一种提高干细胞外泌体抗皮肤衰老活性的混合制剂及制备方法与应用

本发明属于化妆品领域，具体涉及一种提高干细胞外泌体抗皮肤衰老活性的混合制剂及制备方法与应用。

背景技术：

1、间充质干细胞因其较强的增殖能力和可塑性，不仅能促进损伤组织再生，而且能抑制衰老过程，逐渐成为皮肤抗衰老领域的研究热点。

2、外泌体是干细胞旁分泌至关重要的生物活性囊泡，在细胞间传递生物学信息并发挥各种生物活性，不仅能减少衰老细胞内活性氧ros的水平、降低细胞的衰老程度，还能促进真皮层成纤维细胞的增殖、提高胶原蛋白的合成、维持皮肤的弹性和水分。与干细胞相比，外泌体易于保存、免疫原性低，有望成为干细胞生物学功能的替代物，具有极大的抗皮肤衰老的潜力。研究表明，不同组织来源的外泌体能不同程度地促进成纤维细胞分泌基质蛋白、增强i/iii型胶原和弹性蛋白的产生，加快细胞的迁移、增殖以及基质层的生成。

3、而现今干细胞外泌体抗衰老技术尚未成熟，如存在外泌体提取率低、量化生产困难、运输储存条件苛刻等现有问题，常导致外泌体在使用中受到一定限制。

技术实现思路

1、基于上述技术背景，本发明的主要目的在于提供一种提高干细胞外泌体抗皮肤衰老活性的混合制剂及制备方法与应用，以弥补现有技术中的不足。

2、为实现前述发明目的，本发明采用的技术方案包括：

3、本发明第一方面在于提供一种提高干细胞外泌体抗皮肤衰老活性的混合制剂，所述提高干细胞外泌体抗皮肤衰老活性的混合制剂由干细胞替代物和促进剂制得；

4、所述干细胞替代物选自干细胞外泌体、干细胞外泌体制剂和干细胞条件培养基中的一种或几种；

5、所述促进剂选自水解胶原蛋白肽溶液和水解胶原蛋白肽传递体中的一种或两种。

6、优选地，所述干细胞替代物和促进剂的质量比为(70～120)∶1。

7、优选地，所述水解胶原蛋白肽传递体由水解胶原蛋白肽、磷脂、胆固醇和边缘活性剂制得；

8、水解胶原蛋白肽、磷脂、胆固醇和边缘活性剂的质量比为(50～150)∶(800～1000)∶(150～200)∶1。

9、更优选地，所述磷脂选自蛋黄卵磷脂、大豆卵磷脂中的一种或两种；

10、所述边缘活性剂选自吐温80、司班80、胆酸钠中的一种或几种。

11、本发明第二方面在于提供一种制备本发明第一方面所述提高干细胞外泌体抗皮肤衰老活性的混合制剂的方法，所述方法包括以下步骤：

12、将干细胞替代物和促进剂混合后于室温孵育20～45min，然后挤压依次通过0.70～0.90μm、0.40～0.50μm、0.20～0.30μm的微孔滤膜，即得。

13、优选地，所述干细胞替代物的制备方法包括以下步骤：

14、采用含胎牛血清的培养基将干细胞培养至3～6代，然后更换为含去除外泌体的血清的培养基继续培养，收集培养基经离心、过滤，得到干细胞替代物；

15、所述干细胞为人脐带间充质干细胞、脂肪间充质干细胞和骨髓间充质干细胞中的一种或几种。

16、更优选地，所述含胎牛血清的培养基为含5～15％(体积百分比)胎牛血清的dmem-f12培养基，于37℃、3％～10％co2的条件下进行培养至细胞贴壁生长至培养皿的70％～80％，更换为含去除外泌体的血清的dmem-f12培养基继续培养24～48h，收集培养基在4℃依次于300～700g离心5～15min、于9000～12000g离心20～45min，去除细胞碎片，取上清液过0.20～0.30μm滤膜，然后于100000～150000g离心60～90min，去上清，pbs洗涤，于100000～150000g再次离心60～90min，去上清，pbs重悬，得到干细胞外泌体。

17、更优选地，所述含胎牛血清的培养基为含体积百分比为5～15％胎牛血清的dmem-f12培养基，于37℃、3％～10％co2的条件下进行培养至细胞贴壁生长至培养皿的70％～80％，更换为含去除外泌体的血清的dmem-f12培养基继续培养24～48h，收集培养基于4℃、200～500g离心3～10min，取上清液过0.20～0.30μm滤膜，得到干细胞条件培养基。

