一种基于DNA四面体框架的miR递送复合物及其制备方法和在促进创口愈合中的应用

本发明属于核酸分子药物领域，具体涉及一种基于dna四面体框架的mir递送复合物及其制备方法和在促进创口愈合中的应用。

背景技术：

1、microrna(mir)由于其调控着人体几乎所有的生命过程而在核酸药物领域扮演着举足轻重的角色，近年来，mir治疗成为了基因治疗领域研究的重点。简单来说，mir疗法就是通过使用mir模拟物来进行mir替代疗法或是通过mir抑制剂抑制mir的功能。因时效长、毒性小等特点，在肿瘤、传染病、遗传病、罕见病等领域，mir疗法已经展露其优于小分子和抗体的优势，近年来核酸药物的上市速度也呈加快趋势。然而由于在核酸药物递送中的存在的一些难题(如生物安全性问题、递送过程中药物的降解问题)，导致核酸药物最终效果不确定。此外，由于易降解、入胞难以及靶向性差等问题阻碍了rna疗法临床应用的全面展开。因此，mir的递送载体的开发是mir治疗的主要挑战，目前已经开发出了诸如病毒载体，脂质体，树枝状大分子等多样化的递送系统。但上述递送系统存在生物安全性低，毒性高和转染率低等问题，使得绝大部分mir治疗停留在了临床前阶段。

2、当前rna递送系统因生物毒性、包封不均一、靶向性差、可降解性差等问题，限制了其大规模生产与临床应用。寻找高度可控且可重复的方式实现rna药物的高效递送是rna疗法瓶颈。

3、基于watson-crick杂交原则，dna具有良好的可编辑性，这也使得dna纳米技术在1982年首次被提出以来，能够在各种领域飞速发展并应用广泛。由于dna纳米结构具有良好的生物学稳定性与生物相容性，可编辑性以及出色的穿透细胞膜能力，使得dna纳米结构能够在药物运输领域具有巨大的应用潜力。目前已被证实的是，dna四面体框架结构(tfna)，既能够运输具有正电荷的多肽，也能运输带有负电荷的dna和rna。作为目前已成功合成的最简单的dna纳米结构，tfna能够以小窝蛋白依赖的方式被细胞内吞，最终将所装载的“货物”运输到细胞内部。

4、尽管目前使用将核酸药物修饰在tfna顶点或悬挂在侧臂的方式实现了mirna的递送与mir治疗，然而这些方式不仅破坏了四面体这一结构特性，还增加了纳米结构的尺寸，这将使得tfna无法获得最佳的入胞效率和组织穿透能力。这种运载模式将mir暴露在载体外部，给mir的递送带来更多地不稳定性。

技术实现思路

1、为了解决现有技术存在的问题，本发明提供了一种基于dna四面体框架的mir递送复合物及其制备方法和在促进创口愈合中的应用。

2、本发明提供了一种基于dna四面体框架的mir递送复合物，它是由3条寡核苷酸链和3条末端连接有酶切位点的micro rna通过碱基互补配对得到的四面体框架核酸；所述3条寡核苷酸链的序列如seq id no.1～3所示，所述3条末端连接有酶切位点的micro rna的序列如seq id no.4所示。

3、进一步地，所述mir递送复合物由如下方法制而成：将seq id no.1～3所示的寡核苷酸链和seq id no.4所示的mirna溶于溶剂中，然后置于90～95℃维持10～15min，再将温度降低到2～8℃维持20min以上，即得。

4、进一步地，所述seq id no.1～3所示的寡核苷酸链和seq id no.4所示的mirna的摩尔比为1:1:1:3。

5、进一步地，所述溶剂为tm缓冲液，其中tris-hcl浓度为10mm，mgcl2浓度为50mm，ph为8.0。

6、本发明还提供了一种制备前述的mir递送复合物的方法，它包括如下步骤：

7、将seq id no.1～3所示的寡核苷酸链和seq id no.4所示的mirna溶于溶剂中，然后置于90～95℃维持10～15min，再将温度降低到2～8℃维持20min以上，即得。

