一种抗帕金森的益生菌制剂及其制备方法与应用

本发明涉及生物医药领域，特别是一种抗帕金森的益生菌制剂及其制备方法与应用。

背景技术：

1、帕金森病（parkinsondisease,pd）是一种神经退行性疾病，在pd发病过程中，酪氨酸羟化酶（th）失活使进入脑内的多巴含量降低，所以增加多巴的量或者生物利用度是治疗常见帕金森病的主要方式。除大脑外，肠道也可以产生多巴，例如嗜酸乳杆菌可以分泌多巴进入外周。但菌产生多巴的量较少，限制其在抗帕金森中的应用。因此，如何提高多巴的量是一个难题，从该关键点出发，本发明拟制备一种益生菌制剂提高菌分泌多巴的量，构建一种体内持续产生多巴口服递送系统治疗pd。

2、研究发现，小檗碱经菌代谢为二氢小檗碱能够促进四氢生物螵呤（th的辅酶）产生进而增加酪氨酸羟化酶的活性，加速肠道细菌产生多巴。此外，pd肠道氧化应激的环境促使多巴自氧化为多巴醌。为了抑制该自氧化进程，拟将硒纳米粒负载在益生菌表面，使得更多的多巴通过肠脑轴途径进入脑内，有效用于帕金森病中的应用。但至今未见有相关公开报道。

技术实现思路

1、针对上述情况，为克服现有技术之缺陷，本发明之目的就是提供一种抗帕金森的益生菌制剂及其制备方法与应用，可有效解决左旋多巴治疗帕金森出现的问题。

2、为实现上述目的，本发明解决的技术方案是，一种抗帕金森的益生菌制剂的制备方法，将亚硒酸钠、绿茶多酚、抗坏血酸、小檗碱与能够分泌多巴的益生菌混合于超纯水内，室温搅拌，离心，洗涤，干燥，最终得到负载小檗碱的硒纳米粒附着在益生菌表面的益生菌制剂，该益生菌制剂中的硒纳米粒的粒径为160-260 nm，小檗碱负载量为18.56 %-26.10%，具体包括以下步骤：

3、（1）扩增活化益生菌：将益生菌接种于培养基中，在37 ℃培养箱内培养18-24 h，得到菌密度为1×107-109 cfu/ml的菌液，将菌液5000 r/min离心5 min，分离得到菌体；

4、所述的益生菌为嗜酸乳杆菌、粪肠球菌或双歧杆菌，培养基为分别与嗜酸乳杆菌、粪肠球菌对应的肉汤培养基或与双歧杆菌对应的双歧杆菌琼脂培养基；

5、（2）制备益生菌复合物：将步骤（1）所得的益生菌与小檗碱、抗坏血酸、绿茶多酚及亚硒酸钠混合于超纯水中，使抗坏血酸质量浓度为0.8-1 mg/ml，亚硒酸钠质量浓度为2.5-3 mg/ml，绿茶多酚质量浓度为0.1-1 mg/ml，小檗碱质量浓度为10-20 μg/ml，然后在室温避光下，360-420 r/min搅拌1 h，得均匀混合的混合物，将混合物5000 r/min离心5-10min，去除上清，加入1 ml超纯水，5000 r/min离心洗涤5-10 min，取沉淀，得复合物；

6、（3）冷冻干燥：将步骤（2）所得复合物与质量浓度4 %甘露糖按质量比1∶1在无菌条件下充分混匀，然后放在-20 ℃下进行预冷冻1-2 h，预冷冻后放入-80 ℃下冷冻过夜8-12h后，再放入冷冻干燥机，真空冷冻干燥2-4 h，即得益生菌制剂。

7、所述的粪肠球菌为cicc 23213或cicc 23227。

8、所述方法制备的抗帕金森病的益生菌制剂在制备抗帕金森病药物口服剂中的应用。

9、本发明制备的抗帕金森的益生菌制剂不仅提高益生菌分泌多巴的效率，而且可抑制多巴的自氧化进程，进而提高肠道中多巴的产量，使得多巴通过肠脑轴途径进入脑内，有效用于抗帕金森病药物中的应用，社会和经济效益显著。

技术特征：

1. 一种抗帕金森的益生菌制剂的制备方法，其特征在于，将亚硒酸钠、绿茶多酚、抗坏血酸、小檗碱与分泌多巴的益生菌混合于超纯水内，室温搅拌，离心，洗涤，干燥，最终得到负载小檗碱的硒纳米粒附着在益生菌表面的益生菌制剂，该益生菌制剂中的硒纳米粒的粒径为160-260 nm，小檗碱负载量为18.56 %-26.10 %，具体包括以下步骤：

2.根据权利要求1所述的抗帕金森的益生菌制剂的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

3.根据权利要求1所述的抗帕金森的益生菌制剂的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

4.根据权利要求1所述的抗帕金森的益生菌制剂的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

5. 根据权利要求1或3所述的抗帕金森的益生菌制剂的制备方法，其特征在于，所述的粪肠球菌为cicc 23213或cicc 23227。

6.权利要求1-4任一项所述方法制备的抗帕金森病的益生菌制剂在制备抗帕金森病药物口服剂中的应用。

技术总结一种抗帕金森的益生菌制剂的制备方法，将亚硒酸钠、绿茶多酚、抗坏血酸、小檗碱与能够分泌多巴的益生菌混合于超纯水内，室温搅拌，离心，洗涤，干燥，最终得到负载小檗碱的硒纳米粒附着在益生菌表面的益生菌制剂。本发明制备的抗帕金森的益生菌制剂不仅提高益生菌分泌多巴的效率，而且可抑制多巴的自氧化进程，进而提高肠道中多巴的产量，使得多巴通过肠脑轴途径进入脑内，有效用于抗帕金森病药物中的应用，社会和经济效益显著。技术研发人员：冯倩华,刘佳,王晴,赵晓雯,姚雨琪,张佳,孙丽英受保护的技术使用者：郑州大学技术研发日：技术公布日：2024/6/11