侧链同系维生素d衍生物、其制备方法、含该类衍生物的医药制剂及其作医药的应用的制作方法

专利名称：侧链同系维生素d衍生物、其制备方法、含该类衍生物的医药制剂及其作医药的应用的制作方法技术领域：本发明涉及式Ⅰ所示侧链同系维生素D衍生物、其制备方法、含该类化合物的药物制剂及其作医药的应用， 式中R1代表一个氢原子、一个羟基，或一个含1至9个碳原子的酰氧基，R2代表一个氢原子或一个含1至9个碳原子的酰基，R3或R4代表一个羟基或一个含1至9个碳原子的酰氧基，并且另一个取代基代表一个氢原子，或者R3和R4共同代表一个氧原子，R5及R6各自分别代表一个含至多4个碳原子的直链烷基或支链烷基、一个三氟甲基，或者共同代表一个与叔碳原子一起形成的饱和、不饱和或芳族碳环或者含有1或2个N原子、O原子或硫原子的3、4、5或6元杂环，B及D或者各代表一个氢原子，或者共同代表一个第二键(E构型双键)，以及抑或A代表一个在碳原子20和22之间的直接键合，且X代表一个其中n＝1至3的亚烷基氧基-(CH2)nO-，抑或A代表在碳原子20和22之间的桥亚甲基-(CH2-)，且X代表一个亚烷基-(CH2)n-或一个亚烷基氧基-(CH2)nO-其中n＝1至3，或者当A代表一个直接键合及B与D共同代表一个第二键时， -(CH2)2-≡或-(CH2)2-＝。对于基团R1、R2及在基团R3或R4中可能的酰氧基或酰基，是尤其从饱和羧酸或者由苯甲酸得到的。如果R5和R6共同与叔碳原子构成一个饱和的环碳环，则尤其考虑环丙环或环己环。作为R5和R6的烷基，尤其考虑采用含1至5个碳原子的那些烷基。按本发明，优先的是在通式Ⅰ中，R1、R3及R4代表一个羟基或者R5及R6代表一个甲基或共同与叔碳原子一起代表一个环丙环，R2代表一个氢原子且n为1或2的侧链同系维生素D衍生物。在碳原子22与23之间(当A为一个直接键合时)或者在碳原子23与24之间(当A为一个甲基时)最好为一个双键。尤其优选的化合物为24-(1(R)-羟基-4-甲基戊基)-9，10-断胆-5Z，7E，10(19)，23E-四烯-1(S)，3(R)-二醇;24-(1(S)-羟基-4-甲基戊基)-9，10-断胆-5Z，7E，10(19)，23E-四烯-1(S)，3(R)-二醇;24-(1(R)-羟基-3-甲基丁基)-9，10-断胆-5Z，7E，10(19)，23E-四烯-1(S)，3(R)-二醇;24-(1(S)-羟基-3-甲基丁基)-9，10-断胆-5Z，7E，10(19)，23E-四烯-1(S)，3(R)-二醇，24-(1(R)-羟基-3-甲基丁基)-9，10-断胆-5Z，7E，10(19)-三烯-1(S)，3(R)-二醇;24-(1(S)-羟基-3-甲基丁基)-9，10-断胆-5Z，7E，10(19)-三烯-1(S)，3(R)-二醇;24-(1(R)-羟基-3-异丙氧基丙基)-9，10-断胆-5Z，7E，10(19)，23E-四烯-1(S)，3(R)-二醇;24-(1(S)-羟基-3-异丙氧基丙基)-9，10-断胆-5Z，7E，10(19)，23E-四烯-1(S)，3(R)-二醇;24-异丙氧基甲基-9，10-断胆-5Z，7E，10(19)，23E-四烯-1(S)，3(R)，24(R)-三醇;24-异丙氧基甲基-9，10-断胆-5Z，7E，10(19)，22E-四烯-1(S)，3(R)，24(S)-三醇;24-(2-异丙氧基乙基)-9，10-断胆-5Z，7E，10(19)，22E-四烯-1(S)，3(R)，24(R)-三醇;24-(2-异丙氧基乙基)-9，10-断胆-5Z，7E，10(19)，22E-四烯-1(S)，3(R)，24(S)-三醇;26，27-环-24a，24b-二同型-9，10-断胆甾-5Z，7E，10(19)，23E-四烯-1(S)，3(R)，24a(R)-三醇;26，27-环-24a，24b-二同型-9，10-断胆甾-5Z，7E，10(19)，23E-四烯-1(S)，3(R)，24a(S)-三醇。天然维生素D2及D3(参见通式Ⅴ)本身无生物学活性，而且仅在肝脏内于25-位或在肾脏内于1-位上羟基化后，才被转变成生物学活性代谢产物。维生素D2及D3的作用在于使血浆-Ca++含量和血浆-磷酸盐含量稳定;它们抵制血浆-Ca++含量的下降。 麦角钙化醇Ra＝Rb＝H，Rc＝CH3，维生素D2双键C-22/23胆钙化醇Ra＝Rb＝Rc＝H 维生素D325-羟基胆钙化醇Ra＝Rc＝H，Rb＝OH1α-羟基胆钙化醇Ra＝OH，Rb＝Rc＝H1α，-25-二羟基胆钙化醇Ra＝Rb＝OH，Rc＝H 钙三醇除了其显著的钙代谢和磷酸盐代谢作用之外，维生素D2、D3及其合成衍生物还具有阻碍增生和分化细胞的作用(H.F.De Luca，维生素D在甾类激素生物化学中的代谢及功能，Hrsg.H.L.J.Makin，第2版，Blackwell科学出版社，1984年第71-116页)。在使用维生素D时，会出现超剂量现象(高钙血症)。在24-位上羟基化的1α-胆钙化醇，已由DE-AS2526981报道，其毒性较之相应的未羟基化1α-胆钙化醇小得多。该类羟基化化合物对肠道中的钙吸收呈选择性活性，而且骨吸收作用比1α-胆钙化醇弱。国际专利申请WO87/00834中所述的24-羟基维生素D类似物，可用来治疗人及动物由于异常的细胞增殖及/或细胞分化而引起的各种障碍。对于不同的1，25-二羟基-同型维生素D衍生物，De Luca不久之前曾提及，骨吸收作用和HL-60细胞分化是有关各种性能的一种变异。因此，体外的骨吸收作用是体内钙活动性的直接量度。