一种用于检测胃癌新型标志物SDF4的免疫层析检测卡及其制备方法与流程

本发明属于免疫层析检测卡制备，具体涉及一种用于检测胃癌新型标志物sdf4的免疫层析检测卡及其制备方法。

背景技术：

1、在医学领域，胃癌作为一种常见的消化系统恶性肿瘤，其早期发现与诊断对于提高患者生存率至关重要。然而，胃癌的早期症状并不明显，传统的诊断方法如胃镜和组织活检虽然准确，但存在侵入性强、患者接受度低等问题。近年来，随着分子生物学和免疫学的快速发展，肿瘤标志物检测成为了肿瘤早期诊断和筛查的重要手段。其中，免疫层析技术以其快速、简便、特异性好等优点，在肿瘤标志物检测领域得到了广泛应用。免疫层析技术通过抗原-抗体特异性结合的原理，将待测物质与相应的抗体结合，形成抗原-抗体复合物，然后通过层析作用将复合物与未结合的抗原或抗体分离，从而达到检测目的。

2、sdf4作为一种新型的胃癌标志物，近年来在胃癌早期诊断和筛查中受到了广泛关注。sdf4是一种趋化因子，通过与其受体cxcr4相互作用，参与胃癌细胞的增殖、迁移和侵袭等生物学过程。研究发现，sdf4在胃癌患者血清中的表达水平显著高于健康人群，且与胃癌的恶性程度、淋巴结转移等临床病理特征密切相关。因此，sdf4作为一种潜在的胃癌标志物，具有较高的临床应用价值。

3、然而，目前对于sdf4的检测方法主要依赖于传统的生化检测手段，如酶联免疫吸附试验等，这些方法虽然准确可靠，但操作繁琐、耗时较长，且需要专业的设备和人员操作，难以满足大规模筛查和早期诊断的需求。因此，开发一种基于免疫层析技术的sdf4检测卡，具有重要的研究意义和实际应用价值。

技术实现思路

1、本发明的目的在于提供一种用于检测胃癌新型标志物sdf4的免疫层析检测卡及其制备方法，用于解决现有技术中检测胃癌标志物sdf4操作繁琐、耗时长和稳定性差的技术问题。

2、为了实现上述目的，本发明采用了如下技术方案：

3、本发明提供一种用于检测胃癌新型标志物sdf4的免疫层析检测卡，所述免疫层析检测卡包括试纸条和粘性底板，试纸条包括样品垫、结合垫、反应膜和吸水垫，结合垫上包被有荧光微球-抗体，荧光微球-抗体包含荧光微球-抗sdf4第二单克隆抗体和荧光微球-鸡igg抗体，反应膜上设有检测线和质控线，检测线上包被有抗sdf4第一单克隆抗体，质控线上包被有羊抗鸡igg抗体。

4、作为优选，所述荧光微球-抗体的制备方法，包括以下步骤：

5、q1：将聚苯乙烯荧光微球加入至磷酸缓冲液中，搅拌混合得到悬浊液1，将n-羟基丁二酰亚胺和1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺分别溶于蒸馏水中，得到n-羟基丁二酰亚胺溶液和1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺溶液，向悬浊液1中依次加入两种溶液，搅拌反应，反应结束后，离心，然后加入磷酸缓冲液，分散均匀，得到悬浊液2；

6、q2：将抗体加入至悬浊液2中，搅拌反应，反应结束后，加入牛血清白蛋白进行封闭反应，封闭反应结束后，离心洗涤，得到荧光微球-抗体。

7、作为优选，所述q1中，聚苯乙烯荧光微球的粒径为180-220nm，且其表面经过羧基化修饰，磷酸缓冲液的ph=7.2，浓度为20mm，聚苯乙烯荧光微球、磷酸缓冲液、n-羟基丁二酰亚胺和1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺的用量比为（1-2）mg：（1-2）ml：（4-8）mg：（4-8）mg，n-羟基丁二酰亚胺溶液的浓度为50mg/ml，1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺溶液的浓度为50mg/ml，搅拌反应温度为4-30℃，反应时间为30-45min。

