一种纸基内毒素传感检测方法

本发明涉及分析检测，具体涉及一种纸基内毒素传感检测方法。

背景技术：

1、公开该背景技术部分的信息仅仅旨在增加对本发明的总体背景的理解，而不必然被视为承认或以任何形式暗示该信息构成已经成为本领域一般技术人员所公知的现有技术。

2、临床上在进行静脉滴注大量输液时，如果药液中含有热原，病人会在0.5～1h内出现冷颤、高热、出汗、昏晕、呕吐等症状，高热时体温可达40℃，严重者甚至会休克，这种现象称为热原反应。引起热原反应的主要原因是注射液或输液器中污染的热原所引起的。热原是指注射进入人体或动物体内后，能导致其体温升高的一类物质总称，可分为外源性热原和内源性热原。细菌内毒素是一种最广泛的外源性热原。

3、内毒素是革兰氏阴性菌的菌体中存在的毒性物质的总称，是多种革兰氏阴性菌的细胞壁的一种成分，叫做脂多糖(lps)。脂多糖对宿主是有毒性的，其毒性成分主要为类脂质a。虽然内毒素紧密地嵌入细胞壁中，但也会不断地向周围环境释放内毒素，这种释放发生在正常细胞生长和分裂、细胞的解体和死亡过程中。输注用药品、输注用医疗器械等的细菌内毒素含量过高，若进入人体血液循环，会引起热原反应，严重时会引起播散性血管内凝血、多器官功能障碍综合征、内毒素休克，危及生命。因此，防止输注用药品及器械的热原污染，在临床上是十分重要的。

4、目前内毒素的检测法应用最广泛有鲎试剂(tal)凝胶法、动态浊度法、终点浊度法、动态显色法、终点显色法等。而动态浊度法、终点浊度法、动态显色法、终点显色法有着需要专业仪器和专业人员进行检测的缺点。鲎试剂凝胶法检测操作简单、结果稳定可靠，是内毒素检测的金标准。鲎试剂与内毒素发生凝集反应，通过倒置试管观察溶液是否流动判断内毒素存在与否。然而，这一方法只能实现内毒素的定性或半定量检测，且具有较强的主观性，容易误判。

技术实现思路

1、为了解决现有技术的不足，实现内毒素的定量检测，本发明提供一种纸基内毒素传感检测方法。

2、为了实现上述目的，本发明的技术方案为：

3、本发明的第一方面，提供一种纸基内毒素传感检测方法，其特征在于，根据水分在检测试纸上的扩散能力进行检测内毒素与鲎试剂反应形成的凝胶的含水量，进而确定内毒素的含量；

4、步骤如下：

5、步骤一：将多组已知浓度的内毒素分别与鲎试剂形成混合溶液，进行孵育后，得到待测溶液，静置；

6、步骤二：将检测试纸与待测溶液接触，静置，至水溶液不再扩散为止，得到带有印迹的检测试纸；

7、步骤三：建立水溶液的像素点与待测物内毒素浓度的关系；

8、其中，所述关系还可以为面积或印记距离与待测物内毒素浓度的关系；

9、步骤四：将未知浓度的内毒素重复步骤一、步骤二，并通过步骤三所得到的标准曲线，计算得到未知浓度的内毒素的浓度。

10、本发明的第二方面，提供上述一种纸基内毒素传感检测方法在细菌内毒素检测中的应用，其特征在于，所述应用为：

11、(1)注射用药品、生物制品、医疗器械的细菌内毒素含量的快速检测；

12、(2)药品、生物制品生产过程中内毒素含量的监控；

13、(3)临床血液、体液中内毒素含量的检测，监控水、食品中的内毒素污染等。

14、本发明的有益效果为：

15、(1)本发明的检测方法可广泛应用在注射用药品、生物制品、医疗器械等的细菌内毒素快速检测，药品、生物制品生产过程中内毒素的监控，临床血液、体液中内毒素含量的检测，监控水、食品中的内毒素污染等途径。

16、(2)检测用量少，灵敏度高，选择性高，准确直观；

17、(3)可实现内毒素的定量检测，检测较为客观，不会出现误判的情况；

18、(4)价格低廉、便携实用、操作简单，不需大型仪器设备，无需专门仪器与专业人员，不需复杂制备步骤便可实现对目标物的检测。

技术特征：

1.一种纸基内毒素传感检测方法，其特征在于，根据水分在检测试纸上的扩散能力进行检测内毒素与鲎试剂反应形成的凝胶的含水量，进而确定内毒素的含量；

2.如权利要求1所述一种纸基内毒素传感检测方法，其特征在于，所述步骤一的待测溶液配制后均使用旋涡混合器混合5min备用。

3.如权利要求1所述一种纸基内毒素传感检测方法，其特征在于，所述步骤一的鲎试剂、内毒素配制时的操作用水为细菌内毒素检查用水。

4.如权利要求1所述一种纸基内毒素传感检测方法，其特征在于，所述检测试纸为广泛ph试纸条，试纸条长为60mm，宽为5mm；

5.如权利要求1所述一种纸基内毒素传感检测方法，其特征在于，所述孵育的温度为36-38℃，孵育1h；优选的，孵育温度为37℃。

6.如权利要求1所述一种纸基内毒素传感检测方法，其特征在于，所述步骤一的混合溶液置于检测容器中，所述检测容器为2ml安瓿瓶。

7.如权利要求6所述一种纸基内毒素传感检测方法，其特征在于，所述步骤二中，检测试纸与待测溶液接触的方式为将检测试纸一端插入安瓿瓶液体中；所述静置的时间为1min。

8.如权利要求6所述一种纸基内毒素传感检测方法，其特征在于，所述检测试纸与待测溶液接触的方式还可以为液体在无热源的疏水性基板上反应，将纸条一端置于液体上方流动，进一步的，所述疏水性基板为聚碳酸酯板、聚苯乙烯板、聚甲基丙烯酸甲酯板或pvc板。

9.如权利要求1所述一种纸基内毒素传感检测方法，其特征在于，所述步骤三中的像素点，采用智能手机拍摄检测试纸的图像并采集数据，通过ps软件计算图像上检测试纸的水迹覆盖率；水迹覆盖率采用cr＝pwater/ptotal进行计算，其中pwater是水迹区的像素值，ptotal是检测试纸整体的像素值；像素值是利用adobe photoshop获得的。

10.权利要求1-9所述一种纸基内毒素传感检测方法在细菌内毒素检测中的应用，其特征在于，所述应用为：

技术总结本发明涉及一种纸基内毒素传感检测方法，属于分析检测领域。内毒素可以通过一系列作用使得鲎试剂中凝固蛋白原转化为凝固蛋白形成凝胶，将成胶过程释放出的水含量不同转化为纸基上像素点、流动距离或者面积的差异，可以做到根据液体在检测试纸上的像素点、流动距离或者面积检测内毒素的含量。此种检测方法可广泛应用在注射用药品、生物制品、医疗器械等的细菌内毒素快速检测，药品、生物制品生产过程中内毒素的监控，临床血液、体液中内毒素含量的检测，监控水、食品中的内毒素污染等途径，具有检测用量少、准确直观、操作简单、经济实用、不需要复杂仪器与专业人员的优点。技术研发人员：肖玉鑫,王晓炜,尹雨彤,李金超,蔡旺庭,胡琼政,武文丽受保护的技术使用者：齐鲁工业大学（山东省科学院）技术研发日：技术公布日：2024/7/23