现已发现，通式Ⅰ所示本发明侧链同系维生素D衍生物，同维生素D衍生物钙化醇(1α，25-二羟基胆钙化醇)相比，意外地具有更为有利的作用谱。对钙代谢和磷酸盐代谢明显减弱(副作用由于超剂量或必需的高剂量而减小)的同时，增殖阻止作用和细胞分化作用都大体上保持下来(变异)。本发明化合物的维生素D活性用钙三醇受体试验来测定。该试验使用一种来源于佝偻病鸡肠的特殊受体蛋白质来进行。含受体的结合蛋白与3H-钙三醇(0.5ng/ml)，以0.575ml的反应体积，在试管中在待测物不存在和存在下培育1小时。为分离游离钙三醇和受体结合的钙三醇起见，进行木炭-葡聚糖吸收。为此，在每支试管中加入200μl木炭-葡聚糖悬浮液，并在22℃下恒温30分钟。接着，在4℃下将试样以1500xg离心沉淀10分钟。滗出上清液，并经在原子光(Atom-Light)中平衡约1小时后，以β-计数器测量。在基准物质(3H-钙三醇)恒定浓度下，将以不同待试物质浓度和参比物质(未标记的钙三醇)所得的竞争曲线相应联系起来，并算出竞争因子(KF)。该因子的定义是，50%竞争所必需的各待测物质和参比物质的浓度商数KF＝ (50%竞争时的待测物质浓度)/(50%竞争时的参比物质浓度)按此，24-(1-羟基-3-甲基丁基)-9，10-断胆-5Z，7E，10(19)，23E-四烯-1(S)，3(R)-二醇(化合物A)的KF值为2.0，而24-(1-羟基-3-甲基丁基)-9，10-断胆-5Z，7E，10(19)，23E-四烯-1(S)，3(S)-二醇(化合物B)的KF值为3.6。为测定本发明化合物的抗增殖能力，以化合物A和B作为待测物质，进行下下述试验。用改变的Yuspa，S.及Harris，C.C.的方法(“活体外用乙酸视黄基酯处理小鼠表皮细胞后改变的分化”，Exp.Cell Res.86，第95-105页，1974年)，制备并培养新生小鼠的生角质细胞。将雌、雄两种性别的新生NMRI小鼠用断头术杀死，剖离皮肤，在抗菌素-抗霉菌药溶液中洗涤，并在4℃下，使真皮侧向下，在Dispase Ⅱ溶液(1.2U/ml于组织培养基M199+25mmol/l HEPES+15%胎牛血清(FCS)+50U/ml青霉素/链霉素(P/S)(标本介质)中恒温过夜。剥除表皮，并通过胰蛋白酶作用制备单细胞悬浮液。经离心分离后，使细胞沉淀再悬浮。经萘胺兰染色后，测定小球状活细胞的数目，在Primaria 24孔微滴板上将该细胞以4×105个细胞/cm2的密度，接种在组织培养基(M199+15%FCS+50U/ml P/S)上，经在37℃下恒温24小时后，用经磷酸盐缓冲的盐溶液(PBS)洗涤细胞，然后在无血清的组织培养基(M199+50U/ml P/S+0.5%乙醇)中，与待测物质和无待试物质在32.5℃下再恒温24小时。尔后，加入0.4μci/50μl3H-甲基胸苷(40ci/mmol)。4小时后，吸出培养基，并添加500μl冰冷的10%三氯乙酸(TCA)，使反应结束。用TCA和PBS洗涤细胞，通过在蛋白酶K溶液(10mmol/l Tris-HCl、10mmol/1 EDTA、10mmol/l NaCl、0.2%Triton-X100，pH8.0，50μg/ml蛋白激酶K)中培育，使之溶解，并用离心法使溶解产物澄清。用闪烁光度测定法测定上清液中的放射性，并在用联咪基苯基吲哚(Diamidinophenylindol)(DAPI)使DNA染上特定颜色后，用萤光光度测定法测定DNA的浓度。之后，钙三醇以及化合物A和B以下列IC50值钙三醇 2×10-9mol/l化合物A 1×10-8mol/l化合物B 3.2×10-9mol/l依剂量地阻止3H-胸苷嵌入DNA。钙三醇及本发明化合物，26，27-环-24a，24b-二同型-9，10-断胆-5Z，7E，10(19)，23E-四烯-1(S)，3(R)，24a(R)-三醇(化合物C)和26，27-环-24a，24b-二同型-9，10-断胆-5Z，7E，10(19)，23E-四烯-1(S)，3(R)，24a(S)-三醇(化合物D)的分化促进作用，实际上并无差别。由文献(Mangelsdorf，D.J.等，J.Cell Biol，98第391-398页(1984年))已知，用钙三醇在活体外处理人体白血病细胞(前髓细胞谱系HL60)能诱导细胞分化成巨噬细胞。为定量表示钙三醇类似物的刺激分化作用起见，进行下面所举的试验在37℃下，将HL60细胞在组织培养基(RPMI-10%胎牛血清)中，在含5%CO2的空气气氛下进行培养。为对物质进行试验起见，用离心分离出细胞，并将2.8×105个细胞/ml接种到无酚红的组织培养基中。将待试物质溶于乙醇，并用不含酚红的组织培养基稀释到所需浓度。把梯度稀释物以1∶10的比例同细胞悬浮液混合，各将100μl这种加有待测物质的细胞悬浮液吸移到96孔微滴板的凹坑中。为对照起见，用类似方法在细胞悬浮液中加入溶剂。经在含5%CO2的空气中，37℃恒温96小时以上后，将100μl NBT-TPA溶液〔氮兰四唑(NBT)，溶液中最终浓度为1mg/ml，十四酰佛波醇肉豆蔻酸酯(TPA)，溶液中最终浓度为2×10-7mol/l〕吸移到容有细胞悬浮液的96孔微滴板每个凹坑中。通过在37℃和含5%CO2的空气气氛下培育2小时，由于细胞内释出氧原子团，受TPA促进而在分化成巨噬细胞的细胞中，NBT还原成不溶性的甲 。为结束反应起见，吸出96孔微滴板上的东西，添加甲醇使粘附的细胞固定，并在固定后将之干燥。