肝硬化中S100A8/A9诱导NK细胞产生IFNγ的应用

本发明属于生物医药领域，具体涉及一种s100a8/a9在诱导nk细胞产生ifnγ作为靶点在肝硬化中的应用。

背景技术：

1、nk细胞是一种异质性的先天性淋巴细胞，由表型或细胞因子分泌模式不同的亚群组成；根据nk细胞表面分化簇cd56的表达水平分为2个主要亚群。cd56bright nk细胞和cd56dim nk细胞。其中cd56bright nk细胞主要存在于次级淋巴组织中，受刺激后产生干扰素γ(ifn-γ)、肿瘤坏死因子α(tnf-α)、gm-csf、白细胞介素(il)-10和il-13等细胞因子，从而发挥免疫调节功能。虽然cd56bright nk细胞的细胞毒性较低，但在炎症条件下这种作用会增强。nk细胞过度激活或功能障碍与各种炎症性疾病的发病机制有关。然而，根据nk细胞亚群、微环境、疾病类型和发育阶段的不同，nk细胞在这些疾病中既有保护功能，也有致病功能。

2、肝脏是人体最重要的代谢器官。肝硬化是全球成年人常见死因。由于初始阶段没有无症状，很多患者并没有得到诊断，实际患病率可能高于报告的患病率，因此肝硬化的患病率很难评估。患有肝硬化的患者通常需住院治疗，生活质量下降，死亡率较高。目前关于nk细胞在肝硬化中的作用的研究表明，nk细胞能够产生细胞因子，如ifn-γ和tnf-α等；在慢性肝硬化的肝脏中，这些细胞因子可能有助于调节免疫系统的平衡，但同时由于循环的促炎性细胞因子可以由血液循环至全身各处，为糖尿病等并发症的出现埋下隐患。其中ifn-γ被报道可以诱导发生程序性坏死和凋亡等细胞死亡形式。总体而言，尽管nk细胞在肝硬化中的确切作用仍需更深入的研究和理解，但它们作为重要的免疫细胞类型，可能对调节免疫应答以及影响肝脏以及全身各器官的损伤和修复过程发挥重要作用。

3、肝硬化患者中约有30％患有糖尿病(dm)，这是因为肝脏在葡萄糖稳态中起到了至关重要的作用。乙型肝炎病毒(hbv)感染患者随后发展为糖尿病或代谢综合征的患者，患肝硬化和失代偿的几率更高。糖尿病与发展肝细胞癌(hcc)的风险增加相关。由于肝硬化诊断及糖尿病控制不佳，肝硬化患者的死亡率和肝硬化并发症显著增高。理解肝硬化与糖尿病之间的关系有助于改善管理肝硬化时的糖尿病控制。

4、ifn-γ水平在肝硬化发生发展过程以及并发糖尿病的过程中发挥了重要作用；ifn-γ增加的危害是：ifn-γ可以诱导某些细胞的程序性坏死，引起损伤。目前，抑制ifn-γ的方式有阻断ifn-γ的结合受体或者使用ifn-γ中和抗体等。

5、s100a8/a9是一种蛋白复合物，在炎症期间，s100a8/a9被主动释放，通过刺激白细胞募集和诱导细胞因子分泌在调节炎症反应中发挥关键作用。s100a8/a9是炎症相关疾病治疗反应的预测指标。在肝硬化中，高表达的s100a8/9可能与促进肝癌的形成有关，肝癌阶段增加的含量，可能与肿瘤生成和肿瘤转移相关。但是，肝硬化的原因很多，例如病毒性肝炎、酒精性肝病、非酒精性脂肪性肝病、长期胆汁淤积、药物或毒物、肝脏血液循环障碍、遗传和代谢性疾病、免疫紊乱和寄生虫感染等，不同原因的肝硬化中s100a8/a9表达水平也不尽相同。因此，无法得知s100a8/a9与肝硬化的具体关联。且，即使，某个指标与肝硬化有关联性，但是调节该指标含量，也并不必然导致能缓解肝硬化。例如：纤连蛋白虽然与肝纤维化的程度相关，但其敏感性和特异性均不高，并且对其调节并不能引起原发病肝硬化的缓解。进一步而言，s100a8/a9目前仅仅已知与中性粒细胞、单核细胞、nk细胞等免疫细胞的数量有相关性，而在肝硬化中s100a8/a9与哪种细胞的活化相关尚不可知，s100a8/a9与ifn-γ的相关性更是未知。

