一种植物外泌体样纳米颗粒及其提取方法

本发明涉及细胞生物学，尤其涉及一种植物外泌体样纳米颗粒及其提取方法。

背景技术：

1、植物中的外泌体样纳米颗粒（ exosome-like nanoparticles，elns）是由植物细胞释放的纳米级囊泡结构，与动物的外泌体具有类似的超微结构，但其脂质、蛋白质及核酸等化学成分具有显著差异，并具有独特的生物学功能，具有广阔的应用前景。

2、elns与外泌体结构相似，且均含有蛋白质、脂质和rna成分，可以进行物种间调节，对动物细胞的生长发育起作用。越来越多的研究表明植物来源的药品中的有效成分含有外泌体样纳米颗粒。

3、目前针对植物外泌体样纳米颗粒提取的金标准依然是破壁后超速离心。但是，由于淫羊藿的叶片呈革质，汁液较少，无法和其他植物来源的外泌体样颗粒一样通过离心汁液的方法进行提取。因此，目前仍需要一种成熟的针对淫羊藿外泌体样纳米颗粒的提取方法。

技术实现思路

1、本发明的目的在于提供一种植物外泌体样纳米颗粒及其提取方法，该方法可应用于提取淫羊藿外泌体样纳米颗粒，并且产率和纯度较高，一次提取可制备大量淫羊藿外泌体样纳米颗粒。

2、为了实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案：

3、本发明提供了一种植物外泌体样纳米颗粒的提取方法，包括如下步骤：

4、（1）将植物茎叶段浸入pbs溶液中，破壁、过滤，得滤液；

5、（2）将滤液低速离心后，取上清微孔滤膜过滤，取滤液超速离心，收集沉淀；

6、（3）将步骤（2）的沉淀使用pbs溶液重悬，超速离心，收集沉淀；沉淀再次pbs重悬后微孔滤膜过滤，弃上清，得到植物外泌体样纳米颗粒。

7、优选的，步骤（1）中所述植物为淫羊藿。

8、优选的，步骤（1）中过滤使用的是100~200目尼龙滤网。

9、优选的，步骤（1）、步骤（3）中所述pbs溶液由2.0 mm kh2po4、137 mm nacl、10.0 mmna2hpo4、2.7 mm kcl组成，pbs 溶液的ph为7.4。

10、优选的，步骤（2）中低速离心的方法为：

11、第一次离心：4℃下，1000g~1500g离心力离心10~15min；

12、第二次离心：4℃下，2500g~3000g离心力离心10~25min；

13、第三次离心：4℃下，9500g~10000g离心力离心25~35min。

14、优选的，步骤（2）中微孔滤膜的尺寸为0.40~0.50μm。

15、优选的，步骤（2）中超速离心的离心力为100000g~120000g，温度为3~5℃，离心时间为50~80min。

16、优选的，步骤（3）中超速离心的离心力为100000g~120000g，温度为3~5℃，离心时间为50~80min。

17、优选的，步骤（3）中微孔滤膜的尺寸为0.20~0.25μm。

18、本发明还提供了一种上所述植物外泌体样纳米颗粒的提取方法提取的植物外泌体样纳米颗粒。

19、本发明所述的植物外泌体样纳米颗粒的提取方法与现有技术相比的有益效果为：

20、本发明将植物茎叶破壁后通过过滤、低速离心、微孔滤膜过滤、超速离心、重悬、超速离心、重悬、微孔滤膜过滤分离得到植物外泌体样纳米颗粒。采用本发明植物外泌体样纳米颗粒的提取方法提取淫羊藿外泌体样纳米颗粒，提取过程使用的试剂种类单一，仪器数量少，无需大量的细胞培养液即可获得尺寸在130nm左右的淫羊藿外泌体样纳米颗粒。并且淫羊藿外泌体样纳米颗粒的产率和纯度均较高，从150g淫羊藿茎叶中约可提取出5×1012个外泌体样纳米颗粒，且粒径分布均匀，集中于130nm，有利于后续生产或研究。

技术特征：

1.一种植物外泌体样纳米颗粒的提取方法，其特征在于，包括如下步骤：

2.根据权利要求1所述植物外泌体样纳米颗粒的提取方法，其特征在于，步骤（1）中所述植物为淫羊藿。

3.根据权利要求1所述植物外泌体样纳米颗粒的提取方法，其特征在于，步骤（1）中过滤使用的是100~200目尼龙滤网。

4.根据权利要求1所述植物外泌体样纳米颗粒的提取方法，其特征在于，步骤（1）、步骤（3）中所述pbs溶液由2.0 mm kh2po4、137 mm nacl、10.0 mm na2hpo4、2.7 mm kcl组成，pbs溶液的ph为7.4。

5.根据权利要求1所述植物外泌体样纳米颗粒的提取方法，其特征在于，步骤（2）中低速离心的方法为：

6.根据权利要求1所述植物外泌体样纳米颗粒的提取方法，其特征在于，步骤（2）中微孔滤膜的尺寸为0.40~0.50μm。

7.根据权利要求1所述植物外泌体样纳米颗粒的提取方法，其特征在于，步骤（2）中超速离心的离心力为100000g~120000g，温度为3~5℃，离心时间为50~80min。

8.根据权利要求1所述植物外泌体样纳米颗粒的提取方法，其特征在于，步骤（3）中超速离心的离心力为100000g~120000g，温度为3~5℃，离心时间为50~80min。

9.根据权利要求1所述植物外泌体样纳米颗粒的提取方法，其特征在于，步骤（3）中微孔滤膜的尺寸为0.20~0.25μm。

10.一种权利要求1~7任一项所述植物外泌体样纳米颗粒的提取方法提取的植物外泌体样纳米颗粒。

技术总结本发明提供了一种植物外泌体样纳米颗粒及其提取方法，属于细胞生物学技术领域。本发明将植物茎叶破壁后通过过滤、低速离心、微孔滤膜过滤、超速离心、重悬、超速离心、重悬、微孔滤膜过滤分离得到植物外泌体样纳米颗粒。采用本发明植物外泌体样纳米颗粒的提取方法提取淫羊藿外泌体样纳米颗粒，提取过程使用的试剂种类单一，仪器数量少，无需大量的细胞培养液即可获得尺寸在130nm左右的淫羊藿外泌体样纳米颗粒。并且淫羊藿外泌体样纳米颗粒的产率和纯度均较高，从150g淫羊藿茎叶中约可提取出5×10<supgt;12</supgt;个外泌体样纳米颗粒，且粒径分布均匀，集中于130nm，有利于后续生产或研究。技术研发人员：周长春,韩睿盈,白丁,郭永文,高灿宇,范琳林,秦瑜祥,李思婕,周炜凯,赵骏宇,孙建勋,李正勇,樊渝江受保护的技术使用者：四川大学技术研发日：技术公布日：2024/8/16