为溶解所生成的细胞内甲 结晶，向各凹坑中吸移100μl氢氧化钾(2val/l)及100μl二甲亚砜，并用超声波粉碎1分钟。甲 的浓度用分光光度法在650nm处进行测定。所生成的甲 ，其浓度被视为HL60细胞分化诱导成巨噬细胞的量度。待试物质的相对效应可由ED50(待试物质)/ED50(钙三醇)的商数算得。因此，钙三醇、维生素C和维生素D的ED50值分别为1.81.8×10-9mol/l、2.2×10-9mol/l和2.5×10-9mol/l。由于减小了高钙性危险，故而本发明的物质特别适于制备医药，治疗以高增生为特征的疾病，例如高增生性皮肤病(银屑病)及恶性肿瘤(白血病、结肠癌、乳房癌)。治疗成功的前提条件是，先检证目的器官中存在钙三醇受体。因此，本发明也涉及医药制剂，其中含有至少一种通式Ⅰ所示的化合物同一种药用上载体。本发明化合物可制成溶于药用溶剂的溶液剂，或者制成在适当药用溶剂或载体中的乳剂、悬浮剂或分散剂，或者制成含有本身已知的固态载体物质的丸剂、片剂或胶囊剂。对于局部使用，本发明化合物宜制成乳膏剂或软膏剂，或者制成某种适于局部使用的医药剂型。每种这样的剂型还可含有其它药用且无毒的辅料，例如稳定剂、抗氧化剂、粘合剂、色素、乳化剂或矫味剂。本发明化合物宜于以适合注射或静脉输注的无菌溶液形式来使用，或者以经口给药的方式经消化道服用，或者以乳膏剂、软膏剂、洗剂或适于经真皮的硬膏剂形式来使用，如同EP-A-0387077中所述那样。每日剂量为0.1μg/病人/日-1000μg(1mg)/病人/日，以1.0-500μg/病人/日为佳。此外，本发明还涉及通式Ⅰ所示化合物制备医药的应用。按本发明，通式Ⅰ所示侧链同系维生素D衍生物的制备，如下进行将通式Ⅳ的化合物 其中R1′为一个氢原子或一个被保护的羟基;R2′为一个羟基保护基团，而且A、X以及R5与R6具通式Ⅰ中所述含意在必要时经选择性氢化侧链中双键，生成通式Ⅳa的化合物 式中R1′、R2′、A、X以及R5与R6具通式Ⅳ中所述含意，而且必要时在羰基官能团发生还原后，并必要时在将反应所生成的通式Ⅲa和Ⅲb所示的反向异构羟基化合物分离 所示且式中R1、R2、A、X以及R5与R6具通式Ⅳ中所述含意，B与D具通式Ⅰ中所述含意之后，用紫外光照射，使立体异构体的5，6-双键反转，转变成通式Ⅱ的化合物 式中R1′、R2′、A、B、D、X，以及R5与R6具通式Ⅲa/Ⅲb中所述含意接着通过解离所存在的羟基保护基团，并必要时通部分或完全地使羟基酯化，使该化合物转化为通式Ⅰ所示的化合物。通式Ⅳ所示化合物中侧链羰基官能团的还原，举例来说，用三氯化铈/硼氢化钠在一种极性溶剂中进行。在还原中产生分别由通式Ⅲa和Ⅲb所示的R-羟基异构体，或者S-羟基异构体。两种异构体可用色谱法予以分离。需要时，可在羰基官能团还原之前，使侧链上的双链有选择地氢化。锂-三叔丁氧基铝氢化物等适于在极性溶剂中用作氢化剂。然后通式Ⅲa/Ⅲb所示化合物向通式Ⅱ所示化合物的转变，举例来说，通过在一种所谓“三重态敏化剂(Triplettsensibilisator)”存在下，用紫外光照射来进行。在本发明范围内，对此使用蒽。通过将5，6-双键的π-链断开，使A-环绕5，6-单键旋转180°，并重建5，6-双键，就可使立体异构体的5，6-双键反转。接着，脱去所存在的羟基保护基团。较佳的是，在使用四正丁基铵氟化物的条件下，以及在必要时，将自由羟基按常用方法，用适当的羧酰卤(卤-氯、溴)或羧酸酐予以部分酯化或完全酯化。原料的制备1.1(S)，3(R)-双-(叔丁基二甲基甲硅烷氧基)-20(S)-甲酰基-9，10-断孕-5E，7E，10(19)-三烯 11的制备按M.J.Calverley(Tetrahydron 43，第4609页(1987年)，也见国际专利申请WO87/00834)的方法进行。上述文献中也说明了R1为氢原子的原始化合物的制备方法、2.1(S)，3(R)-双-(叔丁基二甲基甲硅烷氧基)-20(R)-甲基-9，10-断孕-5E，7E，10(19)-三烯-21-甲醛2醛2按一种新方法来制备。a.在25℃下，向1.8g氢化钠(80%，溶于油中)在70ml无水THF中所成的悬浮液，滴加15.57g二乙基磷酰基-乙氧基乙酸乙酯(按W.Grell及H.Machleidt，《Liebigs Ann.Chem.699，第53页(1966年)制备)溶于200ml THF所成的溶液。添加毕，在60℃下再搅拌90分钟，重新冷至25℃，并滴加一种由6.2g1溶于70ml THF所成的溶液。回流搅拌2小时，然后将冷却后的反应溶液倾入水中，并用乙酸乙酯萃取。经干燥(用Na2SO4)及浓缩后，在硅胶上用己烷/乙酸乙酯对所得粗产物进行色谱分离。主馏分得5.2gl(S)，3(R)-双-(叔丁基二甲基甲硅烷氧基)-23-(乙氧基-9，10-断胆-5E，7E，10(19)-四烯-24-羧酸乙酯，为C-22双键异构体的油状混合物。b.将5.2g由a.制得的产物，溶于120ml甲苯，并在0℃下，慢慢加入20ml 20%二异丁基铝氢化物的甲苯溶液。30分钟后，在0℃下小心地将反应溶液倾入NH4Cl溶液，并用乙酸乙酯萃取之。经常规处理，得4.88gl(S)，3(R)-双(叔丁基二甲基甲硅烷氧基)-23-乙氧基-9，10-断胆-5E，7E，10(19)，22-四烯-24-醇，为无色油状的异构体混合物，未经提纯随即加入下述步骤。c.在室温下，将b.中制得的化合物(4.88g)在由55ml二氯甲烷和55ml70%含水乙酸所组成的混合物中搅拌4小时。接着，添加NH3溶液，将之中和，并用二氯甲烷萃取。