一种类人胶原蛋白重组毕赤酵母工程菌的构建和蛋白快速纯化方法

技术特征：
1.一种编码类人胶原蛋白的基因，其特征在于，包括seq id no.2所示的核苷酸序列。2.一种重组载体，其特征在于，含有权利要求1所述的基因。3.一种重组菌，其特征在于，含有权利要求1所述的基因或权利要求2或3所述的重组载体。4.根据权利要求3所述的重组菌，其特征在于，在本发明的一种实施方式中，所述重组菌的表达载体为ppic9k，宿主为毕赤酵母gs115。5.一种快速制备高纯度重组胶原蛋白的方法，其特征在于，所述方法为利用权利要求4或5所示重组菌发酵制备发酵上清液，在发酵上清液中添加硫酸铵i处理，取上清再加入硫酸铵ii处理，离心收集沉淀并进行透析，取上清获得高纯度重组胶原蛋白。6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，所述硫酸铵i的终浓度为15-25％，所述硫酸铵ii的终浓度为55-65％。7.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，所述透析的次数至少为4次。8.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，所述透析的大小为8-10kda。9.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，硫酸铵处理和透析在冰浴中进行。10.权利要求1所述基因，或权利要求2或3所示重组载体，或权利要求4或5所述重组菌，或权利要求6-9任一所述方法在医药、食品、化妆品、组织工程和材料工程领域中的应用。

技术总结
本发明公开了一种类人胶原蛋白重组毕赤酵母工程菌的构建和蛋白快速纯化方法，属于生物技术和基因工程领域。本发明获得的产重组胶原蛋白的菌株可以实现高密度发酵，同时对重组胶原蛋白实现胞外分泌，重组胶原蛋白产量可达2.33g/L。本发明所采用的快速纯化制备重组胶原的方法简单快速且成本低廉，对于维持胶原蛋白结构的完整性起到重要作用，且获得的蛋白纯度高达95％以上，具有良好的应用前景。具有良好的应用前景。具有良好的应用前景。


技术研发人员：周景文 马玲玲 曾伟主 徐沙 余世琴 陈坚
受保护的技术使用者：江南大学
技术研发日：2022.02.17
技术公布日：2022/5/31