刺激HANK和NK92MI细胞的靶向IL-12治疗和方法与流程

本发明的领域是使用天然杀伤细胞和免疫刺激细胞因子并且尤其是活化的nk细胞和il-12的癌症治疗和方法。

背景技术：

1、背景描述包括可用于理解本发明的信息。这不是承认本文提供的任何信息为现有技术或与当前要求保护的发明有关，也不是承认明确或隐含引用的任何出版物为现有技术。

2、本文中所有出版物和专利申请都通过引用并入，其程度如同每个单独的出版物或专利申请均被明确地和单独地指出通过引用并入一样。在并入的参考文件中术语的定义或用法与本文提供的术语的定义不一致或相反时，本文提供的该术语的定义适用而在该参考文件中该术语的定义不适用。

3、最近，由于阳性治疗结果，用经基因修饰的nk细胞的基于细胞的癌症治疗受到关注，特别是在其中使用nk92衍生细胞，例如活化的nk细胞(ank细胞)、具有高亲和力cd16受体的经基因修饰的nk细胞(hank细胞)、或嵌合抗原受体(tank细胞)。尽管此类基于细胞的治疗在概念上是有吸引力的，肿瘤微环境和其他患者特异性因子将通常降低其细胞毒素活性，并且已经进行了各种尝试来调节nk92细胞中的细胞毒性。

4、白介素-2(il-2)和白介素-12(il-12)细胞因子通过刺激未经修饰的免疫细胞(包括t细胞和自然杀伤(nk)细胞)引发强烈的抗肿瘤作用。尽管细胞因子刺激t细胞增殖，但nk细胞的干扰素-γ(ifn-γ)产生，以及最终地通过il-2和il-12刺激作用的细胞溶解活性、幅度、和谱均不同(参见，例如，j.leukoc.biol.[白细胞生物学杂志]58:225-233；1995)。例如，尽管il-2是增殖和细胞溶解活性的更强刺激物，但il-12是来自未经修饰的nk细胞和活化的t细胞的ifn-γ的更强的诱导物。ifn-γmrna在用il-2和il-12共刺激的nk细胞中具有增加的稳定性(参见，例如，molecular and cellularbiology[分子和细胞生物学],2002年3月,第1742-53页)。然而，体外使用的il-2和il-12浓度可能不一定反映体内可实现的或甚至是所希望的水平。实际上，il-2的il-2全身施用与相对高的毒性和毛细血管渗漏综合征相关联，而若干例死亡归因于il-12的全身施用。此外，原代nk细胞对各种细胞因子的应答不一定与经基因修饰的nk92细胞的应答相同。

5、因此，尽管已知各种用于活化nk细胞的组合物和方法，但仍有使用nk细胞治疗癌症的组合物和方法的需要，以临床安全的方式用il-12刺激nk细胞的情况下尤其如此。

技术实现思路

1、本文披露了基于nk细胞的治疗的各种组合物和方法。特别地，本披露描述了表达并在细胞内保留il-2的nk细胞，其中nk细胞使用包含癌细胞靶向部分和il-12部分的嵌合蛋白进行刺激。有利地，这种嵌合蛋白基本上减少了全身毒性，并以靶向的方式有益地诱导ifn-γ分泌。出乎意料地，与天然的nk细胞相比，这种嵌合蛋白显著增加了表达并在细胞内保留il-2的nk细胞中ifn-γ的分泌。

2、在本发明主题的一个方面，本发明人预期了在nk细胞中诱导ifnγ分泌的方法，该方法包括提供nk细胞的一个步骤，其中该nk细胞是il-2敏化的nk细胞或组成性地表达il-2的经基因修饰的nk细胞；以及使该nk细胞与包含il-12部分和癌细胞靶向部分的嵌合蛋白接触的另一个步骤以诱导该nk细胞分泌干扰素γ(ifnγ)。

3、在一些实施例中，该il-2敏化的nk细胞是之前且组成性地暴露于il-2的nk细胞或组成性地暴露于至少100iu/ml il-2的nk细胞。在其他实施例中，该经基因修饰的nk细胞也可以是ank细胞、自体nk细胞或从前体细胞体外衍生的nk细胞，而在仍另外的实施例中，该经基因修饰的nk细胞组成性地表达并在细胞内保留il-2(例如hank细胞或nk92mi细胞)。

