一种用于检测Mucin1肿瘤标志物的荧光探针及其制备方法与流程

本发明涉及荧光探针，具体涉及一种用于检测mucin1肿瘤标志物的荧光探针及其制备方法。

背景技术：

1、mucin1是一种糖蛋白，研究表明mucin1在多种腺癌变肿瘤中过量表达，与癌症的浸润、恶性程度、转移情况息息相关。同时，mucin1还是抗癌治疗的靶点。因此，高敏感度检测mucin1对早期诊断恶性肿瘤及靶向治疗至关重要。

2、现行检测mucin1的方法有elisa、法电化学发光、高效液相色谱、icp–ms各有优点，但同时存在局限性。例如，高效液相色谱法仪器昂贵，耗时长；elisa法容易受环境因素影响。因此，建立检测mucin1的新方法势在必行。近年来，基于核酸适配体建立的生物传感技术发展迅速，已用于检测细菌、细胞等领域。将核酸适配体与荧光探针结合构建的分析方法检测蛋白质，具有特异性好，不用标记的优势，但灵敏度不够高，前处理复杂，背景干扰较大。

技术实现思路

1、针对上述情况，为克服现有技术的缺陷，本发明提供了一种用于检测mucin1肿瘤标志物的荧光探针及其制备方法，将mucin1适配体功能化的银纳米簇与tb-mofs结合，tb-mofs与mucin1适配体功能化的银纳米簇发生荧光共振能量转移，tb-mofs的绿色荧光被银纳米簇吸收，荧光探针发射出银纳米簇的红色荧光；当加入mucin1时，mucin1与mucin1适配体功能化的银纳米簇结合，红色荧光淬灭，tb-mofs的绿色荧光增强，该荧光探针具有操作简单、可视化、灵敏度高的优点。

2、为了实现上述目的，本发明采取的技术方案如下：本发明提出了一种用于检测mucin1肿瘤标志物的荧光探针，所述荧光探针包括以下重量份的组分：mucin1适配体功能化的银纳米簇6~10份、tb-mofs 4~6份、nh4ac-hac 缓冲液4~6份、聚乙烯亚胺2~3份、蒸馏水40~60份。

3、优选地，所述mucin1适配体功能化的银纳米簇的制备方法，包括以下步骤：

4、s1、在4 ml ep管中依次加入0.6~1.0 ml的nh4ac–hac缓冲液、300~500 µl 100 μmol/l的mucin1适配体溶液、1.5~2 ml蒸馏水和200~300 µl 1 mmol/l的agno3，混合均匀后冰浴30分钟，得到混合反应液；

5、s2、取100~150 µl新研制1 mmol/l的nabh4溶液，迅速加入步骤s1所制的混合反应液中，并剧烈震荡30s以还原银离子，得到还原反应液；

6、s3、将步骤s2所制的还原反应液放置在黑暗环境中，在4℃条件下静置反应72 h，得到的mucin1适配体功能化的银纳米簇。

7、优选地，所述步骤s1中mucin1适配体的碱基序列为tcc gag ttt ccc tgc cccaac ctc cac ctg ggg tca ataa。

8、优选地，所述nh4ac–hac缓冲液的ph为6.8，浓度为0.2 mol/l。

9、优选地，所述tb-mofs的制备方法，包括以下步骤：

10、①称取0.4~0.6 mmol tb(no3)3·6h2o溶于15 ml混合溶剂中，加入0.4~0.6 mmol均苯三甲酸、0.2~0.4 mmol邻菲罗啉，溶解混合均匀，得到反应溶液；

11、②加40~60 µl 三乙胺至步骤①所制的反应溶液中，混合均匀后转移至25 ml具有聚四氟乙烯内衬的反应釜中，放置在烘箱中140℃条件下加热24 h，冷却至室温后，8000rpm离心得到沉淀，利用蒸馏水洗涤三次，放置在烘箱中60℃干燥12 h，得到tb-mofs。

12、优选地，所述步骤①中混合溶剂由dmf和水以质量比1~2：1组成。

13、优选地，所述聚乙烯亚胺为超支化聚乙烯亚胺，分子量为1200~5000 da。

14、本发明还提出一种用于检测mucin1肿瘤标志物的荧光探针的制备方法，包括以下步骤：

15、i. 在2 ml ep管中，按质量份加入nh4ac-hac 缓冲液和mucin1适配体功能化的银纳米簇，混合均匀后加入tb-mofs，然后将ep管放置在微孔板孵育器中，60℃孵育2 h；

