一种MF59佐剂的制备方法与流程

本发明属于水包油乳液佐剂生产，具体涉及一种mf59佐剂的制备方法。

背景技术：

1、佐剂作为一类添加在疫苗中的免疫调节剂，相比只使用抗原，当其先于抗原或与抗原混合注入机体后，能极大增强疫苗的免疫应答水平或者改变免疫反应的类型，尤其对于婴儿、老年人和免疫功能低下的人群；系统还能减少单剂疫苗所需抗原的剂量，对于应对疾病大流行，改善全球疫苗供应具有重要意义。

2、20世纪20年代，铝盐被发现具有增强机体对白喉和破伤风类毒素免疫应答的佐剂作用，这是佐剂研发的一个里程碑，明矾〔kal(so4)2·12h2o〕也成为第一个获批的人用疫苗佐剂。而对于一些重组亚单位疫苗，即使在铝盐佐剂存在的情况下，也表现出较弱的免疫原性。因此开发新型佐剂以提高疫苗效力刻不容缓。近年来，随着人们对免疫系统的研究不断深入，各种新型佐剂也不断被开发，其中水包油乳佐剂最早应用于人体，且大量的临床前试验及临床研究证明了水包油乳佐剂在节约抗原剂量、增强免疫应答及对异源病原体交叉保护方面的显著作用，同时也具有良好的安全性。

3、mf59佐剂是一种水包油乳剂，1997年mf59作为佐剂的三价流感疫苗fluad在欧洲获批，是继铝佐剂后第一个被列入人用新型疫苗的佐剂。mf59佐剂可诱导产生比铝佐剂更强的体液免疫反应，免疫原性更优。

4、mf59佐剂以角鲨烯为油相，两种非离子表面活性剂聚山梨酯80(tween80)和三油酸山梨坦(span85)为乳化剂分散于柠檬酸盐缓冲液中形成的水包油乳剂型佐剂，颗粒直径约为160nm，已广泛应用于流感、乙肝、结核病、疱疹病毒疫苗及肿瘤疫苗的制备。

5、对mf59而言，平均粒径在160nm(mf59)左右效果较佳，粒径过大及过小效果都欠佳。此外，小颗粒浓度(如＜100nm)及大颗粒浓度(如＞1.2μm)过高均影响最后的药效且带来副作用危害。因此，除对平均粒径控制外，“过大”，“过小”颗粒浓度控制也非常重要。

技术实现思路

1、本发明的目的在于提供一种mf59佐剂的制备方法，以解决mf59佐剂粒径过大和粒径分布宽的问题。

2、本发明的目的可以通过以下技术方案实现：

3、本发明提供一种mf59佐剂的制备方法，包括以下步骤：

4、s1、将聚山梨酯80和三油酸山梨坦混合后加入d-葡萄糖溶液，完全分散均匀混合作为d相，

5、s2、在加热搅拌条件下将角鲨烯滴加入d相形成o/d相；

6、s3、将o/d相用柠檬酸钠缓冲液稀释得到o/w乳液；

7、s4、将o/w乳液加入高压均质机中，设置高压均质机的流速和压力进行均质；

8、s5、o/w乳液进行过滤和辐照灭菌后得到mf59佐剂。

9、进一步地，所述d-葡萄糖溶液的质量浓度为40wt％。

10、进一步地，所述d相中聚山梨酯80、三油酸山梨坦和d-葡萄糖溶液体积比为1：1：2.5-4，聚山梨酯80和三油酸山梨坦组合的hlb值较大，d-葡萄糖可降低浊点，使表面活性剂的亲水亲油平衡达到最佳区间，形成稳定的界面膜，提高乳液稳定性。

11、进一步地，所述o/d相中角鲨烯的体积占比为58.9％-65.5％。

12、进一步地，所述柠檬酸钠缓冲液的浓度为10nmol/l。

13、进一步地，所述o/w乳液中柠檬酸钠缓冲液的体积占比为92.70％-93.45％。

14、进一步地，所述加热搅拌的温度为40-60℃，乳化温度会直接影响相转变和乳液的形成，过高的温度不利于乳液的稳定性。

15、进一步地，所述o/w乳液的平均粒径大小为180-210nm。

16、进一步地，所述高压均质机的压力为200bar，流速为300m/s。

17、进一步地，所述mf59佐剂的平均粒径为150-170nm。

18、本发明的有益效果：

19、本发明中采用d相乳化法和高压均质法结合制备mf59佐剂，不同于常规使用的高能乳化法，d相乳化法属于低能乳化法，在明显降低能耗的同时可得到粒径小和分布窄的乳液颗粒。将d相乳化法中油、水、表面活性剂和多元醇组成体系中的多元醇用d-葡萄糖代替，可降低表面活性剂聚山梨酯80的浊点，增强疏水性，形成稳定的界面膜，避免了由于分子的热运动引起的颗粒聚集，提高乳液的稳定性，且d-葡萄糖对于人体无不良影响，存在于佐剂中注射入人体不会造成副作用。

技术特征：

1.一种mf59佐剂的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

2.根据权利要求1所述的一种mf59佐剂的制备方法，其特征在于，所述d-葡萄糖溶液的质量浓度为40wt％。

3.根据权利要求1所述的一种mf59佐剂的制备方法，其特征在于，所述d相中聚山梨酯80、三油酸山梨坦和d-葡萄糖溶液体积比为1：1：2.5-4。

4.根据权利要求1所述的一种mf59佐剂的制备方法，其特征在于，所述角鲨烯在o/d相中的体积占比为58.9％-65.5％。

5.根据权利要求1所述的一种mf59佐剂的制备方法，其特征在于，所述柠檬酸钠缓冲液的浓度为10nmol/l。

6.根据权利要求1所述的一种mf59佐剂的制备方法，其特征在于，所述o/w乳液中柠檬酸钠缓冲液的体积占比为92.70％-93.45％。

7.根据权利要求1所述的一种mf59佐剂的制备方法，其特征在于，所述加热搅拌的温度为40-60℃。

8.根据权利要求1所述的一种mf59佐剂的制备方法，其特征在于，所述o/w乳液的平均粒径大小为180-210nm。

9.根据权利要求1所述的一种mf59佐剂的制备方法，其特征在于，所述高压均质机的压力为200bar，流速为300m/s。

10.根据权利要求1所述的一种mf59佐剂的制备方法，其特征在于，所述mf59佐剂的平均粒径为150-170nm。

技术总结本发明公开了一种MF59佐剂的制备方法，属于佐剂生产技术领域，采用D相乳化技术形成水、角鲨烯、表面活性剂和D‑葡萄糖四组分体系的O/W乳液，并采用高压均质机进一步处理得到粒径分布均匀的MF59佐剂。采用D相乳化法可降低乳化能耗，且容易制备粒径小分布窄的乳液颗粒，以聚山梨酯80和三油酸山梨坦作为乳液的活性剂，添加D‑葡萄糖可降低活性剂浊点，提高疏水性，使角鲨烯和水的界面形成稳定的界面膜，避免由于分子的热运动引起的颗粒聚集，提高佐剂的稳定性。技术研发人员：雍金贵,刘宗文,刘奇,高恩受保护的技术使用者：安徽瑞拜药业有限公司技术研发日：技术公布日：2024/9/26