在硅胶上用己烷/乙酸乙酯，色谱分离粗产物。依此方法，制得2.02g1(S)，3(R)-双-(叔丁基二甲基甲硅烷氧基)-24-羟基-9，10-断胆-5E，7E，10(19)-三烯-23-酮5，为无色油状物。1H-NMR(CDCl3)δ＝0.01ppm(s，12H，Si-CH3)，0.52(s，3H，H-18)，0.81和0.84(s，je 9H，Si-t-butyl)，0.90(d，J＝7Hz，3H，H-21)3.09(t，J＝5Hz，1H，OH)，4.10(dd，1H，H-24)，4.16(m，1H，H-3)，4.21(dd，1H，H-24)，4.39(m，1H，H-1)，4.88，4.93(s，je 1H，H-19)，5.77 6.39(d，J＝11Hz，je 1H，H-6，H-7)。d.将C.中制得的产物(2.02g)溶于25ml甲醇和25ml THF，并在0℃下加入300mg硼氢化钠。在0℃下搅拌1.5小时，然后将反应混合物倾入NH4Cl溶液，并用乙酸乙酯萃取之。制得1.75g 1(S)，3(R)-双-(叔丁基二甲基甲硅烷氧基)-9.10-断胆-5E，7E，10(19)-三烯-23，24-二醇 6，为无色油状的23-差向异构体混合物，就这样用于下述反应。e.将d.中所得的1.75g产物溶于40ml甲苯，并在冰水冷却下分次加入1.23g四乙酸铅。搅拌30分钟，重新加入1.0g pb(OAc)4，并在+5至+10℃下继续搅拌15分钟。为处理起见，加入NaHCO3溶液，用硅藻土过滤所产生的悬浮液，并用乙酸乙酯萃取滤液。在硅胶上用己烷/乙酸乙酯色谱分离粗产物。在主馏分从乙醇中结晶出来后，得560mg 1(S)，3(R)-双-(叔丁基二甲基甲硅烷氧基)-20(R)-甲基-9，10-断孕-5E，7E，10(19)-三烯-21-甲醛，熔点为101-104℃。将醛1和醛2分别与式 所示正膦进行的反应，产生通式(Ⅳ)所示的化合物(Wittig)反应)。所用磷内鎓盐的制备1.异丁基羰基亚甲基三苯基正膦a.溴甲基.异丁基酮将50ml异丁基甲基酮溶于240ml甲醇中，在0℃下加入20ml溴，并在添加完毕后，在+10℃下再搅拌1.5小时。尔后，加入360ml水，并在室温下继续搅拌16小时。为进行分离，在反应混合物中掺入饱和食盐溶液，分离所析出的有机相，并用乙醚萃取水相。汇集后的有机相用10%的Na2CO3溶液洗涤，并用Na2SO4干燥。经过滤后，在喷水空气泵真空中脱除溶剂，并蒸馏残留物。主馏分含53.7g溴甲基异丁基酮，其K15-20p为67-69℃。b.异丁基羰基甲基三苯基鏻溴化物。在500ml圆底烧瓶中，均匀混合溴甲基异丁基酮(53.6g)和三苯基膦(78.5g)，并在起初的强烈反应热效应衰减后，在室温和氮气氛下保持12小时。尔后，将固体反应物溶于330ml二氯甲烷，并回流加热30分钟。在添加500ml乙醚后，使之冷却到室温，然后过滤分离产物。干燥后得111.7g鏻盐，其熔点为244-245℃。c.异丁基羰基亚甲基三苯基正膦将b.中制得的产物111.6g同1500ml二氯甲烷和1500ml 2N NaOH混合，并在室温下搅拌30分钟。分离出有机相，用水洗涤，并用Na2SO4干燥之。使浓缩后所得的固态残留物在叔丁基甲基醚中再结晶，得72.2g熔点为120-121℃的内鎓盐。2.异戊基羰基亚甲基三苯基正膦标题化合物的生成，以相似于1.中所述的方法，通过异戊基甲基酮的溴化来进行。溴化物与三苯基膦反应，生成鏻盐，并用2N NaOH生成内鎓盐。用50.0ml异戊基·甲基酮和18.2ml溴为原料，经蒸馏提纯，得54.68g 1-溴-5-甲基己-2-酮，K15-20p为80-86℃。用54.58g溴化物和74.14g三苯基膦作原料。制得91.6g鏻盐，熔点为230-233℃。以91.6g鏻盐为原料，经用NaOH处理并在二氯甲烷/酯中再结晶粗产物后，制得69.8g标题化合物，熔点为64-67℃。3.异丙氧基甲基羰基亚甲基三苯基正膦将2.43g钠溶于150ml异丙醇。经添加20.0g氯甲基羰基亚甲基三苯基正膦(R.F.Hudson等，J.Org.Chem.28第2446页(1963年))之后，溶于200ml异丙醇，回流加热8小时。将冷却后的反应混合物倾入食盐溶液中，并用乙酸乙酯萃取。经浓缩后所得的油状残留物，用乙酸乙酯在硅胶上进行色谱分离。制得9.53g标题化合物，熔点为134℃。4.(2-异丙氧基乙基)-羰基亚甲基三苯基正膦a.1-溴-4-异丙氧基-丁-2-酮在一种由68.2g 4-异丙氧基-2-丁酮(F.B.Hasan等，J.Biolog.Chem.256，第7781页1981年)溶于315ml甲醇所成的溶液中，在0℃下滴加26.9ml溴，尔后在+10℃下搅拌1.5小时。接着，向反应溶液滴加470ml水，并在室温下搅拌16小时。为进行分离，将其倾入饱和食盐溶液，并用乙醚萃取。蒸馏粗产物，得78.07g溴衍生物，K15-20p为95℃。b.4-异丙氧基-2-氧代-丁基-三苯基鏻溴化物按1.中所述的方法，由78.0g在a.中所得的溴化物和97.85g三苯基膦，制得133.35g鏻盐，熔点为183℃。c.(2-异丙氧基乙基)-羰基亚甲基三苯基正膦如1.中所述，将b.中所得的溴化鏻(133.2g)用2N NaOH的二氯甲烷溶液处理。经在乙酸乙酯中再结晶粗产物后，得64.38g标题化合物，熔点为97℃。5.(1-乙基丙氧基甲基)-羰基亚甲基三苯基正膦类似于异丙氧基甲基羰基亚甲基三苯基正膦的制备方法，使3.04g钠溶于100ml 3-戊醇所成的溶液，与25.0g氯甲基羰基亚甲基三苯基正膦反应，制得晶态油状的标题化合物，熔点为66-70℃。