16、ii. 按质量份在步骤i所述的ep管中加入聚乙烯亚胺和蒸馏水，继续60℃孵育2~4h，混合均匀后得到检测mucin1肿瘤标志物的荧光探针。

17、本发明取得的有益效果如下：

18、本发明将mucin1适配体修饰在银纳米簇表面，为银纳米簇提供特异性识别能力的同时，调整银纳米簇的荧光吸收和荧光发射，增强银纳米簇的稳定性；在tb-mofs荧光材料的合成中加入邻菲罗啉可以有效增强稀土离子tb的本征绿色荧光发射，同时去质子剂三乙胺的加入可以提高mofs材料的合成速度和产率；将mucin1适配体功能化的银纳米簇与tb-mofs混合时二者紧密接触，发生荧光共振能量转移，在340 nm波长激发下，tb-mofs中tb的绿色荧光消失，能量转移至银纳米簇，银纳米簇的红色荧光增强；当加入目标物mucin1后，mucin1与mucin1适配体功能化的银纳米簇结合，其红色荧光减弱，tb-mofs的绿色荧光恢复，具有比率荧光变化，并且通过荧光信号的变化，可实现mucin1的直观可视化检测，便于快速理解和分析结果，聚乙烯亚胺的加入可以使探针更加稳定，反应更加灵敏。本发明的荧光探针制备过程简单直接，不需要复杂的化学修饰或长时间的前处理步骤，且所需的试剂成本不高，该荧光探针为低成本的mucin1检测提供了可能，特别适合资源有限的实验条件。

技术特征：

1. 一种用于检测mucin1肿瘤标志物的荧光探针，其特征在于，所述荧光探针包括以下重量份的组分：mucin1适配体功能化的银纳米簇6~10份、tb-mofs 4~6份、nh4ac-hac 缓冲液4~6份、聚乙烯亚胺2~3份、蒸馏水40~60份；

2. 根据权利要求1所述的一种用于检测mucin1肿瘤标志物的荧光探针，其特征在于，所述步骤s1中mucin1适配体的碱基序列为tcc gag ttt ccc tgc ccc aac ctc cac ctgggg tca ataa。

3. 根据权利要求2所述的一种用于检测mucin1肿瘤标志物的荧光探针，其特征在于，所述nh4ac–hac缓冲液的ph为6.8，浓度为0.2 mol/l。

4.根据权利要求3所述的一种用于检测mucin1肿瘤标志物的荧光探针，其特征在于，所述tb-mofs的制备方法，包括以下步骤：

5.根据权利要求4所述的一种用于检测mucin1肿瘤标志物的荧光探针，其特征在于，所述步骤①中混合溶剂由dmf和水以质量比1~2：1组成。

6. 根据权利要求5所述的一种用于检测mucin1肿瘤标志物的荧光探针，其特征在于，所述聚乙烯亚胺为超支化聚乙烯亚胺，分子量为1200~5000 da。

7.一种如权利要求1-6任一项所述的用于检测mucin1肿瘤标志物的荧光探针的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

技术总结本发明属于荧光探针技术领域，具体是提供了一种用于检测Mucin1肿瘤标志物的荧光探针及其制备方法，所述荧光探针包括以下重量份的组分：Mucin1适配体功能化的银纳米簇6~10份、Tb‑MOFs 4~6份、NH4Ac‑HAc缓冲液4~6份、聚乙烯亚胺2~3份、蒸馏水40~60份。将Mucin1适配体修饰在银纳米簇表面，并与Tb‑MOFs结合，发生荧光共振能量转移，Tb的特征绿色荧光淬灭，荧光探针发射出银纳米簇的红色荧光；当加入目标物时，目标物与Mucin1适配体功能化的银纳米簇结合，红色荧光淬灭，Tb的特征绿色荧光恢复，该荧光探针具有操作简单、可视化、灵敏度高的优点。技术研发人员：朱玉凤,黄民成,陈建设,刘珊渡,欧阳海红,罗浩明,刘丹霞,李媛媛,邓思波,李贝受保护的技术使用者：邵阳市中心医院技术研发日：技术公布日：2024/5/27