化学发光底物液、化学发光增强剂及其应用的制作方法

本公开涉及体外诊断免疫检测领域，特别涉及一种碱性磷酸酶促化学发光增强剂、化学发光底物液及其应用。

背景技术：

1、化学发光是指在发生化学反应的过程中，特定物质吸收部分化学能达到激发态，在回到基态的过程中释放的能量以光子的形式释放出来，从而产生发光的现象。化学发光免疫分析(chemiluminescence immunoassay，clia)是指将高灵敏度的化学发光技术与高特异性的免疫反应结合，用于检测抗原、抗体、激素、脂肪酸、维生素和药物等的分析技术。化学发光免疫分析法既有化学发光的高灵敏性，又有酶联免疫反应的操作简单、反应快速的特点，易于标准化实验操作，现已广泛应用于生物学、医学研究和临床诊断。

2、底物发光系统是化学发光免疫分析法中最为关键的一环。目前化学发光免疫分析中主要有辣根过氧化物酶和碱性磷酸酶催化体系。其中碱性磷酸酶催化体系的应用较为广泛。

3、然而，在碱性磷酸酶催化的化学发光体系中，需加入增强剂提高发光效率。增强剂一般多为进口物料，价格昂贵，而且还有达平台期需时长、反应速度慢，本底较高、灵敏度低、达不到部分高敏项目检测要求等缺点。

4、因此，适用于碱性磷酸酶催化体系的化学发光底物液仍需要进一步改进。

技术实现思路

1、本公开的目的在于提供一种适用于碱性磷酸酶催化化学发光体系的荧光剂，从而获得一种配方简单，反应速度快、达平台期时间短，灵敏度高的化学发光增强剂以及化学发光底物液。

2、为此，本公开第一方面提供一种化学发光底物液，包括化学发光底物和化学发光增强剂，所述化学发光增强剂包括荧光剂和表面活性剂，所述荧光剂包括一种或多种羧基荧光素，所述羧基荧光素选自通式i所示的化合物：

3、

4、优选地，所述荧光剂选自5-羧基荧光素、6-羧基荧光素，或5(6)-羧基荧光素；其中，所述5-羧基荧光素为

5、

6、所述6-羧基荧光素为

7、

8、所述5(6)-羧基荧光素为所述5-羧基荧光素和所述6-羧基荧光素的混合物。

9、根据一些实施方式，所述化学发光底物选自二氧杂环丁烷类化合物或吖啶类化合物。

10、根据一些实施方式，所述化学发光底物选自具有螺-金刚烷取代基的二氧杂环丁烷类化合物，优选为amppd、cspd、adp-star、cdp-star、tfe-amppd中的一种或多种。更优选所述化学发光底物为氯代的具有螺-金刚烷取代基的二氧杂环丁烷类化合物或其盐，进一步优选cspd、adp-star、cdp-star中的一种。

11、根据一种实施方式，所述表面活性剂选自阳离子表面活性剂、阴离子表面活性剂、两性离子表面活性剂、非离子表面活性剂中的一种或多种，优选选自水溶性高分子季铵盐、季锍盐或季鏻盐类阳离子表面活性剂中的一种或多种，更优选选自水溶性高分子季铵盐类阳离子表面活性剂中的一种或多种。

12、根据一种实施方式，所述化学发光底物为cspd、adp-star和cdp-star中的一种，所述表面活性剂为聚乙烯基苄基三甲基氯化铵；其中，所述cspd或adp-star或cdp-star的浓度为50-500mg/l，所述聚乙烯基苄基三甲基氯化铵的浓度为1-10g/l。

13、根据一种实施方式，所述化学发光底物液中化学发光底物的浓度为50-500mg/l，优选为150-250mg/l；荧光剂的浓度为30-500mg/l，优选为150-250mg/l；表面活性剂的浓度为1-10g/l，优选为3-7g/l。

14、根据一种实施方式，所述化学发光底物液还包括缓冲剂和防腐剂。

15、根据一种实施方式，所述缓冲剂的ph为7.1-10.6，优选为9.0-10.0。

16、根据一种实施方式，所述缓冲剂可以选自tris-hcl、amp-hcl、ampd-hcl、dea-hcl、ches-hcl、硼酸-naoh、甘氨酸-naoh缓冲液中的至少一种。

17、根据一种实施方式，所述防腐剂可以选自叠氮化钠、proclin系列、山梨酸钾、苯甲酸钠中的至少一种。

18、根据一种实施方式，所述化学发光底物液为碱性磷酸酶催化的化学发光体系的化学发光底物液。

19、根据一种实施方式，所述化学发光底物液适用于碱性磷酸酶浓度低于10^-19mol/l的化学发光体系。

20、本公开第二方面提供一种化学发光增强剂，包括荧光剂和表面活性剂，所述荧光剂包括一种或多种羧基荧光素，所述羧基荧光素选自通式i所示的化合物：

21、

22、根据一种实施方式，所述荧光剂选自5-羧基荧光素、6-羧基荧光素，或5(6)-羧基荧光素；其中，

23、所述5-羧基荧光素为

24、

25、所述6-羧基荧光素为

26、

27、所述5(6)-羧基荧光素为所述5-羧基荧光素和所述6-羧基荧光素的混合物。

28、根据一种实施方式,所述表面活性剂选自阳离子表面活性剂、阴离子表面活性剂、两性离子表面活性剂、非离子表面活性剂中的一种或多种，优选选自水溶性高分子季铵盐、季锍盐或季鏻盐类阳离子表面活性剂中的一种或多种，更优选选自水溶性高分子季铵盐类阳离子表面活性剂中的一种或多种。

