脱氧核糖核酸(dna)提取工艺的制作方法

专利名称：脱氧核糖核酸(dna)提取工艺的制作方法技术领域：本发明涉及脱氧核糖核酸的提取工艺，进一步涉及从鱼性腺如精巢提取脱氧核糖核酸(DNA)的工艺。脱氧核糖核酸(Deoxytihonucleicacid-简写DNA)是人体和生物体的主要遗传物质，它对生物的生长、发育、遗传、变异、代谢等生命活动，起着控制作用。脱氧核糖核酸产品，应用谱极广除用作生化试剂，提取核苷酸等原料外，在医药保健，农业作物以及食品美容等方面均产生相当显著的作用，因此一直都列为国内外重大科研项目，吸引研究者们不辞辛劳地耕耘。二十世纪初，研究人员只能从蛙鱼和鲱鱼的精巢中，采用化学方法在实验室里进行微量提取，稍后又发现了可从小牛的胸腺中提取;目前国内外相继发明了从海产鱼精巢中提取DNA的技术，这些技术大多借助化学方法完成，然而化学方法的弊端则不言而喻。苏联专利SU652187和日本专利J55015449相继披露了从鱼的性腺组织体内提取DNA的技术，前者用的是生化提取法，后者用的是化学提取法。然而前者用的生化提取法是采用胰蛋白酶或链霉蛋白酶进行处理，成本高，来源少，且工序复杂，只能在实验室中少量提取，未形成大规模生产，况且用生物化学方法从淡水鲤鱼精巢中提取DNA，讫今国内外尚无报导。本发明的目的在于1、扩大DNA的生产规模，广泛取材，从各类鱼的性腺组织如鱼精巢提取之，进而避化学提取法之弊端，扬生化提取法之优点，减少环境污染。2、简化工艺，缩短生产时间，提高提取率。本发明的技术方案如下取鱼精巢(淡水海水鱼均可)作原料，因精巢中的精原细胞含有大量DNA，精巢本身又含有脱氧核糖核酸酶(DNase)，加工过程中加入柠檬酸钠，抑制DNase的活性，使精巢中的DNA不被其本身的DNase所水解。采用酶水解蛋白质，使之与DNA脱离，在30℃左右加入PH9的NaHCO3缓冲液，最后用食用酒精沉淀DNA，使DNA成纤维状沉淀，经过滤，干燥，得到白色或微黄色纤维状DNA工业产品。以下结合上述技术方案详述本发明本发明采用柠檬酸钠(Sodium-Citrate)和氯化钠(Sodium Clrororide)的混合液(以下简称SSC)，碳酸氢钠(NaHCO3)和纯度为95%的食用工业酒精为反应试剂。所述SSC溶液中的柠檬酸钠为食用级，取150g溶于10000ml水中搅拌均匀，使之溶解，再加60g食盐(NaCl)加入柠檬酸钠溶液，搅拌使之溶解。取100g食用级碳酸氢钠(NaHCO3)加入10000ml水中，使之溶解，即成PH9的NaHCO3缓冲液。本发明工艺流程具体为7个步骤。1、将精巢中的夹杂物(如脂肪、血块、肝、鱼鳔、结缔组织等)去除干净，并用清水洗涤，沥干水分后，称重。2、将称重的精巢倒入组织捣碎机加一倍重量的SSC溶液，捣碎使成匀浆。3、将匀浆倒入离心试管中，在天平上平衡，再在3000转/1分钟的冷冻离心机中离心8-11分钟，倾去上清液，留下沉淀。4、以上操作重复三次，目的在于除去水溶性和盐溶性杂质，留下沉淀。5、将沉淀取出，加相当原料重量1/20的PH9碳酸氢钠溶液，加入混合胰酶0.08-0.1%，搅拌均匀，於37℃下保温5-10分钟，夏天室温即可，继续搅拌均匀，水解完毕后倒入95%的酒精使DNA沉淀。6、反复用酒精沉淀脱水三次后滤干酒精，即得成品。7、将白色或微黄色纤维状成品置60℃左右的鼓风干燥箱中干燥。与已有技术比较，本发明优点体现在以下几个方面1、生产工艺简单，从投料到出成品只需2-2.5小时，耗料少，收率大，平均提取率在10%以上，而已往技术要花2-3天，提取率仅4-5%。2、无环境污染，生产条件温和，所用试剂均为食用级，对人体无副毒作用，而以往用的去蛋白剂是十二烷基磺酸钠或有机溶剂，耗费大且污染环境，生产出的产品不能用于食品添加剂。3、取材容易，来源广泛，除从海水鱼精巢提取，还可从淡水鱼精巢提取。权利要求1.本发明脱氧核糖核酸(DNA)提取工艺经(匀浆、沉淀、搅拌)等工序，其特征在于本发明是将鱼的精巢去杂，洗净沥干后加入柠檬酸钠和氯化钠的混合液，捣碎、匀浆，然后倒入离心试管，於天平上平衡，再在3000转/1分钟的冷冻离心机中离心8-11分钟，倾去上清液，留下沉淀，上述工序重复三次，然后取出沉淀，加入为原料重量1/20的碳酸氢钠(NaHCO3)溶液和0.08-0.1%的胰混合酶，搅拌均匀，於35℃-37.5℃保温5-10分钟，搅拌均匀，水解完毕，倒入95%酒精沉淀，滤干酒精经干燥即得成品。2.据权利要求1所述的脱氧核糖核酸(DNA)提取工艺，其特征在于碳酸氢钠(NaHCO3)溶液酸碱度为PH9。3.据权利要求1所述的脱氧核糖核酸(DNA)提取工艺，其特征在于用95%的酒精反复沉淀白色纤维状成品三次。4.据权利要求1所述的脱氧核糖核酸(DNA)提取工艺，其特征在于所述柠檬酸钠和碳酸氢钠、酒精均为食用级。全文摘要本发明涉及脱氧核糖核酸(DNA)提取工艺，它提出了一种从鱼的性腺体如鱼的精巢中提取DNA的生产工艺。该工艺系采用由柠檬酸钠和氯化钠配制的混合液，食盐以及碳酸氢钠为生产试剂，先后加入鱼精巢，经搅拌、离心、留下沉淀，再用混合胰酶和食用酒精处理直至，获得白色或微黄色纤维状成品。本发明工艺简单，节时省料，提取率高，无环境污染，对人体无毒副作用，应用面广。文档编号C07H1/08GK1112124SQ9411099公开日1995年11月22日 申请日期1994年5月16日 优先权日1994年5月16日发明者刘润芝 申请人:刘润芝