8、进一步地，所述seq id no.1～3所示的寡核苷酸链和seq id no.4所示的mirna的摩尔比为1:1:1:3。

9、进一步地，所述溶剂为tm缓冲液，其中tris-hcl浓度为10mm，mgcl2浓度为50mm，ph为8.0。

10、本发明还提供了前述的mir递送复合物在制备促进创口愈合的药物中的用途。

11、本发明还提供了一种促进创口愈合的药物，它是前述的mir递送复合物为活性成分，加上药学上可接受的辅料或辅助性成分制备而成的制剂。

12、与现有技术相比，本发明的有益效果为：

13、本发明提供了一种基于dna四面体框架的mir递送复合物(birds)，其以dna四面体框架为核酸骨架，外部环绕mir mimics。这种结构将mir融入了到dna四面体框架的内部，保持了dna四面体框架小尺寸的同时还维持了dna四面体框架的结构特点。而且相较于现有mir递送方式，birds具有组织渗透性，并且在复杂的血清环境中展示出了极为出色的稳定性。本发明利用birds搭载mir-132并且探索其在促进创口愈合中的应用，研究证明其可通过皮肤渗透发挥效果，且发挥优秀的、协同增效的促进创口愈合作用。

14、本发明构建了一个运载mir的载体，该载体具有出色的稳定性、生物学相容性、入胞能力和组织渗透性。birds的构建使得载体不再是mir治疗的一大短板，在mir治疗中具有良好高的应用前景，同时也为其他核酸类似物(lna，pna等)的递送提供了一条新思路。

15、显然，根据本发明的上述内容，按照本领域的普通技术知识和惯用手段，在不脱离本发明上述基本技术思想前提下，还可以做出其它多种形式的修改、替换或变更。

16、以下通过实施例形式的具体实施方式，对本发明的上述内容再作进一步的详细说明。但不应将此理解为本发明上述主题的范围仅限于以下的实例。凡基于本发明上述内容所实现的技术均属于本发明的范围。

技术特征：

1.一种基于dna四面体框架的mir递送复合物，其特征在于：它是由3条寡核苷酸链和3条末端连接有酶切位点的micro rna通过碱基互补配对得到的四面体框架核酸；所述3条寡核苷酸链的序列如seq id no.1～3所示，所述3条末端连接有酶切位点的micro rna的序列如seq id no.4所示。

2.根据权利要求1所述的mir递送复合物，其特征在于：所述mir递送复合物由如下方法制而成：将seq id no.1～3所示的寡核苷酸链和seq id no.4所示的mirna溶于溶剂中，然后置于90～95℃维持10～15min，再将温度降低到2～8℃维持20min以上，即得。

3.根据权利要求2所述的mir递送复合物，其特征在于：所述seq id no.1～3所示的寡核苷酸链和seq id no.4所示的mirna的摩尔比为1:1:1:3。

4.根据权利要求2所述的mir递送复合物，其特征在于：所述溶剂为tm缓冲液，其中tris-hcl浓度为10mm，mgcl2浓度为50mm，ph为8.0。

5.一种制备权利要求1～4任一项所述的mir递送复合物的方法，其特征在于：它包括如下步骤：

6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于：所述seq id no.1～3所示的寡核苷酸链和seq id no.4所示的mirna的摩尔比为1:1:1:3。

7.根据权利要求5所述的方法，其特征在于：所述溶剂为tm缓冲液，其中tris-hcl浓度为10mm，mgcl2浓度为50mm，ph为8.0。

8.权利要求1～4任一项所述的mir递送复合物在制备促进创口愈合的药物中的用途。

9.一种促进创口愈合的药物，其特征在于：它是由权利要求1～4任一项所述的mir递送复合物为活性成分，加上药学上可接受的辅料或辅助性成分制备而成的制剂。

技术总结本发明提供了一种基于DNA四面体框架的miR递送复合物及其制备方法和在促进创口愈合中的应用，属于核酸分子药物领域。本发明miR递送复合物是由3条寡核苷酸链和3条末端连接有酶切位点的micro RNA通过碱基互补配对得到的四面体框架核酸；所述3条寡核苷酸链的序列如SEQ ID NO.1～3所示，所述3条末端连接有酶切位点的micro RNA的序列如SEQ ID NO.4所示。本发明miR递送复合物具有优秀的促进创口愈合作用。技术研发人员：林云锋,吕潇颖,吴昊妍,李松航,蔡潇潇受保护的技术使用者：四川大学技术研发日：技术公布日：2024/6/13