瑞士乳杆菌及其产品在抗幽门螺旋杆菌中的应用的制作方法

本发明属于微生物，具体涉及瑞士乳杆菌及其产品在抗幽门螺旋杆菌中的应用。

背景技术：

1、幽门螺旋杆菌（ helicobacter pylori， h.pylori）为革兰染色阴性，菌体呈弧形、s形或螺旋形，有鞭毛，运动活泼，无芽胞。幽门螺旋杆菌的致病性与它产生的毒素、有毒性作用的酶破坏胃黏膜和促使机体产生炎症和免疫反应等因素有关。由于 h.pylori定植生长在胃内，长期的接触胃粘膜细胞，其分泌的毒素对胃上皮细胞影响严重，在其感染的胃黏膜中可见细胞变性、坏死和炎细胞浸润，血清中可检测到特异性抗体。在感染的直接作用和细胞凋亡的双重影响下，胃腺体易萎缩，并可进一步发展为肠上皮化生和不典型增生，许多研究证实 h.pylori是引起慢性胃炎、消化性溃疡的主要致病因素，也是胃癌和胃粘膜相关淋巴组织淋巴瘤的主要诱发因子。

2、目前针对 h.pylori感染通常使用抗生素治疗法，随之带来的是 h.pylori耐药性，已经成为治疗 h.pylori感染全球面临的难题。胃同肠道一样，也定植着大量的菌群，这些菌群在维持胃的正常功能方面也发挥着重要作用。当发生 h.pylori感染时，抗生素治疗法除了对 h.pylori的清除起到作用，同时也将杀死其它有益菌群，导致胃内的菌群也发生了失调。通过益生菌来清除 h.pylori的感染，是缓解 h.pylori抗生素治疗所致的负面问题的新思路。

3、专利cn 111118106 a筛选出了一种抑制幽门螺杆菌的嗜酸乳杆菌la-10a，所述的嗜酸乳杆菌la-10a的保藏编号：cctcc no: m2019012，试验表明可以减轻或者预防幽门螺杆菌感染。

4、专利cn 113337431 a公开了一种包含了菌含量不低于1×107cfu/g的所述罗伊氏乳杆菌nsl0501原菌粉的生物菌剂。所述罗伊氏乳杆菌nsl0501保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为ctcc m2021628，所述罗伊氏乳杆菌nsl0501及其生物菌剂均能够有效抑制幽门螺杆菌的生长，并降低幽门螺杆菌对细胞的粘附力。

5、鉴于，临床标准治疗幽门螺杆菌感染面临着抗生素耐药性、失败率和复发率逐年升高、肠道菌群发生失衡等挑战，还需要开发更多更有效的益生菌。

技术实现思路

1、为了解决上述问题，本发明提供了瑞士乳杆菌tm4在抗幽门螺旋杆菌中应用，该菌能有效对抗幽门螺旋杆菌的感染，为后续开发相应的益生菌制剂或药物提供研究依据。

2、一方面，本发明提供了瑞士乳杆菌tm4在制备抗幽门螺旋杆菌产品中的应用。

3、具体地，所述的瑞士乳杆菌tm4的保藏编号为cgmcc no. 26692。

4、进一步具体地，所述的产品包括瑞士乳杆菌tm4的发酵液、发酵液上清、发酵液沉淀、冻干粉和菌悬液中的一种或多种。

5、更进一步具体地，所述的发酵液是指将菌种接种于培养基，培养一段时间的液体。

6、更进一步具体地，所述的发酵液上清是指发酵液经离心后的上层的澄清液体；内含细菌生长繁殖过程丰富的代谢产物及一部分菌体碎片，细菌分泌的酸性物质及细菌素对有害菌有拮抗、杀灭作用；细菌分解食物后的氨基酸，以及合成的维生素都在培养液内，还包括细菌分泌的对人体有用的酶；而部分的菌体成分对人体也有免疫促进作用。

7、更进一步具体地，所述的发酵液沉淀是指离心出来的液体沉淀，包括游离的蛋白，残留的菌体，破碎的细胞，培养基质的残渣，主要就是蛋白，细胞内的基质。

8、更进一步具体地，所述的冻干粉为将乳杆菌培养液冻干获得；所述的冻干粉中一般还包括冻干保护剂。所述的冻干保护剂包括但不限于：ph缓冲剂、填充剂、糖类、非离子表面活性剂、配体等。所述的ph缓冲剂包括但不限于tris、氨基酸或其盐、柠檬酸或其盐、醋酸或其盐中的任意一种或多种。所述的填充剂包括但不限于甘露醇、甘氨酸、牛血清白蛋白中的任意一种或多种。所述的糖类可以是双糖，如蔗糖或海藻糖中的任意一种或多种。所述的非离子表面活性剂包括但不限于吐温，所述的吐温可以吐温-20、吐温-60、吐温-80等。所述的冻干保护剂中还可以包括抗氧化剂等。所述的冻干保护剂具体还可以包括白蛋白、聚乙二醇等。

