一种抗体与固相介质共价偶联封闭液及其应用的制作方法

本发明属于体外诊断检测，具体地说，是关于一种抗体与固相介质共价偶联封闭液及其在阿尔兹海默症检测中的应用。

背景技术：

1、化学发光免疫检测是当前医学检验诊断领域中最重要的一种检测技术。化学发光主要分为直接化学发光、酶促反应化学发光和电化学发光。在直接化学发光中，依赖反应物中化学结构上特有的发光基团，或在以塑料等材质为基础、内部含有化学发光染料的微球上，直接标记或包被抗原或抗体等生物大分子。化学发光免疫检测具有操作简便、成本低、反应时间短等优势。

2、磁性分离技术是以纳米或微粒级的磁性微粒为载体，通过载体表面特定官能团，将生物大分子偶联并提供的特异的亲和特性。待包被有生物大分子的磁微粒与待测物，及标记了化学发光基团的生物大分子形成夹心复合物后，利用磁吸附将未形成夹心复合物的部分洗脱，并在一定条件下最终使发光基团或发光染料产生光信号的检测技术。

3、随着化学发光检测设备全自动化水平以及检测元件精密度、试剂生产保存工艺的发展，化学发光技术的检测灵敏度有了显著的提升，化学发光技术在现有生物大分子亲和力没有有效提升方法的情况下，已经接近了其检测能力的极限。

4、但是，随着现代医学的不断细化及群众对健康意识的提升和重视，对化学发光检测的灵敏度有了更进一步的提升。伴随药物研发的不断深入，尽早检测出患者的病情并着手治疗是目前许多医生的共同要求，因此在现有生物大分子亲和力无法进一步提升的前提下，如何提高试剂灵敏度成了目前亟需解决的重要问题。

5、在磁微粒包被生物大分子的过程中，对磁微粒进行稳定、全面的封闭，能保证未与生物大分子结合的磁微粒部分与待测物之间不产生非特异性结合，如：静电吸附现象，进而提升检测灵敏度；且在封闭过程中，对生物大分子的活性也不应当产生影响。如何同时做到上述两点，是目前提升稳定性的关键环节。

6、综上，有必要针对现有的磁微粒包被工艺进行探索及条件优化，从而在确保生物大分子反应活性的前提下，提升封闭效果，进而减少非特异性吸附，以达到提升试剂检测灵敏度的效果。

技术实现思路

1、针对现有荧光免疫检测试剂所存在的磁微粒封闭不全面、生物大分子活性受影响的技术缺陷，本申请的发明人致力于对磁微粒的包被工艺进行优化改进，以期提高检测的灵敏度以及准确性。

2、为实现上述目的，本发明的第一个方面，提供了一种抗体与固相介质共价偶联封闭液，所述封闭液的配方如下：

3、三羟甲基氨基甲烷(tris)：0.20～1.00wt％；

4、nacl：0.50～2.00wt％；

5、牛血清白蛋白(bsa)：0.50～3.00wt％；

6、生物防腐剂：0.10～1.00wt％；

7、edta：0.10～1.50wt％；

8、吐温型乳化剂：0.01～0.20wt％；

9、鱼皮明胶：0.10～10.00wt％；

10、酪蛋白(casein-na)：0.05～5.00wt％；

11、生物活性辅料：0.1～10μg/ml；

12、余量为去离子水。

13、根据本发明，所述生物防腐剂为proclin-300。

14、根据本发明，所述吐温型乳化剂为tween-20。

15、根据本发明的优选实施例，所述鱼皮明胶、酪蛋白、以及生物活性辅料的质量比为鱼皮明胶:酪蛋白:生物活性辅料＝1:0.5:1。

16、根据本发明，所述抗体为β-淀粉样蛋白40或β-淀粉样蛋白42。

17、根据一个可选的实施例，所述抗体为β-淀粉样蛋白40，所述生物活性辅料为多肽-bsa偶联物，所述多肽的序列如seq id no.2所示。

18、根据另一个可选的实施例，所述抗体为β-淀粉样蛋白42，所述生物活性辅料为多肽-bsa偶联物，所述多肽的序列如seq id no.1所示。

19、本发明的第二个方面，提供了所述的抗体与固相介质共价偶联封闭液在阿尔兹海默症检测中的应用。

20、进一步的，所述应用是用于包被抗体的磁微粒的封闭。

21、优选的，所述抗体为β-淀粉样蛋白40或β-淀粉样蛋白42。

22、本发明具有以下有益效果：

23、1、本发明的抗体与固相介质共价偶联封闭液克服了磁微粒封闭不全面、生物大分子活性受影响的技术缺陷，从而保证了磁微粒未与生物大分子偶联处尽可能封闭完全，且包被于磁微粒上的生物原料活性受较小或不受封闭影响。

24、2、本发明的封闭液用于封闭包被有抗原或抗体等生物大分子的磁微粒，能有效减少磁微粒在免疫反应过程中的非特异性吸附，从而提高磁微粒化学发光测定试剂的灵敏度。

技术特征：

1.一种抗体与固相介质共价偶联封闭液，其特征在于，所述封闭液的配方如下：

2.根据权利要求1所述的封闭液，其特征在于，所述生物防腐剂为proclin-300。

3.根据权利要求1所述的封闭液，其特征在于，所述吐温型乳化剂为tween-20。

4.根据权利要求1所述的封闭液，其特征在于，所述鱼皮明胶、酪蛋白、以及生物活性辅料的质量比为鱼皮明胶:酪蛋白:生物活性辅料＝1:0.5:1。

5.根据权利要求1所述的封闭液，其特征在于，所述抗体为β-淀粉样蛋白40或β-淀粉样蛋白42。

6.根据权利要求5所述的封闭液，其特征在于，所述抗体为β-淀粉样蛋白40，所述生物活性辅料为多肽-bsa偶联物，所述多肽的序列如seq id no.2所示。

7.根据权利要求5所述的封闭液，其特征在于，所述抗体为β-淀粉样蛋白42，所述生物活性辅料为多肽-bsa偶联物，所述多肽的序列如seq id no.1所示。

8.权利要求1～7中任一项所述的抗体与固相介质共价偶联封闭液在阿尔兹海默症检测中的应用。

9.根据权利要求8所述的应用，其特征在于，用于包被抗体的磁微粒的封闭。

10.根据权利要求9所述的应用，其特征在于，所述抗体为β-淀粉样蛋白40或β-淀粉样蛋白42。

技术总结本发明公开了一种抗体与固相介质共价偶联封闭液，所述封闭液的配方为：Tris 0.20～1.00％，NaCl 0.50～2.00％，BSA 0.50～3.00％，生物防腐剂0.10～1.00％，EDTA 0.10～1.50％，吐温型乳化剂0.01～0.20％，鱼皮明胶0.10～10.00％，Casein‑Na 0.05～5.00％，生物活性辅料0.1～10μg/mL，余量为去离子水。所述的抗体与固相介质共价偶联封闭液在阿尔兹海默症检测中的应用。本发明的封闭液克服了磁微粒封闭不全面、生物大分子活性受影响的技术缺陷，从而保证了磁微粒未与生物大分子偶联处尽可能封闭完全，且包被于磁微粒上的生物原料活性受较小或不受封闭影响，并且能有效减少磁微粒在免疫反应过程中的非特异性吸附，从而提高磁微粒化学发光测定试剂的灵敏度。技术研发人员：吴昊琦,曹灏,唐诗语,段学军,倪海欧,范贵良,张清连受保护的技术使用者：上海硅羿生物技术有限公司技术研发日：技术公布日：2024/7/25