技术实现思路

1、本发明要解决的技术问题是提供一种新靶点，用于有效预防肝硬化患者合并糖尿病的发生。

2、为了解决上述技术问题，本发明提供了s100a8/a9作为靶点在诱导nk细胞产生ifnγ中的应用。

3、作为本发明应用的改进：s100a8/a9通过结合nk细胞的rage激活p38 mapk信号通路。

4、作为本发明应用的进一步改进：通过抑制s100a8/a9的功能，从而抑制肝硬化中nk细胞产生ifn-r。

5、本发明还同时提供了s100a8/a9的抑制剂在制备抑制肝硬化中nk细胞产生ifn-r的药物中的应用。

6、作为本发明应用的改进：所述s100a8/a9的抑制剂(抑制s100a8/a9的药物)为rage拮抗剂fps-zm1。

7、fps-zm1的使用方法可参照其现有方式。

8、说明：

9、本发明发现s100a8/a9的升高可以诱导nk细胞(可以是肝脏、胰腺中)产生ifn-r(干扰素gama)的量增加；

10、nk细胞产生ifn-r的通路是s100a8/a9与rage结合促进nk细胞中p38 mapk信号通路的活化，进而促进产生ifn-γ；

11、rage的拮抗剂fps-zm1可以抑制p38 mapk信号通路的活化，从而抑制ifn-r的产生。

12、即，通过阻断外周血中s100a8/a9与rage的结合，从而减少ifnγ的产生，降低出现糖尿病的风险。所述阻断s100a8/a9与rage结合的方式为：利用rage拮抗剂fps-zm1。

13、本发明首先提供了单纯肝硬化病人以及肝硬化合并糖尿病病人外周血进行实验，与单纯肝硬化病人相比，肝硬化合并糖尿病病人外周血中s100a8/a9的含量显著升高；同时，nk细胞比例和nk产生ifn-γ的水平存在显著性差异。且，肝硬化合并糖尿病病人外周血中含有更高水平的nk细胞比例，并且nk细胞胞内ifn-γ平均荧光强度更高。

14、进一步地，本发明发现s100a8/a9的含量与ifn-γ浓度的有相关性。根据本发明的实施例，s100a8/a9的含量与ifn-γ浓度呈现显著正相关性。在肝硬化小鼠模型中，本发明发现s100a8/a9升高了小鼠体内的ifn-γ浓度并加重了胰岛损伤。

15、更进一步，本发明发现s100a8/a9能够刺激nk细胞分泌ifn-γ，并且该效应可被p38磷酸化酶抑制剂sb203580以及rage拮抗剂fps-zm1逆转。根据本发明的实施例，nk92-mi细胞经过s100a8/a9刺激后，nk细胞中p38 mapk信号通路被激活，并且细胞培养上清中ifn-γ浓度升高，而fps-zm1可抑制ifn-γ浓度升高。

16、本发明的有益效果在于：

17、本发明证实了s100a8/a9与nk细胞分泌ifn-γ具有明显的相关性，即s100a8/a9可以通过结合nk细胞表面rage诱导分泌ifn-γ。当使用rage拮抗剂时，可以有效抑制ifn-γ的分泌。本发明证实了s100a8/a9可以作为一种诱导nk细胞分泌ifn-γ的重要刺激剂并证实了p38 mapk信号通路对nk细胞分泌ifn-γ的调控作用。

18、本发明与已公开的相关研究相比具有明显区别的关键在于：s100a8/a9可以通过结合rage激活nk细胞p38 mapk信号通路从而分泌ifn-γ。指出了刺激nk细胞分泌ifn-γ的p38 mapk信号通路。

19、本发明证实了s100a8/a9可以有效的诱导nk细胞分泌ifn-γ。

20、综上，本发明公开了一种炎性蛋白s100a8/a9，在肝硬化合并糖尿病患者外周血中升高，并可以通过结合rage激活p38 mapk信号通路提高nk细胞分泌ifn-γ的水平，揭示了肝硬化过程中s100a8/a9诱导nk细胞产生ifn-γ的靶点。