6.环丙基甲氧基甲基羰基亚甲基三苯基正膦。相似于异丙氧基甲基羰基亚甲基三苯基正膦的制备方法，使由5.58g钠溶于25.0g环丙基甲醇和200ml甲苯所成的溶液，与30.0g氯甲基羰基亚甲基三苯基正膦反应。制得固体状标题化合物，熔点为121℃。7.(3-丁炔基)-羰基亚甲基三苯基正膦使20.0g甲基羰基亚甲基三苯基正膦溶于628ml四氢呋喃，并在-78℃下，滴加41.3ml丁基锂(1.6mol的己烷溶液。接着，滴加5.0ml炔丙基溴。经加热到室温后，将反应混合物置于冰/食盐溶液上，并用乙酸乙酯萃取。用硫酸钠干燥有机相后，得23.4g固体物。用柱色谱法提纯(硅胶/乙酸乙酯)，得15.4g标题化合物，熔点为135-136℃。8.(3-丁烯基)-羰基亚甲基三苯基正膦由溶于471ml四氢呋喃的15.0g甲基羰基亚甲基三苯基正膦，同31.0ml丁基锂和4.28ml烯丙基溴，进行相似于7的反应，制得晶状油状标题化合物，熔点为92-93℃。改变Wittig反应中所用的酮组分，可按相似方法进而制备通式Ⅳ所示的化合物。实施例1将1.6g1(S)，3(R)-双-(叔丁基二甲基甲硅烷氧基)-20(R)-甲基-9，10-断孕-5E，7E，10(19)-三烯-21-甲醛溶于50ml甲苯，所成溶液在添加3.02g异戊基羰基亚甲基三苯基正膦后，在80℃和氩气氛下搅拌16小时。接着，减压除去溶剂，并用己烷/乙酸乙酯在硅胶上对残留物进行色谱分离。主馏分得1.15g〔1(S)，3(R)-双-(叔丁基二甲基甲硅烷氧基)-9，10-断胆-5E，7E，10(19)，23(E)-四烯-24-基〕-4-甲基-戊-1-酮，为无色油状物。1H-NMR(CDCl3)δ＝0.01ppm(s，12H，Si-CH3)，0.56(s，3H，H-18)，0.87(s，18H，Si-t.-丁基);0.88(d，J＝7Hz，6H，C-(CH3)2)，0.95(d，J＝7Hz，3H，H-21);4.25(m，1H，H-3);4.55(m，1H，H-1);4.94和5.00(s，je1H，H-19);5.82和6.46(d，J＝11Hz，je1H，H-6，H-7);6.10(d，J＝16Hz，1H，H-24);6.80(m，1H，H-23)。实施例2将572mg三氯化铈七水合物溶于10ml甲醇，并添加溶于5ml甲醇中的按实施例1所制化合物(1.10g)。经添加61mg氢化硼钠后，在0℃下搅拌30分钟。为分离起见，将反应混合物倾入水中，用二氯甲烷萃取，用Na2SO4干燥，并予以浓缩。用己烷/乙酸乙酯，在硅胶上对如此制得的非对映异构醇混合物，进行色谱分离。在洗脱序列中，得到290mg1(S)，3(R)-双-(叔丁基二甲基甲硅烷氧基)-24-(1-羟基-4-甲基戊基)-9，10-断-5E，7E，10(19)，23(E)-胆四烯(差向异构体A)及120mg差向异构体B。这两种差向异构体呈现完全相同的核磁共振谱。1H-NMR(CDCl3)δ＝0.01ppm(s，12H，Si-CH3)，0.49(s，3H，H-18)，0.86(s，18H，Si-t.-butyl);0.86(d，J＝7Hz，6H，C-(CH3)2);0.88(d，J＝7Hz，3H，H-21);4.16(m，1H，H-3);4.48(m，1H，H-1);4.88和4.93(s，je1H，H-19);5.40(dd，J＝15.5u.7Hz，1H，H-24);5.55(m，1H，H-23);5.77和6.40(d，J＝11Hz，je1H，H-6，H-7)。实施例3将290mg在实施例2中制得的产物(差向异构体A)溶于80ml甲苯，所成的溶液在添加44mg蒽和0.01ml三乙胺后，在Pyrex硬玻璃浸入式反应器中用一盏高压水银灯(飞利浦HPK125)照射。照射时间为3.5分钟。导入氮气流，来保证溶液被均匀搅拌。经浓缩并用己烷/乙酸乙酯在硅胶上色谱分离后，得241mg1(S)，3(R)-双-(叔丁基二甲基甲硅烷氧基)-24-(1-羟基-4-甲基戊基)-9，10-断胆-5Z，7E，10(19)，23(E)-四烯，为无色油状物。〔α〕20D+49.6°(CHCl3，C＝0.425)。以相似方法处理120mg按实施例2制得的极性异构体(差向异构体B)，得113mg无色油状物。〔α〕20D+41.4°(CHCl3，c＝0.285)。实施例4由差向异构体A按实施例3制得的产物225mg溶于5mlTHF，所成溶液在添加1.31ml 1M四丁基铝氟化物THF溶液后，在60℃下搅拌60分钟。冷却后，倾入饱和食盐溶液中，并用乙酸乙酯萃取。粗产物用己烷/乙酸乙酯在硅胶上进行色谱分离，并制得85mg24-(1-羟基-4-甲基戊基)-9，10-断胆-5Z，7E，10(19)，23E-四烯-1(S)，3(R)-二醇，为白色泡沫。1H-NMR(CDCl3)δ＝0.57ppm(s，3H，H-18)，0.84(d，J＝7Hz，3H，H-21);0.92(d，J＝7Hz)，6H，C-(CH3)2;4.03(m，1H，H-25);4.23(m，1H，H-3);4.43(m，1H，H-1);5.00和5.33(s，je1H，H-19);5.45(dd，J＝15.5u.7Hz，1H，H-24);5.60(m，1H，H-23);6.02和6.38(d，J＝1Hz，je11H，H-6，H-7)。用相似方法处理按实施例3用差向异构体B制得的产物(95mg)，得35mg无色油状差向异构体三醇。两种差向异构体的核磁共振谱完全相同。