9、更进一步具体地，所述的菌悬液为将乳杆菌培养液离心后的上清液倒掉，加入水、培养基或缓冲液，震荡或吹吸将下层菌体悬起来形成的均一的悬浊液。

10、具体地，所述的产品为药物。

11、进一步具体地，所述的药物还包括药学上可接受的辅料。

12、优选地，所述的药学上可接受的辅料包括但不限于淀粉、糊精、蔗糖、乳糖、微晶纤维素中的一种或多种。

13、进一步具体地，所述的药物的剂型可以是片剂、粉剂、颗粒剂、胶囊剂、口服液、散剂、丸剂、糖浆剂、泡腾剂、乳液剂、膏剂、喷雾剂、搽剂、栓剂、洗剂、泡沫剂、凝胶剂中的任意一种。

14、又一方面，本发明提供了一种益生菌制剂。

15、具体地，所述的益生菌制剂包括瑞士乳杆菌tm4；所述的瑞士乳杆菌tm4的保藏编号为cgmcc no. 26692。

16、进一步具体地，所述的益生菌制剂包括瑞士乳杆菌tm4的发酵液、发酵液上清、发酵液沉淀、冻干粉和菌悬液中的一种或多种。

17、更进一步具体地，所述的发酵液是指将菌种接种于培养基，培养一段时间的液体。

18、更进一步具体地，所述的发酵液上清是指发酵液经离心后的上层的澄清液体；内含细菌生长繁殖过程丰富的代谢产物及一部分菌体碎片，细菌分泌的酸性物质及细菌素对有害菌有拮抗、杀灭作用；细菌分解食物后的氨基酸，以及合成的维生素都在培养液内，还包括细菌分泌的对人体有用的酶；而部分的菌体成分对人体也有免疫促进作用。

19、更进一步具体地，所述的发酵液沉淀是指离心出来的液体沉淀，包括游离的蛋白，残留的菌体，破碎的细胞，培养基质的残渣，主要就是蛋白，细胞内的基质。

20、更进一步具体地，所述的冻干粉为将乳杆菌培养液冻干获得；所述的冻干粉中一般还包括冻干保护剂。所述的冻干保护剂包括但不限于：ph缓冲剂、填充剂、糖类、非离子表面活性剂、配体等。所述的ph缓冲剂包括但不限于tris、氨基酸或其盐、柠檬酸或其盐、醋酸或其盐中的任意一种或多种。所述的填充剂包括但不限于甘露醇、甘氨酸、牛血清白蛋白中的任意一种或多种。所述的糖类可以是双糖，如蔗糖或海藻糖中的任意一种或多种。所述的非离子表面活性剂包括但不限于吐温，所述的吐温可以吐温-20、吐温-60、吐温-80等。所述的冻干保护剂中还可以包括抗氧化剂等。所述的冻干保护剂具体还可以包括白蛋白、聚乙二醇等。

21、更进一步具体地，所述的菌悬液为将乳杆菌培养液离心后的上清液倒掉，加入水、培养基或缓冲液，震荡或吹吸将下层菌体悬起来形成的均一的悬浊液。

22、具体地，所述的益生菌制剂还包括食品原料，和/或食品或医学上可接受的辅料或添加剂。

23、进一步具体地，所述食品原料选自水苏糖、菊粉、低聚果糖、南瓜粉、绿茶粉和抗性糊精中的一种或多种。

24、又一方面，本发明提供了一种抗幽门螺旋杆菌的药物。

25、具体地，所述的药物包括瑞士乳杆菌tm4；所述的瑞士乳杆菌tm4的保藏编号为cgmcc no. 26692。

26、进一步具体地，所述的药物包括瑞士乳杆菌tm4的发酵液、发酵液上清、发酵液沉淀、冻干粉和菌悬液中的一种或多种。

27、更进一步具体地，所述的发酵液是指将菌种接种于培养基，培养一段时间的液体。

28、更进一步具体地，所述的发酵液上清是指发酵液经离心后的上层的澄清液体；内含细菌生长繁殖过程丰富的代谢产物及一部分菌体碎片，细菌分泌的酸性物质及细菌素对有害菌有拮抗、杀灭作用；细菌分解食物后的氨基酸，以及合成的维生素都在培养液内，还包括细菌分泌的对人体有用的酶；而部分的菌体成分对人体也有免疫促进作用。