8、作为优选，所述q2中，抗体为抗sdf4第二单克隆抗体或鸡igg抗体，抗体与聚苯乙烯荧光微球的质量比为（0.01-0.02）mg：（1-2）mg，牛血清白蛋白的浓度为1vt%，封闭反应时间为1-2h，离心洗涤温度为2-4℃，洗涤次数为1-2次。

9、作为优选，所述的用于检测胃癌新型标志物sdf4的免疫层析检测卡的制备方法，包括以下步骤：

10、步骤（1）：将玻璃纤维素膜剪切成条带，放入含有吐温-20的磷酸缓冲液中进行浸泡，浸泡完成后，烘干，得到样品垫；

11、步骤（2）：将玻璃纤维素膜剪切成条带，浸泡在结合垫处理液中，浸泡结束后，烘干，然后将制备得到的荧光微球-抗体喷涂在玻璃纤维素膜表面，烘干，得到结合垫；

12、步骤（3）：将硝酸纤维素膜剪切成条带，并将条带粘贴于粘性底板的中间，用划膜仪划上抗sdf4第一单克隆抗体作为检测线，划上羊抗鸡igg抗体作为质控线，烘干，得到反应膜；

13、步骤（4）：将样品垫、结合垫和吸水垫分别粘贴在反应膜两侧，然后将其进行裁切后，安装于卡壳中，得到用于检测胃癌新型标志物sdf4的免疫层析检测卡。

14、作为优选，所述步骤（1）中，条带的规格为1.5cm×30cm，磷酸缓冲液的ph=7.2，浓度为20mm，吐温-20的重量份数为0.1wt%，浸泡时间为10-12min，烘干温度为35-40℃。

15、作为优选，所述步骤（2）中，条带的规格为1cm×30cm，结合垫处理液的组成为：0.05-0.15%牛血清白蛋白，1-3%蔗糖，0.05-0.015%吐温-20，96.4-99.2%蒸馏水，浸泡时间为10-12min，烘干温度为35-40℃，荧光微球-抗体中荧光微球-抗sdf4第二单克隆抗体和荧光微球-鸡igg抗体的质量比为（4-6）：1，烘干温度为35-40℃。

16、作为优选，所述步骤（3）中，条带的规格为2.5cm×30cm，烘干温度为35-40℃。

17、作为优选，所述步骤（4）中，各组分垫间距为1.5mm，裁切后的宽度为3.5mm。

18、综上所述，由于采用了上述技术方案，本发明的有益效果是：

19、本发明首先将聚苯乙烯荧光微球与抗体结合，通过化学反应形成了高特异性的抗原-抗体结合，确保了对sdf4的高灵敏度检测，荧光微球内部的聚集诱导发光分子在聚集状态下发出强烈的荧光，增加了信号强度，从而使得检测结果更加敏感和准确，且在制备过程中加入的牛血清白蛋白封闭未结合的位点，避免了非特异性结合的发生，提高了检测卡的稳定性和准确性，使试纸条在储存和使用过程中保持良好的性能，不易受到外界环境因素的影响，同时，样品垫、结合垫、反应膜和吸水垫通过层叠的方式进行排列，利用层析作用使抗原-抗体复合物在试纸条上形成检测线和质控线，层析作用的存在使得检测过程更加快速和高效，从而使用于检测胃癌新型标志物sdf4的免疫层析检测卡具有稳定性、准确性和快捷性。

20、附图说明

21、为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图做简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本发明的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。

22、图1是本发明用于检测胃癌新型标志物sdf4的免疫层析检测卡的示意图；

23、图2是利用实施例2制备得到的免疫层析检测卡对胃癌患者和正常人的血清样本中sdf4浓度的测量结果图。