实施例5以相似于实施例1中所述的方法，使溶于53ml甲苯的2.05g1(S)，3(R)-双-(叔丁基二甲基甲硅烷氧基)-20-(R)-甲基-9，10-断孕-5E，7E，10(19)-三烯-21甲醛，与3.4g异丁基羰基亚甲基三苯基正膦反应。经色谱提纯后，得〔1(S)，3(R)-双-(叔丁基二甲基甲硅烷氧基)-9，10-断胆-5E，7E，10(19)，23(E)-四烯-24-基〕-3-甲基-丁-1-酮，熔点为79-81℃(从乙醇中制得)，〔α〕20D+52.6°(CHCl3，c＝0.500)。实施例6使1.75g实施例5中制得的产物，在实施例2的诸条件下进行还原，以此制得差向异构体油状混合物1(S)，3(R)-双-(叔丁基二甲基甲硅烷氧基)-24-(1(R，S)-羟基-3-甲基丁基)-9，10-断胆-5E，7E，10(19)，23E-四烯。经用己烷/乙酸乙酯在硅胶上色谱分离，依洗脱序制得780mg差向异构体A和600mg差向异构体B，为无色油状物，核磁共振谱并无不同。实施例7相似于实施例3进行三重敏化光异构作用，并接着相似于实施例4进行甲硅烷基醚(silylether)分解，以此由700mg按实施例6制得的差向异构体A，制得240mg24-(1-羟基-3-甲基丁基)9，10-断胆-5Z，7E，10(19)，23E-四烯-1(S)，3(R)-二醇(化合物A)，分解温度区间为119-125℃。〔α〕20D+38.8°(甲醇，c＝0.505)。用相似方法处理330mg差向异构体B，得129mg24-(1-羟基-3-甲基丁基)-9，10-断胆-5Z，7E，10(19)，23E-四烯-1(S)，3(S)-二醇(化合物B)，分解温度区间为139-145℃，〔α〕20D+54.8°(甲醇，c＝0.505)。实施例8将170mg按实施例5制得的产物溶于5ml THF，所成的溶液在添加200mg锂-三叔丁氧基铝氢化物后，于室温下搅拌90分钟。为进行分离，加入0.8ml饱和NH4Cl溶液，过滤，并浓缩滤液，在Al2O3(Merck，中性，步骤Ⅲ)上色谱分离粗产物，得108mg 1-〔1(S)，3(R)-双-(叔丁基二甲基甲硅烷氧基)9，10-断胆-5E，7E，10(19)-三烯-24-基〕-3-甲基-丁-1-酮，为无色油状物。1H-NMR(CDCl3)δ＝0.53ppm(s，3H，H-18);4.22(m，1H，H-3);4.54(m，1H，H-1);4.93und 4.98(m，je1H，H-19);5.82und 6.46(d，J＝11Hz，je1H，H-6，H-7)。实施例9相似于实施例3进行光化学双键异构化，并相似于实施例4进行甲硅烷基醚分解，用100mg由实施例8所得的产物，制得50mg1-〔1(S)，3(R)-二羟基-9，10-断胆-5Z，7E，10(19)-三烯-24基〕-3-甲基-丁-1-酮。紫外(甲醇)212nm(ε＝14 300)，265(15 860)。实施例101.6g1(S)，3(R)-双-(叔丁基二甲基甲硅烷氧基)-20(R)-甲基-9，10-断孕-5E，7E，10(19)-三烯-21-甲醛与(2-异丙氧基乙基)-羰基亚甲基三苯基正膦进行相似于实施例1的反应，得1.15g 1-〔1(S)，3(R)-双-(叔丁基二甲基甲硅烷氧基)-9，10-断胆-5E，7E，10(19)，23(E)-四烯-24-基〕-3-异丙氧基-丙-1-酮，为无色油状物。1H-NMR(CDCl3)δ＝0.01ppm(s，12H，Si-CH3)，0.55(s，3H，H-18)，0.86和0.90(s，je9H，Si-t.-丁基);0.96(d，J＝7Hz，3H，H-21);1.15(d，J＝7Hz，6H，C(CH3)2);3.60(m，1H，CH-O);3.73(t，J＝7Hz，2H，CH2-O);4.23(m，1H，H-3);4.55(m，1H，H-1);4.95和5.00(m，je1H，H-19);5.83和6.46(d，J＝11Hz，je1H，H-6，H-7);6.11(d，J＝15.5Hz，1H，H-24);6.87(m，1H，H-23)。实施例11用相似于实施例2的方法，相似于实施例3的光异构化，以及相似于实施例4的甲硅烷基醚分解，由1.05g按实施例10所制的产物，制得143mg 24-(1(R，S)-羟基-3-异丙氧基丙基)-9，10-断胆-5Z，7E，10(19)，23-四烯-1(S)，3(R)-二醇，为非对映异构体的1∶1混合物，可用高压液相色谱法予以分离。两种异构体的核磁共振谱完全相同。1H-NMR(CDCl3)δ＝0.57ppm(S，3H，H-18)，0.94(d，J＝7Hz，3H，H-21);1.15(d，J＝7Hz6H，C(CH3)2)，4.17(m，1H，H-3);4.21(m，1H，H-25);4.38(m，1H，H-1);4.98和5.29(m，je1H，H-19);5.45(dd，J＝15.5和7Hz，1H，H-24);5.63(m，1H，H-23);6.02und 6.38(d，J＝11Hz，je1H，H-6，H-7)。实施例12用醛1和异丙氧基甲基羰基亚甲基三苯基正膦为原料，以相似于实施例1-4的程序，制得异构体B(5Z，7E，22E-1(S)，3(R)，24(S)-9，10-断-24a，24b-二同型-24b-氧胆-5，7，10(19)，22-四烯-1，3，24-三醇)，熔点为131-132℃。