黄柏提取物在制备抗幽门螺杆菌产品中的应用

本发明属于中药，具体涉及黄柏提取物在制备抗幽门螺杆菌产品中的应用。

背景技术：

1、幽门螺杆菌(helicobacter pylori，hp)是一种螺旋状的、微需氧的革兰氏阴性杆菌，较强的感染能力使其在全球感染率高达50％，hp感染与慢性活动性胃炎、胃十二指肠溃疡、胃黏膜相关淋巴组织淋巴瘤、胃癌等多种消化系统疾病密切相关。hp已被证实是慢性胃炎和消化性溃疡的病因之一，且与胃癌的发生密切相关。其中，成功定植于胃黏膜是hp感染的首要条件，而黏附又是定植的关键。目前，针对hp感染的常规治疗是抗生素三联或四联疗法，但随着抗生素的滥用，hp对抗生素的耐药率不断升高，导致hp感染治疗的常规抗生素疗法根除率不断下降、不良反应越来越多。因此，寻找非抗生素的替代疗法迫在眉睫。

2、脲酶(urease,ec3.5.1.5)是hp重要的定殖因子与毒力因子，可分解尿素产生氨以中和胃酸，在其周围形成一片“氨云”，使得hp可以在胃部生长繁殖。研究表明，剔除脲酶突变基因，hp不能在无菌猪仔胃部定殖。脲酶能分解尿素产生过量氨，并进一步形成硝酸盐和亚硝酸盐而损害组织甚至致癌；尿素的水解产物还能激活单核细胞，促使免疫炎症递质和超氧自由基的分泌，从而形成空泡。在脲酶的结构单元中，其活性位点的ni2+和活性位点附近的必需基团巯基对脲酶的催化作用是必需的，而脲酶的活性又与hp能否成功定殖胃部密切相关，并影响生物体氮的利用。因此，抑制脲酶活性被视为抗菌物质研究的关键。

3、中医药是独特的卫生资源，具有广谱低毒、多靶点多途径的优点。中医药治疗在改善症状、提高幽门螺杆菌根除率、降低幽门螺杆菌复发率等方面有较大优势，已渐成为hp感染治疗的研究热点。

4、黄柏(phellodendron chinense)是芸香科黄檗属植物黄皮树(phellodendronchinense schneid.)的干燥树皮，习称为“川黄柏”，其制作是在每年7月份采收，将黄皮树的树皮剥去，除去粗皮，晒干。中医认为黄柏味苦，性寒，肾、膀胱经，有清热燥湿，泻火除蒸，解毒疗疮的功效。黄柏也是一种蒙药，称之为“霞日毛都”。蒙医认为黄柏味苦，性凉，糙、涩、钝，具有燥协日沃素，清热，解毒，止泻，止血明目的功效。临床上则用作治疗高血压病、病毒性肝炎、急性肾炎、尿路感染等代谢性、传染性、泌尿系统疾病；糖尿病、甲状腺功能亢进症等内分泌疾病；少精、阳痿、月经不调等生殖系统疾病；溃疡性结肠炎、泄泻等消化系统疾病；银屑病、疱疹、尖锐湿疣等皮肤黏膜疾病等。黄柏既可单味药使用，又可与多种中药配伍使用，如清热泻火解毒常配伍大黄、黄连、栀子；滋肾降火常配伍芍药、仙灵脾、知母、五味子；清热燥湿常配伍枳壳、苍术、萆薢等。黄柏的药用历史悠远，始载于梁代的《神农本草经》，被列为上品。曰：“味苦寒，主五脏，肠胃中结热、黄疸、肠痔、止汚痢、女子漏下赤白、阴阳烛痛”，已有两千多年的药用历史，为中医传统的清热燥湿药。许多研究报道黄柏具有抗菌、抗病毒、抗炎、降压、抗癌、免疫抑制、抗溃烂、降血糖等作用。然而，目前还没有关于黄柏单味药关抗幽门螺杆菌的作用及抑制其产生脲酶的报道。

技术实现思路

1、为了克服上述现有技术的不足，本发明经过大量研究证实，黄柏水提物及乙醇提物可以通过破坏幽门螺杆菌的细胞膜或者抑制幽门螺杆菌产生脲酶或者阻止幽门螺杆菌对胃黏膜上皮细胞的定植等方式而发挥抗幽门螺杆菌的作用，对幽门螺杆菌抗生素敏感株和耐药株均具有很强的抑制杀灭作用，且醇提物的抑杀菌效果更佳，说明黄柏水提物及乙醇提物在制备抗幽门螺杆菌产品方面具有重要的潜在应用价值。

2、为了实现上述目的，本发明所采用的技术方案是：

3、本发明第一方面提供了黄柏水提物和/或醇提物在制备抗幽门螺杆菌产品中的应用。

4、优选地，所述黄柏水提物和/或醇提物至少通过以下任一机制发挥抗幽门螺杆菌作用：

5、(1)破坏幽门螺杆菌的细胞膜；

6、(2)抑制幽门螺杆菌产生脲酶；

7、(3)阻止幽门螺杆菌对胃黏膜上皮细胞的定植。

8、本发明从黄皮树的干燥树皮中分离得到黄柏水提物及乙醇提物，经研究发现，黄柏水提物及乙醇提物对幽门螺杆菌抗生素敏感株和耐药株均具有很强的抑制杀灭作用，且醇提物的抑杀菌效果更佳。具体表现为：在幽门螺杆菌对数生长期时显著抑制其生长，并显示剂量依赖性；在mbc浓度下，48h内杀死全部幽门螺杆菌；与部分临床治疗幽门螺杆菌感染的抗生素联合使用表现为相加作用；作用10h后明显使幽门螺杆菌形态破损；1/2mic浓度下能明显抑制幽门螺杆菌产生脲酶，且抑制效果与脲酶抑制剂乙酰氧肟酸的作用效果无明显差异；在24h内，黄柏水提物和乙醇提物对ges-1细胞的毒性较低；黄柏水提物和乙醇提物可以有效地预防hp对ges-1细胞的定植；可见，本发明的黄柏水提物及乙醇提物有望用于抗幽门螺杆菌产品的制备中。

