促进角质形成细胞增殖和迁移的细胞促进剂的制作方法

本发明涉及化妆品原料功效研究领域，具体涉及一种来源于卷柏的具有促进角质形成细胞增殖和迁移能力的醇提物，可以作为化妆品活性物原料和细胞促进剂。

背景技术：

1、皮肤的表皮一个动态的分化过程，主要是由不同分化程度的角质形成细胞组成的，按照分化阶段和形态可以分为基底层、棘层、颗粒层和角质层。表皮在皮肤的最外层，既防止皮肤内营养物质和水分的丢失，也抵御着外界环境中的各种抗原物质、微生物、紫外线的侵袭，因此皮肤表皮对于维持生命的生存至关重要。角质形成细胞是皮肤表皮中的主要组成细胞，其正常的增殖和分化对于维持皮肤表皮的正常生理功能至关重要。

2、皮肤屏障的正常生理功能易受多种因素影响，包括内源性因素和外源性因素、化学因素、不良生活方式、医源性因素等。内源性因素包括遗传、年龄、性别等；外源因素包括环境因素，如大气污染、季节交替、日晒、温度变化等；化学因素，如清洁用品、消毒产品、不良化妆品使用等；；生活方式如刺激性饮食、酗酒等；医源性因素如外用刺激性药物、长期外用糖皮质激素药膏，以及激光等有创性治疗等。多种外因和内因互相作用，导致表皮屏障功能障碍，会对消费者的皮肤屏障造成不同程度的损伤。

3、表皮屏障的功能损伤表现多样，可表现为水分、脂质失调，也可表现为脂质双分子层、角质层结构破坏。临床常表现为片状或弥漫性潮红、红斑、毛细血管扩张、细小糠状鳞屑，偶轻度肿胀，可伴有灼热、刺痛、瘙痒、干燥、紧绷感等自觉症状，受外界物理、化学、精神等因素刺激后可诱发或导致症状加重，皮损反复发作。

4、由于角质形成细胞是皮肤表皮中的主要组成细胞，因此受损的皮肤屏障可以通过具有修复能力的活性物质促进角质形成细胞的增殖和迁移，进而促进表皮屏障损伤的修复，提升表皮屏障的完整性，发挥皮肤表皮的正常生理功能。

5、卷柏属(selaginella)植物隶属蕨类植物门石松纲(lycopsida)卷柏科(selaginellaceae)，为植物界少见的单科单属植物，在全世界分布约有700余种，我国约有70余种，广泛分布于全国各地。卷柏(selaginella tamariscina)和垫状卷柏(selaginellapulvinata)为2020年版中国药典收载品种。卷柏，拳拳如鸡足，但生命力极强，遇水而荣，故又名九死还魂草、还魂草、复活草、长生草、回阳草、见水还阳草。其研究的价值得利于其顽强的生命力和富含的化学成分。现代药理研究表明卷柏属植物具有抗肿瘤、抗菌抗病毒、抗炎、抗衰老、降血糖等多种药理活性，但关于卷柏在屏障修复方面的研究和专利还较少。

6、例如，中国发明专利申请cn114557905a公开了一种内源性细胞调节系统及其应用。该系统包含提纯自天然动植物中的核苷类化合物、不饱和脂肪酸、饱和脂肪酸和蛋白类物质等进行特定的配比和组合，多靶点、多层次、多途径、全方位地活化细胞，优化皮肤细胞微生态，恢复细胞年轻态，维持细胞健康态，重建细胞内源性功能，从而改善皮肤组织的解剖结构与功能。该申请中所述黄酮类物质优选自卷柏，但未明确卷柏黄酮类物质的屏障修复功效。

7、又如，中国发明专利申请cn109157452a公开了一种含茶氨酸的植物提取物免洗睡眠面膜。面膜配方中含有复活草提取物0.5-10％，且复活草提取物包含甘油葡糖苷。甘油葡糖苷能增强细胞活力和新陈代谢、激活再生皮肤细胞、加速伤口愈合及组织修复，同时它也可以提高表皮层中水通道蛋白的含量，增强皮肤的屏障功能，减少经皮水分的蒸发，对肌肤保湿性增强。该申请中，未明确复活草提取物具有屏障修复的功效。

8、中国发明专利申请cn116869895a公开了一种促进水通道蛋白表达、增强屏障的组合物及其制备和应用。发明申请中所述组合物包括白及提取物1-6份、麦冬提取物1-4份、玉竹提取物1-4份、卷柏提取物0.1-2份；复配后协同增效，在提高水通道蛋白的浓度、保湿上具有显著的优势；对皮肤的深层保湿、皮肤屏障性能的提升有非常明显的帮助。发明申请中并未单独对卷柏提取物进行屏障功能相关测试，因此该发明申请也未明确卷柏提取物具有屏障修复的功效。