实施例13用醛1和(2-异丙氧基乙基)-羰基亚甲基三苯基正膦为原料，以相似于实施例1-4的步骤，制得异构体B(5Z，7E，22E-1(S)，3(R)，24(S)-9，10-断-24a，24b，24c-三同型-24c-氧杂胆-5，7，10(19)，22-四烯-1，3，24-三醇，熔点为125-126℃。实施例14相似于实施例1，使0.85g1(S)，3(R)-双-(叔丁基二甲基甲硅烷氧基)-20(R)-甲基-9，10-断孕-5E，7E，10(19)-三烯-21-甲醛4.5g环丙基甲基羰基三苯基正膦进行反应。经用己烷/乙酸乙酯在硅胶上色谱提纯后，得500mg1(S)，3(R)-双-(叔丁基二甲基甲硅烷氧基)-26，27-环-24a，24b-二同型-9，10-断胆-5E，7E，10(19)，23E-四烯-24a-酮，为无色泡沫。1H-NMR(CDCl3)δ＝0.01ppm(s，12H，Si-CH3);0.09及0.50(m，各2H，H-26及H-27);0.50(s，3H，H-18);0.83及0.85(s，各9H，Si-t.丁基);0.91(d，J＝7.3Hz，3H，H-21);0.96(m，1H，H-25);2.47(d，J＝6Hz，2H，H-24b);4.16(m，1H，H-3);4.47(m，1H，H-1);4.89及4.93(s，各1H，H-19);5.77及6.40(d，J＝11Hz，各1H，H-6及H-7);6.08(d，J＝15.5Hz，H-24);6.75(ddd，J＝15.5、9、6.5Hz，1H，H-23)。实施例15相似于实施例2，使实施例14中所制产物进行反应，产生200mg1(S)，3(R)-双-(叔丁基二甲基甲硅烷氧基)-26，27-环-24a，24b-二同型-9，10-断胆-5E，7E，10(19)，23E-四烯-24a(R，S)-醇，为差向异构体的油状混合物，两者的核磁共振谱无区别。1H-NMR(CDCl3)δ＝0.01ppm(s，12H，Si-CH3);0.09及0.40(m，各为2H，H-26及H-27);0.50(s，3H，H-18);0.68(m，1H，H-25);0.81及0.86(s，各为9H，Si-t.-butyl);0.88(d，J＝7Hz，3H，H-21);1.40(t，J＝7Hz，H-24b);4.13(m，1H，H-24a);4.17(m，1H，H-3);4.49(m，1H，H-1);4.88及4.93(s，各为1H，H-19);5.45(dd，J＝15.5、6.5Hz，1H，H-24);5.59(ddd，J＝15.5、7、6.5Hz，1H，H-23);5.77及6.40(d，J＝11Hz，各为1H，H-6及H-7)。实施例16相似于实施例3，经进行三重敏化光异构化，并相似于实施例4脱除保护基团，用190mg在实施例15中所述的化合物作原料，制得86mg26，27-环-24a，24b-二同型-9，10-断胆-5Z，7E，10(19)，23E-四烯-1(S)，3(R)，24a(R，S)-三醇，为非对映异构体的1∶1混合物，两者可用高压液相色谱法分离。两种非对映异构体的核磁共振谱完全相同。1H-NMR(CDCl3)δ＝0.09及0.49(m，各为2H，H-26及H-27);0.53(s，3H，H-18);0.70(m，1H，H-25);0.93(d，J＝7Hz，3H，H-21);4.18(m，1H，H-24a);4.22(m，1H，H-3);4.43(m，1H，H-1);5.00及5.32(s，各为1H，H-19);5.50(dd，J＝15.5、6.5Hz，H-24);5.64(ddd，J＝15.5、7、6.5Hz，1H，H-23);6.02及6.38(d，J＝11Hz，各为1H，H-6及H-7)。实施例17以醛1和(1-乙基丙氧基甲基)-羰基亚甲基三苯基正膦为原料，用相似于实施例1-4的步骤，制得异构体B(5Z，7E，22E-1(S)，3(R)，24(S)-26，27-二甲基-24a，24b，-二同型-24b-氧杂-9，10-断胆-5，7，10(19)，22-四烯-1，3，24-三醇)，熔点为103-105℃。实施例18以醛1和环丙基甲氧基甲基羰基亚甲基三苯基正膦为原料，按相似于实施例1-4的程序，制得异构体B(5Z，7E，22E-1(S)，3(R)，24(S)-26，27-环-24a，24b，24c-三同型-24b-氧杂-9，10-断胆-5，7，10(19)，22-四烯-1，3，24-三醇)。1H-NMR(DMSO-d6)δ＝0.16ppm(m，2H);0.43(m，2H);0.53(s，3H);1.00(d，J＝6Hz，3H);3.21(m，4H);4.00(m，2H);4.19(m，1H);4.51(d，J＝5Hz，1H);4.70(d，J＝5Hz，1H);4.75(m，1H);4.82(d，J＝5Hz，1H);5.21(m，1H);5.39(m，2H);5.98(d，J＝11Hz，1H);6.18(d，J＝11Hz，1H)。实施例19以醛1和(3-丁炔基)-羰基亚甲基三苯基正膦为原料，按相似于实施例1-4的步骤制得异构体B(5Z，7E，22E-1(S)，3(R)，24(S)-24-(3-丁炔基)-9，10-断胆-5，7，10(19)，22-四烯-1，3，24-三醇)，熔点为115-118℃。实施例20以醛1和(3-丁烯基)-羰基亚甲基三苯基正膦为原料，按相似于实施例1-4的程序，制得异构体B(5Z，7E，22E-1(S)，3(R)，24(S)-24-(3-丁烯基)-9，10-断胆-5，7，10(19)，22-四烯-1，3，24-三醇)，熔点为146-147℃。