CD8结合剂及其用途的制作方法

技术特征：
1.cd8结合剂，其包含重链抗体的重链的可变结构域（vhh结构域），其中所述cd8结合剂以约1nm或更小的k
d
特异性结合人cd8。2.权利要求1的cd8结合剂，其中所述cd8结合剂以约0.002/s或更小的k
off
结合人cd8。3. 权利要求1或2的cd8结合剂，其中所述cd8结合剂以约1 nm或更小的k
d
结合食蟹猴cd8。4.权利要求1-3中任一项的cd8结合剂，其中所述cd8结合剂以约0.004/s或更小的k
off
结合食蟹猴cd8。5. 权利要求1-4中任一项的cd8结合剂，其中所述cd8结合剂不刺激或抑制cd8
t细胞的活化。6. 权利要求1-5中任一项的cd8结合剂，其中所述cd8结合剂不诱导cd8
t细胞增殖。7. 权利要求1-6中任一项的cd8结合剂，其中所述cd8结合剂不结合cd4
t细胞。8.权利要求1-7中任一项的cd8结合剂，其中所述vhh结构域是家羊驼vhh。9.权利要求1-8中任一项的cd8结合剂，其中所述vhh是人源化的。10. 权利要求1-9中任一项的cd8结合剂，其中所述vhh结构域特异性结合包含arg25、lys42、gln44、val45、leu46、leu47、ser48、pro50、thr51、ser52、gln75、arg93、leu94、gly95、asp96和thr97的人cd8α表位，其中氨基酸编号根据seq id no: 13。11. 权利要求中10的cd8结合剂，其中所述vhh结构域包含包含seq id no: 6或7的氨基酸序列的互补性决定区（cdr）1；包含seq id no: 8或9的氨基酸序列的cdr2；以及包含seq id no: 10-12中任一项的氨基酸序列的cdr3。12.权利要求中11的cd8结合剂，其中所述vhh结构域包含：（1）包含seq id no: 6的氨基酸序列的cdr1、包含seq id no: 8的氨基酸序列的cdr2和包含seq id no: 10的氨基酸序列的cdr3；（2）包含seq id no: 6的氨基酸序列的cdr1、包含seq id no: 9的氨基酸序列的cdr2和包含seq id no: 11的氨基酸序列的cdr3；（3）包含seq id no: 7的氨基酸序列的cdr1、包含seq id no: 9的氨基酸序列的cdr2和包含seq id no: 11的氨基酸序列的cdr3；或（4）包含seq id no: 6的氨基酸序列的cdr1、包含seq id no: 9的氨基酸序列的cdr2和包含seq id no: 12的氨基酸序列的cdr3。13. 权利要求中11的cd8结合剂，其中所述vhh结构域包含包含seq id no: 6的氨基酸序列的cdr1、包含seq id no: 9的氨基酸序列的cdr2和包含seq id no: 12的氨基酸序列的cdr3。14.权利要求1-13中任一项的cd8结合剂，其中所述vhh结构域包含l49a，其中编号根据kabat编号。15.权利要求1-14中任一项的cd8结合剂，其中所述vhh结构域包含一个或多个氨基酸修饰，其选自v89t取代、t110q取代、s112q取代和a114添加，其中编号根据kabat编号。16. 权利要求1-15中任一项的cd8结合剂，其中所述vhh结构域包含seq id nos: 1-4中任一项的氨基酸序列。17.权利要求1-16中任一项的cd8结合剂，其中所述试剂不包含fc区。18.分离的核酸，其编码权利要求1-17中任一项的cd8结合剂。
19.表达载体，其包含权利要求18的核酸。20.包含权利要求18的核酸或权利要求19的表达载体的宿主细胞。21.权利要求20的宿主细胞，其中所述宿主细胞是真核细胞例如哺乳动物细胞（例如expi293细胞）或原核细胞。22. 制备cd8结合剂的方法，所述方法包括：a）在其中产生试剂的条件下培养权利要求20或21的宿主细胞；和b）回收由宿主细胞产生的cd8结合剂。23.权利要求1-17中任一项的cd8结合剂，其中所述vhh结构域与标记缀合。24.权利要求23的cd8结合剂，其中所述标记是荧光染料、放射性核素或酶。25.权利要求24的cd8结合剂，其中所述标记是放射性核素。26.权利要求25的cd8结合剂，其中所述放射性核素是
18
f、
89
zr、
99m
tc、
67
ga、
68
ga、
64
cu、
52
mn、
111
in或
124
i。27.权利要求23-26中任一项的cd8结合剂，其中所述vhh结构域通过螯合部分与标记缀合。28.权利要求27的cd8结合剂，其中所述螯合部分通过赖氨酸残基与vhh结构域共价连接。29.权利要求27或28的cd8结合剂，其中所述标记与金属形成复合物，其中所述复合物被螯合部分螯合。30.权利要求29的cd8结合剂，其中所述标记是
18
f并且所述金属是铝。31.权利要求30的cd8结合剂，其中所述螯合部分是式（i）的化合物：。32. 检测主体中cd8

