一种用于肺腺癌预后评估的血清蛋白标志物、应用和相应分析方法

本发明属于生物医学检测，具体设计一种用于肺腺癌预后评估的血清蛋白标志物、应用和相应分析方法。

背景技术：

1、肺癌发病率及死亡率一直稳居所有恶性肿瘤之首，其中超过2/3病理类型为肺腺癌，发病率逐年增加，尤其是在女性，非吸烟患者和年轻人中。影响肺腺癌预后的因素包括肿瘤分期，早期患者通过外科手术可以有效控制肿瘤的复发、转移。而晚期患者常常需要接受化疗、放疗、分子靶向治疗及免疫治疗，其中肿瘤耐药、微环境中免疫细胞耗竭等决定了晚期患者的预后。因此，探索肺腺癌预后评估的分子标志物，具有重要的潜在临床价值。

2、在肿瘤发展的中晚期，随着肿瘤原发灶的逐渐生长，处于肿瘤中心部位的细胞会能量应激状态。肿瘤细胞在能量应激状态下通常会经历以下变化：增强其代谢活性，包括增加糖酵解和脂肪酸合成等过程，以满足其对能量和生物合成物的需求。增强其抗凋亡能力，抑制凋亡信号通路，增加生存能力。分泌血管生成因子，促进新血管生成，从而为肿瘤提供更多的营养和氧气。增强其侵袭和转移的能力，通过改变细胞外基质附着和分解、上皮间质转化等方式，增加肿瘤的浸润和转移能力。调节免疫应答来逃避免疫系统的攻击，例如增加免疫抑制因子的分泌，抑制免疫细胞的活性。总的来说，能量应激状态下肿瘤细胞的变化通常会使肿瘤更具侵略性和耐受性，从而增加治疗的难度和风险。因此，对于肿瘤细胞在能量应激状态下的生物学特性的深入研究，对于制定更有效的肿瘤治疗策略具有重要意义。

3、外泌体（exosomes）是一种能被机体内大多数细胞分泌，直径在30-100nm的微小膜。近年来相当数量研究显示外泌体是肿瘤与微环境细胞间重要的信息传递媒介之一，微环境细胞来源的外泌体中包裹的rna、蛋白质、细胞因子等通过细胞间的交互作用，将不同表型传递给邻近细胞，促进肿瘤发展。血清标志物检测作为一种高效、微创、便捷的检测手法在临床广泛应用。通过对血清蛋白标志物的研究并与现有临床应用标志物之间的联合使用有利于深化高灵敏度的肺腺癌特异性标志物及新的诊断系统的开发，是实现肺腺癌早期筛查和肺腺癌患者获得及时治疗的关键，对肺腺癌的防治和进一步提高肺腺癌的治疗效果将具有重要意义。

技术实现思路

1、发明目的：本发明目的在于提供一种用于肺腺癌预后评估的血清蛋白标志物，同时提供检测血清蛋白标志物的试剂的应用、试剂盒和分析方法是本发明的另一发明目的。

2、基于上述目的，本发明采取以下技术方案：

3、一种用于肺腺癌预后评估的血清蛋白标志物，所述血清蛋白标志物为肺腺癌肿瘤分泌外泌体中包裹的akr1c3蛋白。

4、用于检测所述血清蛋白标志物的试剂在制备用于肺腺癌预后评估的产品中的应用。

5、用于肺腺癌预后评估的产品为试剂盒。

6、所述试剂为检测所述血清蛋白标志物的抗体。

7、所述试剂盒包括用于检测所述血清蛋白标志物的试剂。

8、所述抗原为akr1c3蛋白。

9、所述抗体为抗-akr1c3；抗体被包被于固相载体上。

10、所述固相载体的材质为聚氯乙烯、聚苯乙烯、聚丙酰胺或纤维素；试剂盒还包括封闭液、样本稀释液、第二抗体、第二抗体稀释液、清洗液、显色液或终止液中的一种或两种以上的组合。