4、进一步预期到该嵌合蛋白的il-12部分包含il-12α链和il-12β链，但il-12α链的同源二聚体和其他异源二聚体也认为是合适的。在一些实施例中，该癌细胞靶向部分包含igg抗体部分、fab部分、f(ab’)2部分、fab2部分、或scfv部分。最典型地，该癌细胞靶向部分靶向坏死标记物(例如dna、rna、组蛋白等)或癌症相关的抗原或癌症新表位以提供关于il-12作用的位点特异性。例如，合适的癌细胞靶向部分可能包含hu51-4抗体或其部分。

5、虽然不限于本发明的主题，预期离体进行使该nk细胞与该嵌合蛋白接触的步骤，且该nk细胞是hank细胞，或体内进行使该nk细胞与该嵌合蛋白接触的步骤，并且其中该nk细胞是hank细胞或nk92mi细胞。

6、因此，从不同的角度来看，本发明人也预期一种治疗癌症的方法，该方法包括向患者施用nk细胞的步骤，其中该nk细胞是il-2敏化的nk细胞或组成性地表达il-2的经基因修饰的nk细胞；并且施用包含il-12部分和癌细胞靶向部分的嵌合蛋白的另外的步骤从而诱导该nk细胞分泌干扰素γ(ifnγ)。

7、如上所述，预期了该nk细胞可以是组成性地表达并在细胞内保留il-2的经基因修饰的nk细胞(例如hank细胞或nk92mi细胞)，和/或该嵌合蛋白的il-12部分包含il-12α链和il-12β链。在其他实例中，该癌细胞靶向部分可以包含igg抗体部分、fab部分、f(ab’)2部分、fab2部分、或scfv部分，并且通常优选的是癌细胞靶向部分靶向坏死标记物(例如dna、rna、组蛋白等)或癌症相关的抗原或癌症新表位。例如，该癌细胞靶向部分可以包含hu51-4抗体或其部分。

8、在另外的实施例中，预期在施用该nk细胞前至少12小时施用该嵌合蛋白，或在施用该nk细胞后至少12小时施用该嵌合蛋白，或该嵌合蛋白与nk细胞同时施用。在其他选择中，也预期了嵌合蛋白与nk细胞结合。

9、在本发明主题的又另一方面，发明人还预期了包含il-12部分和靶向坏死标记物(例如dna、rna、组蛋白等)的癌细胞靶向部分的嵌合蛋白，和/或该癌细胞靶向部分包含hu51-4抗体或其部分。在其他实施例中，癌细胞靶向部分包含igg抗体部分、fab部分、f(ab’)2部分、fab2部分、或scfv部分。

10、例如，il-12部分可以共价偶联至癌细胞靶向部分，和/或il-12部分可以通过肽接头共价偶联至癌细胞靶向部分。典型地，但非必需地，嵌合蛋白的il-12部分包含il-12α链和il-12β链，和/或癌细胞靶向部分包含hu51-4抗体或其部分。当希望时，嵌合蛋白可以非共价地与nk细胞的cd16受体结合。

11、因此，本发明人还预期了包含本文所预期的嵌合蛋白的药物组合物。此类药物组合物可以进一步包含如上所述的nk细胞。因此，本发明人也预期一种包含以下的试剂盒：(a)nk细胞，其中该nk细胞是il-2敏化的nk细胞或组成性地表达il-2的经基因修饰的nk细胞；以及(b)包含il-12部分和癌细胞靶向部分的嵌合蛋白。关于nk细胞和嵌合蛋白，应用与以上提供的相同的考虑。

12、因此，从不同的角度来看，本发明人还预期了嵌合蛋白和nk细胞在治疗癌症中的用途，其中该nk细胞是il-2敏化的nk细胞或组成性地表达il-2的经基因修饰的nk细胞，且其中该嵌合蛋白包含il-12部分和癌细胞靶向部分，诱导该nk细胞分泌干扰素γ(ifnγ)。关于nk细胞和/或嵌合蛋白，应用与上述相同的考虑。

13、根据以下对优选实施例的详细描述以及附图，本发明主题的各种目的、特征、方面和优点将变得更加明显，在附图中相同的附图标记表示相同的组件。