一种心肌损伤修复物及其制备方法与流程

本发明涉及生物制药领域，具体涉及一种心肌损伤修复物及其制备方法。

背景技术：

1、近些年来，随着人们生活水平的提高，心梗的发病率逐年提高，发病年龄趋早，病情进展迅速，其诱发的进行性心功能失常严重影响了患者的生活质量，给社会和家庭带来了极大的经济负担。心肌梗死是由于多种原因导致的冠状动脉闭塞，血流中断，闭塞血管所支配的心肌长时间缺血及缺氧发生坏死，严重时急性期即可出现心脏破裂、恶性心律失常而导致死亡。心梗后由于心肌细胞坏死，纤维组织代偿增生，瘢痕形成，可出现心脏大小、形状、厚度等结构改变导致心室重塑。

2、心力衰竭（heart failure,hr）简称心衰，是指由于心脏的收缩功能和/或 舒张功能失常，心脏不能有效的泵血，不能把静脉回流的血液排出，导致器官血液灌注不足，静脉系统淤血，出现的症候群。几乎所有的心血管疾病最终都会导致心力衰竭的发生。心肌梗死、心肌病、血流动力学负荷过重、炎症等任何原因引起的心肌损伤，均可造成心肌结构和功能的变化，最后导致心室泵血和/或充盈功能低下。

3、近年来，由于心脏介入手术的广泛实施，显著地缩短了心梗发病到冠状动脉重新开通时间，因此急性心梗的死亡率也随之明显下降。另外，一些针对心梗引起的神经-免疫-内分泌紊乱等多种信号分子以及下游信号转导途径的异常的药物不断被开发出来并应用于临床，也有效延缓了心肌重塑的进程。但是，随着人口老龄化的增加以及心梗发病率的升高，如何延缓心肌重构，减慢梗死后心肌损伤的发展仍然是临床面临的严峻课题。

4、细胞外基质（ecm） 是存在于组织细胞表面或之间的一组蛋白大分子。它们一方面起着支撑和连接细胞、维持器官形态的机械性作用；另一方面调节细胞的分化、增殖和功能，在多种生理和病理状态下发挥作用。应用生化的方法，可将细胞外基质分成三大类：（1）胶原蛋白；2）非胶原糖蛋白；3）蛋白多糖。在非胶原糖蛋白中，最重要的成分之一为层粘连蛋白（ laminin，ln）。由至少 15 个成员组成的异源三聚体糖蛋白家族，是由多种类型细胞合成的细胞外基质成分，在各种动物的胚胎及成体组织中构成基膜结构，还与糖胺聚糖结合，是基底膜中iv型胶原与周围基质结合的桥梁，与细胞的黏着、迁移等重要功能有关。层粘连蛋白的功能还包括影响细胞的有丝分裂、细胞迁移、神经轴突的引导以及维持分化的细胞表型，甚至诱导新表型的表达，如导致内皮细胞形成类似于血管发生过程中的管样结构形成；上皮细胞构建管样结构等。

5、现有技术的研究表明，在心梗患者以及多种心脏疾病导致的心肌损伤患者的血清和心肌细胞中，层粘连蛋白的含量相对于正常的心肌细胞增加明显。表明层粘连蛋白可能参与了心肌损伤过程的信号传导的过程。已有的研究表明，层粘连蛋白参与了多种心脏疾病模型中的心肌损伤，从而导致了心脏畸形的发生。

6、rna干扰（rna interference, rnai）是指内源性或外源性双链rna（dsrna）诱导细胞内同源靶基因的mrna发生特异性降解，从而导致转录后基因表达沉默的现象。利用双链的rna引发同源基因沉默，就能够特异的抑制同源基因的表达。该技术具有特异性和高效性，方法简便、周期较短，日益受到人们的重视。已经被广泛应用于基因功能的探索、细胞信号转导途径的分析、药物靶基因的筛选以及预防和治疗肿瘤、病毒感染等研究中。许多实验研究现已经取得了良好的实验结果。

7、sirnas 含有 21nt，调解与其互补的 rnas 内切酶的裂解，这种现象称为 rna 干扰(rna interference, rnai) 。在真核生物中，rnai在保护基因组免受病毒和转座因子侵害中扮演着重要作用。在体内细胞培养中，sirna对兴趣基因进行敲降而被广泛应用。在人类sirnas的生物合成中，长dsrnas 被dicer加工成许多sirnas双链，如同mirnas一样，一条rna链被保留在 risc中做为“前导链”，而另一条链则作为“过客链”被降解。