11、使用用于胰肺腺癌预后评估的试剂盒的分析方法 ，通过计算logistics回归模型，构建血清蛋白标志物的并联联合检测模型，计算出联合诊断结果。

12、使用检测用于肺腺癌预后评估的血清蛋白标志物的试剂的检测方法，包括以下步骤：

13、1)对akr1c3抗体进行包被、封闭及清洗；

14、2)再与稀释后的待测血清进行一抗孵育，清洗，再进行二抗孵育，清洗；

15、3)显色系统显色后终止反应，测定吸光度值；

16、4)将吸光度值代入以下公式，计算预测概率p值，

17、pre＝1/(1+exp(-(11.813* odakr1c3-13.593)))

18、式中，odakr1c3为血清蛋白标志物的od值减去空白对照后的吸光度值。

19、当p值＞于0 .5时，初步判定为中晚期肺腺癌样品；当p值≤0 .5时，初步判定为早中期肺腺癌样品。

20、与现有技术相比，本发明具有以下有益效果：

21、1)本发明通过使用人肺腺癌细胞系的外泌体来筛选肺腺癌相关的蛋白标志物，通过能量应激状态下的肺腺癌细胞系和正常状态下的肺腺癌细胞系分泌的外泌体的蛋白组学分析，筛选出与肺腺癌相关的蛋白标志物akr1c3，并在人血清层面进行验证。本发明公开了肿瘤分泌的外泌体蛋白是一类可靠的与肺腺癌预后相关分子靶标，可以通过检测患者血清akr1c3表达水平用于肺癌预后评估，指导临床制定个体化化疗方案，提高疗效。；

22、2）设计并优化出可用于肺腺癌预后评估的血清蛋白标志物，将优化出的抗原应用于elisa试剂盒上，通过间接酶联免疫吸附实验方法(enzyme linked immunosorbentassay，elisa)进行血清抗原检测，能够较准确地鉴别早期和中晚期肺腺癌患者，检出的准确性显著高于其他标志物，操作方便、快捷、有效，可用于临床上肺腺癌的免疫学诊断。

技术特征：

1.一种用于肺腺癌预后评估的血清蛋白标志物，其特征在于，所述血清蛋白标志物为akr1c3。

2.如权利要求1所述的用于肺腺癌预后评估的血清蛋白标志物，其特征在于，所述血清蛋白标志物为肿瘤分泌外泌体中包裹的akr1c3。

3.用于检测权利要求1或2所述血清蛋白标志物的试剂在制备用于肺腺癌预后评产品中的应用。

4.如权利要求3所述的应用，其特征在于，用于肺腺癌预后评估产品为试剂盒。

5.如权利要求4所述的应用，其特征在于，所述试剂盒包括用于检测权利要求1或2所述血清蛋白标志物的试剂。

6.如权利要求5所述的应用，其特征在于，所述试剂为检测所述血清蛋白标志物的抗体。

7.如权利要求6所述的应用，其特征在于，所述蛋白为抗-akr1c3。

8.如权利要求7所述的应用，其特征在于，所述抗体为抗-akr1c3；抗体被包被于固相载体上。

9.如权利要求8所述的应用，其特征在于，所述固相载体的材质为聚氯乙烯、聚苯乙烯、聚丙酰胺或纤维素；试剂盒还包括封闭液、样本稀释液、第二抗体、第二抗体稀释液、清洗液、显色液或终止液中的一种或两种以上的组合。

10.使用如权利要求4-9任一所述的用于肺腺癌预后评估的试剂盒的分析方法，其特征在于，通过计算logistics回归模型，构建血清蛋白标志物并联合检测模型，计算出联合诊断结果。

技术总结本发明公开了一种用于肺腺癌预后评估的血清蛋白标志物，所述血清蛋白标志物为肿瘤分泌外泌体中包含的AKR1C3蛋白。提供检测血清蛋白标志物的试剂的应用、试剂盒和分析方法。本发明筛选肺腺癌肿瘤细胞分泌的外泌体中所包含的蛋白质，通过测定这些指标在肺腺癌早期和晚期患者血清中的表达情况，能够实现对肺腺癌患者预后的评估，指导临床制定个体化治疗方案，提高疗效；设计并优化出的蛋白应用于ELISA试剂盒上，通过间接酶联吸附实验方法进行血清蛋白检测，能够较为准确的预测肺腺癌患者的预后。技术研发人员：尹荣,刘桐言,董国璋,许林,王洁受保护的技术使用者：南京医科大学技术研发日：技术公布日：2024/8/1