9、然而，本发明意外地发现，卷柏醇提物具有促进角质形成细胞增殖和迁移的功效，可以作为一种细胞促进剂，应用于各种化妆品产品。

技术实现思路

1、一方面，本发明提供了一种促进角质形成细胞增殖和迁移的细胞促进剂，其中，所述细胞促进剂是卷柏醇提物，所述卷柏醇提物中总糖含量≥35.8wt％，总多酚含量≥2.32wt％，和/或总黄酮含量≥6.57wt％。

2、在优选的实施方式中，所述卷柏醇提物采用乙醇作为提取溶剂，通过回流法萃取，减压浓缩后获得卷柏醇提物。优选地，提取溶剂是75-95体积％的乙醇。优选地，所述卷柏醇提物采用干燥全草提取。

3、在优选的实施方式中，所述卷柏醇提物中穗花杉双黄酮的含量至少为4wt％。在一个具体的实施方式中，所述卷柏醇提物中穗花杉双黄酮的含量为4.5663wt％。

4、在优选的实施方式中，所述卷柏醇提物的hplc分析图谱的主要峰的保留时间(峰面积％)为：uv＝250nm：峰1：1.281(7.9429)；峰2：1.652(0.3670)；峰32.011(3.1067)；峰4：2.467(0.1695)；峰5：2.626(0.4838)；峰6：2.794(0.0460)；峰7：3.112(0.4206)；峰8：4.459(0.5235)；峰9：9.853(0.2844)；峰10：10.762(0.2031)；峰11：11.223(0.2484)；峰12：12.255(0.1753)；峰13：12.758(0.0687)；峰14：12.933(0.0946)；峰15：13.085(0.1124)；峰16：13.315(0.0951)；峰17：13.417(0.1043)；峰18：13.502(0.0505)；峰19：13.601(0.1183)；峰20：14.596(0.0525)；峰21：14.806(2.0035)；峰22：15.560(0.1051)；峰23：15.830(0.1182)；峰24：16.682(0.4058)；峰25：17.495(0.1861)；峰26：18.055(0.9343)；峰27：18.354(0.3466)；峰28：19.061(0.3545)；峰29：21.376(62.6797)；峰30：22.638(2.6324)；峰31：23.230(0.4284)；峰32：25.179(0.2245)；峰33：27.087(0.2313)；峰34：30.216(1.9403)；峰35：33.754(0.5459)；峰36：38.072(0.8158)；峰37：41.642(0.7323)；峰38：44.234(1.2792)；峰39：45.557(1.4091)；峰40：49.900(0.3102)；峰41：50.243(0.0892)；峰42：50.855(0.5088)；峰43：51.065(0.1996)；峰44：51.768(0.8595)；峰45：52.047(0.5146)；峰46：52.171(0.1519)；峰47：52.266(0.2738)；峰48：52.608(0.5869)；峰49：52.877(1.0135)；峰50：53.093(0.1042)；峰51：53.333(0.1272)；峰52：53.541(0.0530)；峰53：53.908(0.5523)；峰54：54.005(0.6195)；峰55：54.379(0.5189)；峰56：55.388(0.0719)；峰57：55.719(0.0951)；峰58：55.982(0.1698)；峰59：56.294(1.1396)。

5、在优选的实施方式中，所述卷柏醇提物的分散浓度为0.1wt％时的电导率为32.6μs/cm，优选地，散浓度为1wt％时的电导率为298.1μs/cm。

6、在优选的实施方式中，所述卷柏醇提物的促进角质形成细胞迁移的相对迁移率平均值≥1.218，优选地为1.218-1.605。

7、在优选的实施方式中，所述卷柏醇提物处理角质形成细胞24h时，促进角质形成细胞增殖的相对活力≥124.5％，优选的相对活力为124.5％-149.00％。

8、在优选的实施方式中，所述细胞促进剂的使用浓度至少为0.0025mg/ml，优选地为0.0025-0.02mg/ml。

9、另一方面，本发明涉及所述细胞促进剂的制备方法，包括以下步骤：

10、(a)提供卷柏，粉碎，过筛，烘干；

11、(b)用乙醇浸泡；

12、(c)回流法萃取；

13、(d)过滤至浓缩罐，减压浓缩，得到卷柏醇提物。

14、在优选的实施方式中，所述步骤(a)采用100目筛实现过筛。

15、在优选的实施方式中，所述步骤(b)采用的料液比为1kg卷柏:10l乙醇。

16、又一方面，本发明还涉及所述细胞促进剂在皮肤外用剂中的应用，用于促进角质形成细胞增殖和迁移。

17、在优选的实施方式中，所述皮肤外用剂选自：面霜、乳液、啫喱、化妆水、精华液、面膜、眼霜、气雾清洁泡、喷雾、沐浴露、或洗面奶等。