细胞的方法，所述方法包括：a）向所述主体施用权利要求23-31中任一项的标记的cd8结合剂；和b）检测所述标记的cd8结合剂与所述主体中的cd8

细胞的结合，其中所述结合的检测表明存在cd8

细胞。33.权利要求32的方法，其中检测所述标记的cd8结合剂与所述主体中的cd8

细胞的结合包括对所述主体中的cd8

细胞进行成像。34.权利要求33的方法，其中对所述主体中的cd8

细胞进行成像包括对所述主体进行正电子发射体层摄影术（pet）扫描或正电子发射体层摄影术/计算机化断层显像（pet/ct）扫描。35. 权利要求32-34中任一项的方法，其中所述cd8

细胞是cd8
t细胞或cd8

肿瘤细
胞。36.权利要求32-35中任一项的方法，其中所述检测在施用后约1天或更短时间内进行。37.权利要求32-36中任一项的方法，其中所述方法重复一次或多次。38.权利要求37的方法，其中所述方法在预先施用cd8结合剂后约1天后重复。39.权利要求37或38的方法，其中所述方法每年重复1至4次。40.权利要求37-39中任一项的方法，其中所述方法重复不止1年。41. 权利要求32-40中任一项的方法，其中所述方法具有约1 nm至约30 nm的灵敏度。42.权利要求32-41中任一项的方法，其中所述主体是人或非人灵长类动物。43.权利要求42的方法，其中所述非人灵长类动物是食蟹猴或恒河猴。44.权利要求32-43中任一项的方法，其中所述主体患有癌症。45.权利要求32-43中任一项的方法，其中所述主体患有自身免疫性疾病或状况、移植体排斥或移植物抗宿主疾病。46. 预测患有癌症的主体对免疫治疗剂、细胞治疗或癌症疫苗的反应性的方法，所述方法包括：a）向所述主体施用权利要求23-31中任一项的标记的cd8结合剂；和b）检测所述标记的cd8结合剂与所述主体中肿瘤组织中的cd8
t细胞的结合，其中所述结合的检测表明所述主体很可能对所述免疫治疗剂、细胞治疗或癌症疫苗有反应。47.权利要求46的方法，其进一步包括以下步骤：（c）向在其中已检测到结合的主体施用治疗有效量的免疫治疗剂、细胞治疗或癌症疫苗。48. 监控患有癌症的主体的疾病进展的方法，所述方法包括：a）向所述主体施用权利要求23-31中任一项的标记的cd8结合剂，和b）在第一时间点和第二时间点检测所述标记的cd8结合剂与所述主体中肿瘤组织中cd8
t细胞的结合。49.权利要求48的方法，其进一步包括以下步骤：（c）向所述主体施用治疗有效量的免疫治疗剂、细胞治疗或癌症疫苗，其中在第二时间点肿瘤组织中cd8
t细胞的水平高于在第一时间点肿瘤组织中cd8
t细胞的水平。50. 监控患有癌症的主体中的治疗进展的方法，所述主体已经或正在接受免疫治疗剂、细胞治疗或癌症疫苗，所述方法包括：i）连同所述免疫治疗剂、细胞治疗或癌症疫苗一起向所述主体施用权利要求23-31中任一项的标记的cd8结合剂，和ii）在第一时间点和第二时间点检测所述标记的cd8结合剂与肿瘤组织中的cd8
t细胞的结合。51.权利要求50的方法，其中所述标记的cd8结合剂在所述免疫治疗剂、细胞治疗或癌症疫苗之前施用，其中所述第一时间点在所述标记的cd8结合剂的施用之后和所述免疫治疗剂、细胞治疗或癌症疫苗的施用之前，并且其中所述第二时间点在所述免疫治疗剂、细胞治疗或癌症疫苗的施用之后。52.权利要求50的方法，其中在所述标记的cd8结合剂之前施用所述免疫治疗剂、细胞治疗或癌症疫苗，其中所述第一时间点在所述免疫治疗剂、细胞治疗或癌症疫苗的施用之