权利要求1.通式Ⅰ所示的侧链同系维生素D衍生物，式中，R1代表一个氢原子、一个羟基或一个含1-9个碳原子的酰氧基，R2代表一个氢原子或一个含1-9个碳原子的酰基，R3或R4代表一个羟基或一个含1-9个碳原子的酰氧基，而另一个取代基代表一个氢原子，或者R3和R4共同代表一个氧原子，R5和R6各自分别代表一个含至多4个碳原子的直链或支链烷基、一个三氟甲基，或者共同代表一个同叔碳原子形成的饱和、不饱和或芳族环碳环或含有1或2个N原、O原子或S原子的3、4、5或6元杂环，B和D或者各代表一个氢原子，或者共同代表一个第二键(E构型双键)，以及抑或A代表一个位于碳原子20和22之间的直接键合，同时X代表一个亚烷基氧基-(CH2)nO-，其中n=1至3，抑或A代表一个位于碳原子20和22之间的桥亚甲基(-CH2-)，同时X代表一个亚烷基-(CH2)n-或一个亚烷基氧基-(CH2)nO-，其中n=1至3，或者当A代表一个直接键合，同时B和D共同代表一个第二键时，-(CH2)2-≡或-(CH2)2-二基团。2.权利要求1所述的维生素D衍生物，其中R1代表一个羟基。3.权利要求1所述的维生素D衍生物，其中R2代表一个氢原子。4.权利要求1所述的维生素D衍生物，其中A是位于碳原子20和碳原子22之间的一个直接键合。5.权利要求1所述的维生素D衍生物，其中A为一个桥亚甲基。6.权利要求1所述的维生素D衍生物，其中B和D共同为一个第二键。7.权利要求1所述的维生素D衍生物，其中R3或R4为一个羟基。8.权利要求1所述的维生素D衍生物，其中X中的n为1或2。9.权利要求1所述的维生素D衍生物，其中R5和R6代表甲基。10.权利要求1所述的维生素D衍生物，其中R5、R6和叔碳原子共同代表一个环丙基环。11、24-(1(R)-羟基-4-甲基戊基)-9，10-断胆-5Z，7E，10(19)，23E-四烯-1(S)，3(R)-二醇，24-(1(S)-羟基-4-甲基戊基)-9，10-断胆-5Z，7E，10(19)，23E-四烯-1(S)，3(R)-二醇，24-(1(R)-羟基-3-甲基丁基)-9，10-断胆-5Z，7E，10(19)，23E-四烯-1(S)，3(R)-二醇，24-(1(S)-羟基-3-甲基丁基)-9，10-断胆-5Z，7E，10(19)，23E-四烯-1(S)，3(R)-二醇，24-(1(R)-羟基-3-甲基丁基)-9，10-断胆-5Z，7E，10(19)-三烯-1(S)，3(R)-二醇，24-(1(S)-羟基-3-甲基丁基)-9，10-断胆-5Z，7E，10(19)-三烯-1(S)，3(R)-二醇，24-(1(R)-羟基-3-异丙氧基丙基)-9，10-断胆-5Z，7E，10(19)，23E-四烯-1(S)，3(R)-二醇，24-(1(S)-羟基-3-异丙氧基丙基)-9，10-断胆-5Z，7E，10(19)，23E-四烯-1(S)，3(R)-二醇，24-异丙氧基甲基-9，10-断胆-5Z，7E，10(19)，22E-四烯-1(S)，3(R)，24(R)-三醇，24-异丙氧基甲基-9，10-断胆-5Z，7E，10(19)，22E-四烯-1(S)，3(R)，24(S)-三醇，24-(2-异丙氧基乙基)-9，10-断胆-5Z，7E，10(19)，22E-四烯-1(S)，3(R)，24(R)-三醇，24-(2-异丙氧基乙基)-9，10-断胆-5Z，7E，10(19)，22E-四烯-1(S)，3(R)，24(S)-三醇，26，27-环-24a，24b-二同型-9，10-断胆-5Z，7E，10(19)，23E-四烯-1(S)，3(R)，24a(R)-三醇，26，27-环-24a，24b-二同型-9，10-断胆-5Z，7E，10(19)，23E-四烯-1(S)，3(R)，24a(S)-三醇。12.制备通式Ⅰ所示侧链同系维生素D衍生物的方法，式中R1、R2、R3、R4、R5和R6，以及A、B、D和X的含意同权利要求1中所述，其特征在于，将通式Ⅳ的化合物式中R1′为一个氢原子或一个被保护的羟基，R2′为一个羟基保护基团，同时A、X以及R5和R6具通式Ⅰ中所述含意需要时经选择氢化侧链上双键后，转化成通式Ⅳa的化合物其中R1′、R2′、A、X以及R5和R6具通式Ⅳ中所述含意，并在需要时，于羰基官能团发生还原后，以及在必要时，分离反应所生成、通式Ⅲa和Ⅲb的差向异构羟基化合物的混合物其中R1′、R2′、A、X以及R5和R6具通式Ⅳ中所述含意，而B和D具通式Ⅰ中所述含意。通过用紫外光照射，使立体异构体在5，6-双键处反转，完成通式Ⅱ所示的化合物式中R1′、R2′、A、B、D、X以及R5和R6具通式Ⅲa/Ⅲb中所述含意，并接着通过脱除所存在的羟基保护基团，并在必要时通过使羟基部分酯化或完全酯化，将通式Ⅱ所示化合物转化成通式Ⅰ所示化合物。13.药物制剂，其特征在于，含有至少一种据权利要求1-11所述的化合物和至少一种药用载体。14.据权利要求1-11所述各化合物在制药方面的应用。全文摘要本发明涉及通式I所示新型侧链同系维生素D衍生物，其制备方法，含有该化合物的医药制剂，以及该化合物在制药方面的应用。该新化合物具有阻止增生和分化细胞的作用。文档编号C07D401/00GK1054588SQ9110150公开日1991年9月18日 申请日期1991年2月6日 优先权日1990年2月6日发明者冈特·尼夫, 杰拉尔德·基尔施, 安德烈斯·斯坦迈耶, 卡蒂卡·许瓦茨, 马蒂亚斯·布劳蒂甘姆, 鲁思·蒂尔洛夫-埃克特, 彼得拉·拉哈 申请人:先灵公司