18、优选地，所述促进剂包括水解胶原蛋白肽溶液和水解胶原蛋白肽传递体中的一种或两种；

19、优选地，水解胶原蛋白肽溶液的制备方法包括以下步骤：

20、将水解胶原蛋白肽置于超纯水中搅拌均匀，然后过0.20～0.40μm滤膜即得；

21、优选地，水解胶原蛋白肽传递体的制备方法包括以下步骤：

22、步骤a、将磷脂和胆固醇加入氯仿中至完全溶解，然后于25～35℃减压蒸发至形成均匀的脂质层，随后真空干燥至溶剂完全挥发；

23、步骤b、将水解胶原蛋白肽、边缘活性剂和超纯水混合，加入步骤a的体系中于20～30℃、50～150rpm的搅拌速度搅拌水化0.5～2h，得到水解胶原蛋白肽脂质囊泡；

24、步骤c、脂质囊泡于室温下膨胀1～3h后超声处理20～30min，然后依次挤压通过0.70～0.90μm、0.40～0.50μm、0.20～0.30μm的微孔滤膜，得到水解胶原蛋白肽传递体。

25、本发明第三方面在于提供一种本发明第一方面所述提高干细胞外泌体抗皮肤衰老活性的混合制剂在皮肤抗衰老领域的应用。

26、本发明所具有的有益效果：

27、(1)本发明利用低分子量水解胶原蛋白肽或其传递体作为干细胞外泌体的促进剂，提高了干细胞外泌体的抗衰老效果，成分安全、抗衰老效果好；

28、采用的低分子量水解胶原蛋白肽除了可以作为促进剂，还具有抗氧化、促进伤口愈合等作用，可以与干细胞替代物产生协同效应更好的发挥抗衰老作用，因此在使用时无需考虑其对于后续化妆品剂型及种类的不利影响，拓宽了应用场景。

29、(2)本发明所述水解胶原蛋白肽传递体是在脂质体的基础上添加边缘活性剂得到的，边缘活性剂的添加使磷脂双分子层的流动性更强，能够通过挤压变形通过小于其自身粒径数倍的皮肤角质细胞间隙，具有优异的透皮效果，不仅可以有效提高成分的稳定性，还具有两亲性、生物相容性等优点。

30、(3)本发明所述提高干细胞外泌体抗皮肤衰老活性的混合制剂的制备方法简单，成分安全，制备过程无需高温高压，对设备要求低。本发明解决了外泌体因为提取率低、量化生产困难而导致其使用受限的问题，为提高抗衰老活性提供了新思路。

技术特征：

1.一种提高干细胞外泌体抗皮肤衰老活性的混合制剂，其特征在于，所述提高干细胞外泌体抗皮肤衰老活性的混合制剂由干细胞替代物和促进剂制得；

2.根据权利要求1所述的提高干细胞外泌体抗皮肤衰老活性的混合制剂，其特征在于，

3.根据权利要求1所述的提高干细胞外泌体抗皮肤衰老活性的混合制剂，其特征在于，

4.根据权利要求3所述的提高干细胞外泌体抗皮肤衰老活性的混合制剂，其特征在于，

5.一种制备权利要求1至4之一所述提高干细胞外泌体抗皮肤衰老活性的混合制剂的方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：

6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，所述干细胞替代物的制备方法包括以下步骤：

7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，

8.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，

9.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，

10.一种权利要求1至4之一所述提高干细胞外泌体抗皮肤衰老活性的混合制剂在抗皮肤衰老领域的应用。

技术总结本发明属于化妆品领域，具体涉及一种提高干细胞外泌体抗皮肤衰老活性的混合制剂及制备方法与应用。所述提高干细胞外泌体抗皮肤衰老活性的混合制剂由干细胞替代物和促进剂制得；所述干细胞替代物选自干细胞外泌体、干细胞外泌体制剂和干细胞条件培养基中的一种或几种；所述促进剂选自水解胶原蛋白肽溶液和水解胶原蛋白肽传递体中的一种或两种。本发明通过促进剂的添加，有效提高了干细胞替代物的抗衰老作用。此外，该混合制剂成分安全，制备方法简单，在化妆品领域具有良好的应用前景。技术研发人员：乔华,宋慧芳,朱惠敏,解军,张永清受保护的技术使用者：山西医科大学技术研发日：技术公布日：2024/6/13