后并且在所述标记的cd8结合剂的施用之后，并且其中所述第二时间点在所述第一时间点之后。53.权利要求46-47和49-52中任一项的方法，其中将免疫治疗剂施用于所述主体。54.权利要求53的方法，其中所述免疫治疗剂是抗-pdl1抗体、抗-pd1抗体、抗-tigit抗体、tigit拮抗剂、抗-csf-1r抗体、抗-csf-1r拮抗剂、抗-cea抗体、抗-cea拮抗剂、抗-ctla4抗体、ctla4拮抗剂、抗-ox40抗体或ox40激动剂。55.权利要求54的方法，其中所述免疫治疗剂是抗-pd-l1抗体。56.权利要求55的方法，其中所述抗-pd-l1抗体是阿替利珠单抗。57.权利要求55或56的方法，其中所述抗-pd-l1抗体与一种或多种治疗剂组合施用。58.权利要求57的方法，其中所述一种或多种治疗剂是tarceva
®
（厄洛替尼）、zelboraf
®
（威罗菲尼）、gazyva
®
（阿托珠单抗）、avastin
®
（贝伐珠单抗）、cotellic
®
（考比替尼）、zelboraf
®
（威罗菲尼）和cotellic
®
（考比替尼）、alecensa
®
（阿来替尼）、kadcyla
®
（曲妥珠单抗美坦新偶联物）、herceptin
®
（曲妥珠单抗）、perjeta
®
（帕妥珠单抗）、泊洛妥珠单抗、inf-α、抗-cd40剂、抗-ox40抗体、ox40激动剂、抗-csf-1r抗体、抗-cea抗体、ido抑制剂或抗-tigit抗体。59.权利要求53的方法，其中所述免疫治疗剂是细胞因子，例如il2、人工改造的il2、il15或人工改造的il15。60.权利要求53的方法，其中所述免疫治疗剂是树突细胞调节剂，例如树突细胞激活剂或树突细胞生长因子。61.权利要求53的方法，其中所述免疫治疗剂是特异性结合cd3或cd16例如cd16a的双特异性抗原结合分子。62.权利要求46-47和49-52中任一项的方法，其中将癌症疫苗施用于所述主体。63.权利要求62的方法，其中所述癌症疫苗是个性化癌症疫苗（pcv）。64.权利要求46-47和49-52中任一项的方法，其中将细胞治疗施用于所述主体。65.权利要求64的方法，其中所述细胞治疗是car-t或新抗原特异性t细胞。66. 预测患有自身免疫性疾病或状况、移植体排斥或移植物抗宿主疾病的主体对免疫治疗剂的反应性的方法，所述方法包括：a）向所述主体施用权利要求23-31中任一项的标记的cd8结合剂；和b）检测所述标记的cd8结合剂与所述主体中患病组织中的cd8
t细胞的结合，其中所述结合的检测表明所述主体很可能对免疫治疗剂有反应。67.权利要求66的方法，其进一步包括以下步骤：（c）向在其中已检测到结合的主体施用治疗有效量的免疫治疗剂。68. 监控患有自身免疫性疾病或状况、移植体排斥或移植物抗宿主疾病的主体中的疾病进展的方法，所述方法包括：a）向所述主体施用权利要求23-31中任一项的标记的cd8结合剂，和b）在第一时间点和第二时间点检测所述标记的cd8结合剂与所述主体中患病组织中的cd8
t细胞的结合，其中来自所述第一时间点和所述第二时间点的cd8