29、本公开第三方面还涉及羧基荧光素在增强碱性磷酸酶催化二氧杂环丁烷类衍生物的化学发光中的用途，其中，所述羧基荧光素选自通式i所示的化合物：

30、

31、本公开使得化学发光底物液的发光效率加快，使得达到发光平台期时间缩短，发光平台期持续时间加长，检测灵敏度高且稳定性好，从而提高检测速度及检测准确性，缩短检测时间。本公开所使用原材料易得，性能稳定，有很好的抗菌性能，成本较低，适于工业化生产，可以替代原装进口试剂，降低临床检验的成本。

技术特征：

1.一种化学发光底物液，包括化学发光底物和化学发光增强剂，其特征在于，

2.根据权利要求1所述的化学发光底物液，其特征在于，所述荧光剂选自5-羧基荧光素、6-羧基荧光素，或5(6)-羧基荧光素；其中，

3.根据权利要求1-2任一所述的化学发光底物液，其特征在于，所述化学发光底物选自二氧杂环丁烷类化合物或吖啶类化合物。

4.根据权利要求3所述的化学发光底物液，其特征在于，所述化学发光底物选自二氧杂环丁烷类化合物，优选为具有螺-金刚烷取代基的二氧杂环丁烷类化合物，优选为amppd、cspd、adp-star、cdp-star、tfe-amppd中的一种或多种；或者优选为氯代的具有螺-金刚烷取代基的二氧杂环丁烷类化合物，更优选为cspd、adp-star、cdp-star中的一种。

5.根据权利要求1-3中任一项所述的化学发光底物液，其特征在于，所述表面活性剂选自阳离子表面活性剂、阴离子表面活性剂、两性离子表面活性剂、非离子表面活性剂中的一种或多种，优选选自水溶性高分子季铵盐、季锍盐或季鏻盐类阳离子表面活性剂中的一种或多种，更优选选自水溶性高分子季铵盐类阳离子表面活性剂中的一种或多种。

6.根据权利要求5所述的化学发光底物液，其特征在于，所述化学发光底物为cspd、adp-star和cdp-star中的一种，所述表面活性剂为聚乙烯基苄基三甲基氯化铵；其中，所述cspd或adp-star或cdp-star的浓度为50-500mg/l，所述聚乙烯基苄基三甲基氯化铵的浓度为1-10g/l。

7.根据权利要求1所述的化学发光底物液，其特征在于，

8.根据权利要求1所述的化学发光底物液，其特征在于，所述化学发光底物液还包括缓冲剂和防腐剂。

9.根据权利要求8所述的化学发光底物液，其特征在于，所述缓冲剂的ph为7.1-10.6，优选为9.0-10.0。

10.根据权利要求8所述的化学发光底物液，其特征在于，所述缓冲剂选自tris-hcl、amp-hcl、ampd-hcl、dea-hcl、ches-hcl、硼酸-naoh、甘氨酸-naoh缓冲液中的至少一种。

11.根据权利要求8-10中任一项所述的化学发光底物液，其特征在于，所述防腐剂选自叠氮化钠、proclin系列、山梨酸钾、苯甲酸钠中的至少一种。

12.根据权利要求1-11任一所述化学发光底物液，其特征在于，所述化学发光底物液为碱性磷酸酶催化的化学发光体系的化学发光底物液。

13.根据权利要求1-11任一所述化学发光底物液，其特征在于，所述化学发光底物液适用于碱性磷酸酶浓度低于10^-19mol/l的化学发光体系。

14.一种化学发光增强剂，包括荧光剂和表面活性剂，所述荧光剂包括一种或多种羧基荧光素，所述羧基荧光素选自通式i所示的化合物：

15.根据权利要求14所述的化学发光增强剂，其特征在于，所述荧光剂选自5-羧基荧光素、6-羧基荧光素，或5(6)-羧基荧光素；其中，

16.根据权利要求14或15所述的化学发光增强剂，其特征在于，所述表面活性剂选自阳离子表面活性剂、阴离子表面活性剂、两性离子表面活性剂、非离子表面活性剂中的一种或多种，优选选自水溶性高分子季铵盐、季锍盐或季鏻盐类阳离子表面活性剂中的一种或多种，更优选选自水溶性高分子季铵盐类阳离子表面活性剂中的一种或多种。

17.羧基荧光素在增强碱性磷酸酶催化二氧杂环丁烷类衍生物的化学发光中的用途，其中，所述羧基荧光素选自通式i所示的化合物：

技术总结本公开涉及化学发光底物液、化学发光增强剂及其应用。所述化学发光底物液，包括化学发光底物和化学发光增强剂，所述化学发光增强剂包括荧光剂和表面活性剂，所述荧光剂包括一种或多种羧基荧光素，所述羧基荧光素选自通式I所示的化合物。本公开还涉及羧基荧光素在增强碱性磷酸酶催化二氧杂环丁烷类衍生物的化学发光中的用途。技术研发人员：王军林,詹成雄,李可受保护的技术使用者：深圳迈瑞生物医疗电子股份有限公司技术研发日：技术公布日：2024/7/4