.albicans(y0109)和c.albicans(sc5314))。

7、本发明提供的洋川芎内酯a或其药用盐在制备抗真菌药物中的应用，所述应用中洋川芎内酯a或其药用盐作为单一活性成分或者与其他抗真菌药物组合。

8、由于采用上述技术方案，本发明具有以下优点和有益效果：

9、本发明通过体外筛选川芎挥发油抗白色念珠菌活性成分。以水蒸气蒸馏法提取川芎挥发油。c.albicans(cmcc(f)98001)、c.albicans(flz901)、c.albicans(y0109)和c.albicans(sc5314)4种菌种为试验对象，采用改良kirby-bauer纸片扩散法进行抗菌敏感试验。发现川芎挥发油对4种不同的白色念珠菌有显著的抑菌活性，对耐氟康唑的白色念珠菌c.albicans flz901也不例外，说明川芎挥发油中存在抗白色念珠菌活性成分。为了寻找川芎挥发油中的抗真菌活性成分，首次建立hptlc-bioautography方法进行活性成分筛选。川芎挥发油点于硅胶gf254hptlc板上，以环己烷-乙酸乙酯(9:1)为展开剂，展开。取经优化的c.albicans(cmcc(f)98001)菌液浓度，迅速倾倒于展开的薄层板上，于35℃培养18h，用0.5％mtt溶液喷洒hptlc板，继续培养4h，确认抑菌活性斑点。采用hplc-ms/ms方法进一步确认主要活性斑点成分:c18反相柱(5μm，4.6×150mm)，流动相为甲醇-0.1％甲酸水溶液(48：52，v/v)。电喷雾离子源(esi)，正离子模式扫描，采用多反应监测(mrm)模式检测。两个主要斑点的分子离子峰和产物离子的m/z信息分别与藁本内酯和洋川芎内酯a标准品的质谱信息一致，确认斑点的成分为藁本内酯和洋川芎内酯a。

10、本发明采用hptlc-bioautography方法首次从川芎挥发油中筛选出对白色念珠菌有抑菌活性的苯酞内酯-洋川芎内酯a。为了进一步验证它的抗真菌活性，本发明又采用改良kirby-bauer纸片扩散法进行抗菌敏感试验，结果显示洋川芎内酯a对本发明所用的4种测试白色念珠菌均有较敏感的抑菌活性，包括耐氟康唑的c.albicans(flz901)。