蜂产品中黄曲霉毒素残留LC/MS/MS测定前处理方法与流程

本发明涉及蜂产品测定相关领域，具体涉及一种蜂产品(蜂王浆和蜂王浆冻干粉)中黄曲霉毒素残留lc/ms/ms测定前处理方法。

背景技术：

1、蜂王浆是极好的营养食品，并具有一定的医疗作用。目前，很多厂家将蜂王浆加工制成各种制剂，给消费者提供食用和药用，蜂王浆也越来越得到重视。黄曲霉毒素是主要由黄曲霉寄生曲霉产生的次生代谢产物，在湿热地区食品中出现黄曲霉毒素的机率最高，黄曲霉素对人体危害极大，其危害性在于对人及动物肝脏组织有破坏作用，严重时可导致肝癌甚至死亡。蜂产品中黄曲霉素类的检测目前尚无相关文献报道。

技术实现思路

1、本发明的目的在于克服现有技术中存在的上述不足，而提供一种蜂产品中黄曲霉毒素残留lc/ms/ms测定前处理方法，适用于蜂产品中黄曲霉毒素族残留afb1、afb2、afg1、afg2测定前处理。

2、本发明解决上述问题所采用的技术方案是：一种蜂产品中黄曲霉毒素残留lc/ms/ms测定前处理方法，其特征是，步骤如下：

3、1)取蜂王浆冻干粉5m g加10m g水溶解充分复水至无颗粒，称取5m g复水后的样品；

4、2)在2m g蜂王浆样品中加入20m ml乙腈-水-乙酸提取液，乙腈、水、乙酸体积比为85：14：1；在5m g复水后的样品中加入20m ml乙腈-水-乙酸提取液，乙腈、水、乙酸体积比为92：7：1；振荡提取；

5、3)离心；

6、4)取全部上清液，加m g氯化钠振荡溶解；

7、5)盐析后离心，吸取全部上层液至茄形瓶中，蒸干，去除溶液中的乙腈及多余的水分，富集目标物；

8、6)加2m ml水，使后续溶液浓度一致；超声溶解，加5m ml氯仿；

9、7)用吸管吸取全部溶液至离心管，之后离心，分层，氯仿层即含有提纯后的黄曲霉素，水层是杂质层；

10、8)取氯仿层，称取100m mg psa和100m mg c18，加入氯仿层，振荡；

11、9)离心，使psa和c18快速沉积至底部，取上清液，蒸干；

12、10)加入m ml 50％乙腈水溶液，乙腈、水的体积比为1：1，溶解，过膜；

13、11)进lc/ms/ms。

14、优选的，步骤2)中，振荡提取1min。

15、优选的，步骤3)中，在4500rpm离心10min。

16、优选的，步骤8)中，振荡60秒。

17、优选的，步骤9)中，在4500rpm离心3分钟。

18、优选的，步骤10)中，过膜采用尼龙微孔滤膜：0.22um。

19、优选的，步骤11)中，稀释倍数：蜂王浆0.5，蜂王浆冻干粉0.6。

20、本发明与现有技术相比，具有以下优点和效果：本发明采用乙腈-水-乙酸提取液去除杂质，用盐析的方法初步净化，蒸干富集目标物，以水分散残渣，用氯仿再次净化，用psa和c18进一步去除色素、脂类。样品净化效果良好，检测精密度良好，检测限能够达到出口限量的要求。避免了使用固相萃取小柱(使用免疫亲和小柱是现有常规的检测方法，成本极高)，大大节约了检测成本，提升了产品竞争力。

技术特征：

1.一种蜂产品中黄曲霉毒素残留lc/ms/ms测定前处理方法，其特征是，步骤如下：

2.根据权利要求1所述的蜂产品中黄曲霉毒素残留lc/ms/ms测定前处理方法，其特征是，步骤2）中，振荡提取1min。

3.根据权利要求1所述的蜂产品中黄曲霉毒素残留lc/ms/ms测定前处理方法，其特征是，步骤3）中，在4500rpm离心10min。

4.根据权利要求1所述的蜂产品中黄曲霉毒素残留lc/ms/ms测定前处理方法，其特征是，步骤8）中，振荡60秒。

5.根据权利要求1所述的蜂产品中黄曲霉毒素残留lc/ms/ms测定前处理方法，其特征是，步骤9）中，在4500rpm离心3分钟。

6.根据权利要求1所述的蜂产品中黄曲霉毒素残留lc/ms/ms测定前处理方法，其特征是，步骤10）中，过膜采用尼龙微孔滤膜：0.22um。

7.根据权利要求1所述的蜂产品中黄曲霉毒素残留lc/ms/ms测定前处理方法，其特征是，步骤11）中，稀释倍数：蜂王浆0.5，蜂王浆冻干粉0.6。

技术总结本发明公开了一种蜂产品中黄曲霉毒素残留LC/MS/MS测定前处理方法，涉及蜂产品测定相关领域，蜂产品中黄曲霉素类的检测目前尚无相关文献报道。本发明采用乙腈‑水‑乙酸提取液去除杂质，用盐析的方法初步净化，蒸干富集目标物，以水分散残渣，用氯仿再次净化，用PSA和C18进一步去除色素、脂类。样品净化效果良好，检测精密度良好，检测限能够达到出口限量的要求。避免了使用固相萃取小柱（使用免疫亲和小柱是现有常规的检测方法，成本极高），大大节约了检测成本，提升了产品竞争力。技术研发人员：周星联,陈宏钢受保护的技术使用者：杭州和蜂园保健品有限公司技术研发日：技术公布日：2024/10/10