一种用于血管源性脑水肿的多指标定量检测试剂盒的制作方法

本技术涉及生物技术诊断，具体地涉及一种用于血管源性脑水肿的多指标定量检测试剂盒。

背景技术：

1、脑水肿是多种神经病变出现的严重并发症，是导致病人死亡的常见原因。传统的脑水肿分类包括血管源性脑水肿、细胞毒性脑水肿、流体静压性脑积水、低渗性脑水肿、间质性脑水肿，其中血管源性脑水肿在多种脑损伤所致的脑水肿中占重要地位。

2、根据临床经验，针对脑水肿患者，除主要结合影像学方法和临床病史，对脑水肿进行鉴定的方法外，推荐缺氧诱导因子1-α（hypoxia inducible factor-1α，hif- 1α）、血管内皮生长因子- a（vascularendothelial growth factor-a，vegf-a）、基质金属蛋白酶-9（matrix metalloproteinase-9，mmp-9）作为血管源性脑水肿检测的三项指标，以便对患者进行鉴别与诊断、危险分层、预后评估和治疗决策。三项联检的产品在临床上具有重要价值，但国内目前并无检测这三种指标的试剂，不利于血管源性脑水肿的快速诊断。

3、缺氧诱导因子1-α（hypoxia inducible factor-1α，hif- 1α）、血管内皮生长因子- a（vascularendothelial growth factor-a，vegf-a）、基质金属蛋白酶-9（matrixmetalloproteinase-9，mmp-9）在血脑屏障（blood-brain barrier，bbb）的破坏和血管源性脑水肿的形成中起着关键作用。在脑缺血缺氧性损伤中表达最广泛并占功能主导地位的是hif-1α。在常氧状态下，hif- 1α亚基被脯氨酰4-羟化酶（prolyl 4-hydroxylase，phd）和缺氧诱导因子抑制因子（hypoxia inducible factor inhibitor，fih）羟基化，使其对希佩尔林道肿瘤抑制蛋白的结合敏感，并导致e3连接酶的募集，然后使hif-1α亚基被泛素依赖性蛋白酶体降解，失去生理活性。在缺氧状态下，phd和fih 活性受到抑制，使 hif-1α免于被酶解，从而保持稳定。hif-1α数量增加，并进入细胞核与 hif-1β结合，形成异二聚体。这种异二聚体最终与缺氧反应元件结合形成转录复合物，调控转录多种下游基因。benita 等报道 hif-1α调节缺氧时 81 种基因表达，其中包括涉及血管生成、血管渗透性、糖酵解、线粒体功能和细胞存活和凋亡的多种基因。

4、血管内皮生长因子- a（vascularendothelial growth factor-a，vegf-a）在血管内皮的调节中具有双重作用，即功能双向性，在脑缺血性损伤早期，vegf-a通过破坏bbb增加血管通透性，导致血管源性脑水肿，增加颅内压；在脑缺血性损伤后期，vegf-a可以刺激内皮细胞的增殖和迁移，促进新血管的形成，从而形成更有效的侧支循环，挽救缺血半暗带组织，发挥具有神经保护和神经发生作用。

5、基质金属蛋白酶-9（matrix metalloproteinase-9，mmp-9）的细胞来源主要为中性粒细胞、神经胶质细胞、内皮细胞和神经元。在正常生理状态下，mmp参与各种生理过程中细胞外基质的分解，如血管生成、细胞迁移，并且与神经系统中的学习记忆有关。缺血早期，在缺血核心脑组织，浸润的中性粒细胞和胶质细胞释放mmp-9，作用于基底膜成分，降解ⅳ型明胶原、层粘连蛋白和纤粘连蛋白，导致基底膜破坏；还通过降解闭合蛋白、紧密连接蛋白，破坏内皮细胞间紧密连接，使bbb破坏，血管内液体渗漏造成血管源性脑水肿，并增加出血性转化的风险。mmp-9表达增强与多种并发症相关，包括bbb的破坏、血管源性脑水肿、出血性转化、神经元损伤、神经细胞凋亡等。

6、综上，单项生物标志物只能从一个侧面反映部分疾病信息，并不能全面准确地评估脑水肿类型、病理和病理生理变化。一方面，现有的用于血管源性脑水肿的试剂盒大都采用单指标，检测结果不够准确。另一方面，现有的试剂盒一般包括检测卡，检测卡包括壳体和试条，壳体采用塑料材质。这种试剂盒由于采用塑料材质，成本高且不易回收，不环保。还有一方面，现有的试剂盒为了便于加样，通常需要在壳体上开设加样孔，通过加样孔添加待测样本，在反应时间时，整个加样孔暴露在空气中，可能存在样本污染的问题。因此，有必要设计一种新的针对于血管源性脑水肿的多指标定量检测试剂盒。

技术实现思路

1、针对上述存在的技术问题至少之一，本实用新型目的是提供一种用于血管源性脑水肿的多指标定量检测试剂盒。

2、本实用新型的技术方案是：

3、本实用新型的目的在于提供一种用于血管源性脑水肿的多指标定量检测试剂盒，所述的多指标包括hif- 1α、vegf-a、mmp-9三个指标，所述的试剂盒包括壳体和设于所述壳体内的一至三个试条；

4、所述壳体包括上壳体和下壳体，所述上壳体和下壳体构成合页结构，所述试条设于所述下壳体内；

5、所述试条包括底板和顺次搭接在所述底板上的样品垫、结合垫、检测垫和吸收垫；

6、当所述试条为一个时，所述检测垫上间隔设有三条检测线和一条质控线；当所述试条为两个时，其中一个试条的所述检测垫上间隔设有两条检测线和一条质控线、另一个试条的所述检测垫上间隔设有一条检测线和一条质控线；当所述试条为三个时，任一所述试条的所述检测垫上均间隔设有一条检测线和一条质控线；

7、所述下壳体上对应所述样品垫位置开有加样孔。

8、优选地，所述壳体的材质为纸。

9、优选地，所述下壳体上对应所述检测垫位置设有观察窗口，所述上壳体上对应所述观察窗口位置设有用户视窗。

10、优选地，所述观察窗口与所述用户视窗的同一投影面上重合。

11、优选地，所述加样孔的上方还覆盖有滤血膜。

12、优选地，当所述试条为两个或三个时，所有的试条共用一个加样孔。

13、优选地，当所述试条为两个或三个时，所有试条的加样垫或者所有试条的加样垫部分落在所述加样孔在水平面内的投影内。

14、优选地，三条所述检测线分别包被有所述三个指标的特异性捕捉抗体，所述质控线包被有可与对应的特异性捕捉抗体结合的半抗原或抗体，所述结合垫涂设有与所述三个指标一一对应的时间分辨荧光或量子点微球标记的特异性检测抗体涂层。

15、优选地，所述样品垫、结合垫的材质为玻璃纤维或无纺布，所述检测垫的材质为硝酸纤维素膜，所述吸收垫的材质为吸水滤纸，所述底板的材质为pvc。

16、与现有技术相比，本实用新型的优点是：

17、本实用新型的用于血管源性脑水肿的多指标定量检测试剂盒，通过一个荧光免疫层析检测试剂将缺氧诱导因子1-α（hif- 1α）、血管内皮生长因子-a（vegf-a）与基质金属蛋白酶-9(mmp-9)三个指标进行联合检测，三者的优势相互补充，整体材质环保，使用后易回收，合页设计一定程度上避免了样本污染，灵敏度高，特异性高，操作简便、快速、成本低，适用于床边快速定量检测，可以有效地提高血管源性脑水肿检测的准确性。