8、现有技术对于延缓心肌重构，减慢梗死后心肌损伤的药物的研究仍然存在不足，治疗心肌损伤的有效药物仍然十分匮乏。

技术实现思路

1、本发明的目的在于针对现有技术中治疗心肌损伤的有效药物不足的问题，提供一种心肌损伤修复物及其制备方法。

2、为解决上述技术问题，本发明采用如下技术方案：

3、本发明公开了一种心肌损伤修复物，所述心肌损伤修复物包括sirna或其药理上接受的溶剂化物，所述sirna选自sirna1、sirna2或sirna3，其中，所述sirna1的正义链的核苷酸序列如seq id no.1所示，所述sirna1的反义链的核苷酸序列如seq id no.2所示；所述sirna2的正义链的核苷酸序列如seq id no.3所示，所述sirna2的反义链的核苷酸序列如seq id no.4所示；所述sirna3的正义链的核苷酸序列如seq id no.5所示，所述sirna3的反义链的核苷酸序列如seq id no.6所示。

4、优选的，所述sirna为sirna1，所述sirna1的正义链的核苷酸序列如seq id no.1所示，所述sirna1的反义链的核苷酸序列如seq id no.2所示。

5、本发明公开了一种药物组合物，所述药物组合物包括所述的心肌损伤修复物和药学上可接受的载体。

6、优选的，所述的药学上可接受的载体选自质粒、病毒、脂质体或纳米磁性颗粒。

7、本发明公开了治疗心脏功能障碍的药物组合物，所述药物组合物包括所述的心肌损伤修复物和药学上可接受的载体。

8、优选的，所述的药学上可接受的载体选自质粒、病毒、脂质体或纳米磁性颗粒。

9、优选的，其中所述的心脏功能障碍包括：心律失常、心功能衰竭、心肌梗死、心肌病、冠心病、高血压性心脏病。

10、本发明公开了sirna或其药理上接受的溶剂化物在制备治疗心肌损伤修复物中的用途，所述sirna选自sirna1、sirna2或sirna3，其中，所述sirna1的正义链的核苷酸序列如seq id no.1所示，所述sirna1的反义链的核苷酸序列如seq id no.2所示；所述sirna2的正义链的核苷酸序列如seq id no.3所示，所述sirna2的反义链的核苷酸序列如seq idno.4所示；所述sirna3的正义链的核苷酸序列如seq id no.5所示，所述sirna3的反义链的核苷酸序列如seq id no.6所示。

11、优选的，所述的心肌损伤由心脏功能障碍导致，所述心脏功能障碍包括：心律失常、心功能衰竭、心肌梗死、心肌病、冠心病、高血压性心脏病。

12、本发明公开了一种心肌损伤修复物的制备方法，包括将sirna或其药理上接受的溶剂化物与药学上可接受的载体混合的步骤，所述sirna选自sirna1、sirna2或sirna3，其中，所述sirna1的正义链的核苷酸序列如seq id no.1所示，所述sirna1的反义链的核苷酸序列如seq id no.2所示；所述sirna2的正义链的核苷酸序列如seq id no.3所示，所述sirna2的反义链的核苷酸序列如seq id no.4所示；所述sirna3的正义链的核苷酸序列如seq id no.5所示，所述sirna3的反义链的核苷酸序列如seq id no.6所示。

13、本发明通过设计3组针对层粘连蛋白基因的sirna分子，初步筛选获得对层粘连蛋白基因具有较高沉默效果的sirna1，通过成功构建大鼠心梗模型。将筛选获得的sirna1分子导入大鼠体内后，对左心室舒张末压、左心室内压最大上升速率、左心室内压最小下降速率、心率进行了测定。masson 染色显示，与心梗组相比，心梗+sirna1组心肌间质和血管周围纤维化程度明显减轻。而tunel法观察表明在心梗大鼠体内导入sirna分子之后，心肌细胞的凋亡比例出现下降。上述结果证明了本发明提供的sirna分子对于心肌损伤过程中心肌细胞的纤维化以及心肌的凋亡具有较好的抑制效果，从而起到保护心肌细胞的功能。