29、更进一步具体地，所述的发酵液沉淀是指离心出来的液体沉淀，包括游离的蛋白，残留的菌体，破碎的细胞，培养基质的残渣，主要就是蛋白，细胞内的基质。

30、更进一步具体地，所述的冻干粉为将乳杆菌培养液冻干获得；所述的冻干粉中一般还包括冻干保护剂。所述的冻干保护剂包括但不限于：ph缓冲剂、填充剂、糖类、非离子表面活性剂、配体等。所述的ph缓冲剂包括但不限于tris、氨基酸或其盐、柠檬酸或其盐、醋酸或其盐中的任意一种或多种。所述的填充剂包括但不限于甘露醇、甘氨酸、牛血清白蛋白中的任意一种或多种。所述的糖类可以是双糖，如蔗糖或海藻糖中的任意一种或多种。所述的非离子表面活性剂包括但不限于吐温，所述的吐温可以吐温-20、吐温-60、吐温-80等。所述的冻干保护剂中还可以包括抗氧化剂等。所述的冻干保护剂具体还可以包括白蛋白、聚乙二醇等。

31、更进一步具体地，所述的菌悬液为将乳杆菌培养液离心后的上清液倒掉，加入水、培养基或缓冲液，震荡或吹吸将下层菌体悬起来形成的均一的悬浊液。

32、具体地，所述的药物还包括药学上可接受的辅料。

33、优选地，所述的药学上可接受的辅料包括但不限于淀粉、糊精、蔗糖、乳糖、微晶纤维素中的一种或多种。

34、进一步具体地，所述的药物的剂型可以是片剂、粉剂、颗粒剂、胶囊剂、口服液、散剂、丸剂、糖浆剂、泡腾剂、乳液剂、膏剂、喷雾剂、搽剂、栓剂、洗剂、泡沫剂、凝胶剂中的任意一种。

35、又一方面，本发明提供了一种抗幽门螺旋杆菌的药物的制备方法。

36、具体地，所述的制备方法包括培养瑞士乳杆菌tm4；所述的瑞士乳杆菌tm4的保藏编号为cgmcc no. 26692。

37、进一步具体地，所述的培养基包括但不限于mrs培养基。

38、具体地，所述的药物还包括药学上可接受的辅料。

39、优选地，所述的药学上可接受的辅料包括但不限于淀粉、糊精、蔗糖、乳糖、微晶纤维素中的一种或多种。

40、进一步具体地，所述的药物的剂型可以是片剂、粉剂、颗粒剂、胶囊剂、口服液、散剂、丸剂、糖浆剂、泡腾剂、乳液剂、膏剂、喷雾剂、搽剂、栓剂、洗剂、泡沫剂、凝胶剂中的任意一种。

41、又一方面，本发明提供了一种益生菌组合物，所述的益生菌组物合包括瑞士乳杆菌tm4；所述的瑞士乳杆菌tm4的保藏编号为cgmcc no. 26692。

42、具体地，所述的益生菌组合物还包括药学上可接受的辅料。

43、优选地，所述的药学上可接受的辅料包括但不限于淀粉、糊精、蔗糖、乳糖、微晶纤维素中的一种或多种。

44、进一步具体地，所述的药物的剂型可以是片剂、粉剂、颗粒剂、胶囊剂、口服液、散剂、丸剂、糖浆剂、泡腾剂、乳液剂、膏剂、喷雾剂、搽剂、栓剂、洗剂、泡沫剂、凝胶剂中的任意一种。

45、本发明所取得的技术效果：

46、（1）瑞士乳杆菌tm4对 h.pylori具有抑制作用。

47、（2）瑞士乳杆菌tm4对 h.pylori尿素酶活性具有抑制作用。

48、（3）瑞士乳杆菌tm4能体外抑制h.pylori生物膜形成。

49、（4）瑞士乳杆菌tm4能够抑制 h.pylori所导致的细胞膜损伤。

50、（5）瑞士乳杆菌tm4能抑制 h.pylori所导致的细胞死亡。

51、保藏说明

52、菌株名称：tm4；

53、保藏编号：cgmcc no. 26692；

54、分类命名：瑞士乳杆菌 lactobacillus helveticus；

55、保藏日期：2023年02月27日；

56、保藏单位：中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心；

57、保藏单位地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号。