9、优选地，所述黄柏水提物的制备方法包括以下步骤：

10、s1、将黄皮树的干燥树皮打碎至粉末状，再往黄柏粉末中加入8～12倍量的水，浸泡30～60min；

11、s2、将含有黄柏的水浸液置于80～100℃下水浴回流提取0.5～3h，收集滤液；

12、s3、将滤液旋转蒸发浓缩至浸膏状，再干燥至固体粉末，即得。

13、优选地，所述黄柏乙醇提物的制备方法包括以下步骤：

14、s1、将黄皮树的干燥树皮打碎至粉末状，再往黄柏粉末中加入8～12倍量的80％乙醇，浸泡30～60min；

15、s2、将含有黄柏的80％乙醇浸液置于室温(25℃)下超声提取0.5～2h，收集滤液；

16、s3、将滤液旋转蒸发浓缩至浸膏状，再干燥至固体粉末，即得。

17、更优选地，s1中，所述黄皮树的干燥树皮为芸香科黄檗属植物黄皮树的树皮经干燥而制成。

18、更优选地，s1中，将树皮打碎至粉末状后，过30～50目筛后再进行浸泡处理。

19、更优选地，s2中，所述提取共重复2-5次，合并滤液。

20、优选地，所述抗幽门螺杆菌产品包括(但不限于)药物或预防保健品。

21、优选地，所述抗幽门螺杆菌产品的剂型包括(但不限于)粉剂、颗粒剂、注射液、胶囊、片剂或口服液，可以是药学领域可接受的任一剂型。

22、本发明第二方面提供了一种抗幽门螺杆菌的药物，所述幽门螺杆菌为标准株atcc700392，所述药物包括黄柏水提物和克拉霉素、左氧氟沙星、阿莫西林中的至少一种；或者，所述药物包括黄柏乙醇提物和阿莫西林。

23、本发明第三方面还提供了一种抗幽门螺杆菌的药物，所述幽门螺杆菌为标准株atcc43504，所述药物包括黄柏水提物和拉霉素、左氧氟沙星、甲硝唑中的至少一种；或者，所述药物包括黄柏乙醇提物和克拉霉素、左氧氟沙星、甲硝唑、阿莫西林中的至少一种。

24、本发明第四方面还提供了一种抗幽门螺杆菌的药物，所述幽门螺杆菌为标准株ss1，所述药物包括黄柏水提物和左氧氟沙星、甲硝唑、阿莫西林中的至少一种；或者，所述药物包括黄柏乙醇提物和克拉霉素、左氧氟沙星、甲硝唑、阿莫西林中的至少一种。

25、优选地，所述药物还包括药学上可接受的辅料。

26、更优选地，所述辅料为制剂领域中可得到的功能性辅料，包括表面活性剂、助悬剂、乳化剂以及一些新型药用高分子材料，如环糊精、壳聚糖、聚乳酸(pla)、聚乙醇酸聚乳酸共聚物(plga)、透明质酸等。

27、与现有技术相比，本发明的有益效果是：

28、本发明从黄皮树的干燥树皮中分离得到黄柏水提物及乙醇提物，该黄柏水提物及乙醇提物具有多成分、多途径、多靶点的作用，对幽门螺杆菌抗生素敏感株和耐药株均具有很强的抑制杀灭作用，且醇提物的抑杀菌效果更佳。具体表现为：在幽门螺杆菌对数生长期时显著抑制其生长，并显示剂量依赖性；在mbc浓度下，48h内杀死全部幽门螺杆菌；与部分临床治疗幽门螺杆菌感染的抗生素联合使用表现为相加作用；作用10h后明显使幽门螺杆菌形态破损；1/2mic浓度下能明显抑制幽门螺杆菌产生脲酶，且抑制效果与脲酶抑制剂乙酰氧肟酸的作用效果无明显差异；在24h内，黄柏水提物和乙醇提物对ges-1细胞的毒性较低；黄柏水提物和乙醇提物可以有效地预防hp对ges-1细胞的定植。同时，黄柏已有两千多年的药用历史，为中医传统的清热燥湿药,具有降血糖等作用，作用温和，耐药发生率低，不良反应少，患者服药依从性好，尤其适用于幽门螺杆菌感染者。可见，本发明的黄柏水提物及乙醇提物有望用于抗幽门螺杆菌产品的制备中，能够补充或替代目前治疗幽门螺杆菌普遍的抗生素三联或四联疗法。本发明不仅拓宽了临床常用清热燥湿药黄柏的应用领域，而且为幽门螺杆菌的治疗提供了新方向。此外，通过本发明的制备方法制得的黄柏水提物及乙醇提物无有毒的有机溶剂残留，含有较多有效成分，简单易得。