t细胞中的增加表明所述自身免疫性疾病或状况、移植体排斥或移植物抗宿主疾病已经进展。69.权利要求68的方法，其进一步包括以下步骤：
（c）向所述主体施用治疗有效量的免疫治疗剂，其中在第二时间点患病组织中的cd8
t细胞水平低于在第一时间点患病组织中的cd8
t细胞水平。70. 监控患有自身免疫性疾病或状况、移植体排斥或移植物抗宿主疾病的主体中的治疗进展的方法，所述主体已经或正在接受免疫治疗剂，所述方法包括：i）连同所述免疫治疗剂一起向所述主体施用权利要求23-31中任一项的标记的cd8结合剂，和ii）在第一时间点和第二时间点检测所述标记的cd8结合剂与患病组织中的cd8
t细胞的结合。71.权利要求70的方法，其中所述标记的cd8结合剂在所述免疫治疗剂之前施用，其中所述第一时间点在所述标记的cd8结合剂的施用之后和所述免疫治疗剂的施用之前，并且其中所述第二时间点在所述免疫治疗剂的施用之后。72.权利要求70的方法，其中在所述标记的cd8结合剂之前施用所述免疫治疗剂，其中所述第一时间点在所述免疫治疗剂的施用之后并且在所述标记的cd8结合剂的施用之后，并且其中所述第二时间点在所述第一时间点之后。73. 权利要求46-72中任一项的方法，其中检测所述标记的cd8结合剂与所述主体中的cd8
t细胞的结合包括对所述主体中的cd8
t细胞进行成像。74. 权利要求73的方法，其中对所述主体中的cd8
t细胞进行成像包括对所述主体进行正电子发射体层摄影术（pet）扫描或正电子发射体层摄影术/计算机化断层显像（pet/ct）扫描。75.权利要求48-65和68-74中任一项的方法，其中对所述主体监控至少1年。76.鉴定与对用免疫治疗剂治疗的反应性有关的肠道微生物菌株的方法，包括：a）从患有癌症的主体群体获得肠道微生物组样品，所述群体包括对用免疫治疗剂治疗有反应的主体和对用免疫治疗剂治疗无反应的主体；b）分析对治疗有反应的主体的肠道微生物组样品和对治疗无反应的主体的肠道微生物组样品；和c）鉴定与对治疗有反应的主体有关的肠道微生物菌株；其中反应性通过检测权利要求23-31中任一项的标记的cd8结合剂与所述主体中肿瘤组织中的cd8
t细胞的结合来确定，并且其中所述结合的检测表明所述主体对免疫治疗剂有反应。77.权利要求76的方法，其进一步包括制备基于微生物组的药物，所述药物包含与对免疫治疗剂的反应性有关的肠道微生物菌株。78.权利要求76或77的方法，其中所述免疫治疗剂是抗-pd-1抗体或抗-pd-l1抗体例如阿替利珠单抗。79.试剂盒，其包括权利要求23-31中任一项的标记的cd8结合剂。80.制备标记的cd8结合剂的方法，包括将螯合部分缀合至权利要求1-17中任一项的cd8结合剂的vhh结构域以提供缀合物，和使所述缀合物与包含
18
f的氟化铝复合物接触以提供标记的cd8结合剂，其中所述螯合部分是式（i）的化合物：
。

技术总结
提供了特异性结合人CD8的包含VHH结构域的CD8结合剂。还提供了编码这种CD8结合剂的核酸、包含这种核酸的载体、包含其的细胞以及制备这种CD8结合剂的方法。还提供了VHH结构域与可检测标记缀合的CD8结合剂。提供了使用这种CD8结合剂以在患有癌症、自身免疫性疾病或状况、移植体排斥或移植物抗宿主疾病的主体中检测CD8


技术研发人员：J
受保护的技术使用者：豪夫迈
技术研发日：2020.09.03
技术公布日：2022/6/10