快速可视化检测SADS-CoV的crRNA、试剂盒及方法

技术特征：
1.基于crispr-cas12a系统快速可视化检测sads-cov的crrna，其特征在于，所述crrna的序列如seq id no.10所示。2.含有权利要求1所述的crrna的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒中还包含rpa反应引物对、特异性引导rna、荧光淬灭报告探针。3.根据权利要求2所述的试剂盒，其特征在于，所述rpa反应引物对的上游引物序列如seq id no.2所示、下游引物序列如seq id no.6所示，所述特异性引导rna的序列如seq id no.9所示，所述荧光淬灭报告探针的序列为fam-ttatt-bhq1。4.权利要求2~3任一项所述的试剂盒在快速可视化检测sads-cov中的应用。5.根据权利要求4所述的应用，其特征在于，所述快速可视化检测sads-cov是从sads-cov、pedv、tgev和pdcov四种病毒中快速检测出sads-cov病毒。6.利用权利要求2~3任一项所述的试剂盒快速可视化检测sads-cov的方法，其特征在于，包括以下步骤：以sads-cov cdna、pedv cdna、tgev cdna、pdcov cdna、h2o为模板，用rpa反应引物对进行rpa反应，利用特异性引导rna、crrna和荧光淬灭报告探针对rpa反应产物进行cas12a可视化酶切反应。

技术总结
本发明属于病原检测技术领域，公开了基于CRISPR-Cas12a系统快速可视化检测SADS-CoV的方法，包括以下步骤：以SADS-CoV cDNA、PEDV cDNA、TGEV cDNA、PDCoV cDNA、H2O为模板，用RPA反应引物对进行RPA反应，利用特异性引导RNA、crRNA和荧光淬灭报告探针对RPA反应产物进行Cas12a可视化酶切反应。本发明针对SADS-CoV N基因序列上的相对保守区域设计，特异性好，可以从猪腹泻相关的系列冠状病毒中精准地检测出SADS-CoV，灵敏度高可达到单个拷贝级别，检测速率高且能实现可视化。测速率高且能实现可视化。测速率高且能实现可视化。


技术研发人员：王琦 齐晓兰 郑海学 曹丽艳 冯涛 施磊 袁聪 孔祥雨
受保护的技术使用者：中国农业科学院都市农业研究所
技术研发日：2022.05.26
技术公布日：2022/7/15