一种瘿枯枣玫汤、基于响应面法的制备方法及应用与流程

本发明属于中医药，涉及一种瘿枯枣玫汤、基于响应面法的制备方法及应用。

背景技术：

1、结节性甲状腺肿是由于体内甲状腺激素分泌不足，导致甲状腺反复增生形成结节的一种疾病，在中医学中属于“瘿病”范畴。在我国，结节性甲状腺肿的发病率占甲状腺疾病的首位，应尽早地诊断和治疗，可增加治愈率，同时也可预防甲状腺癌的发生。

2、结节性甲状腺肿的治疗方法主要有：甲状腺激素治疗、手术治疗、131i治疗及微创介入治疗等。但无论是口服药物还是手术治疗，均风险较大，并发症较多，且容易复发的情况。而中医对结节性甲状腺肿的临床治疗有着用药简单、不需要手术的优势，逐渐成为治疗结节性甲状腺肿的首选治疗方式。

3、夏枯草自古就是中医临床常用的清肝火、散郁结的要药，具有清火，明目，散结，消肿之效，对治疗甲状腺疾病有良好作用。因此，治疗结节性甲状腺肿的中药多以夏枯草为君药，配以其他中药形成组方。然而，现有治疗结节性甲状腺肿的组方治疗范围有限，效果不佳。另外，对于治疗结节性甲状腺肿的组方，其提取工艺的不同会导致化学成分的组成及主要活性成分的含量存在显著的差异，这也会影响临床疗效，导致治疗效果较差。

技术实现思路

1、基于上述所要解决的技术问题，本发明提供一种瘿枯枣玫汤、基于响应面法的制备方法及应用。

2、为实现上述目的，本发明采用了以下技术方案：

3、第一方面，本技术提供一种瘿枯枣玫汤，该瘿枯枣玫汤的制备原料包括：夏枯草、陈皮、茯苓、酸枣仁、玫瑰花、西洋参、葛根、乌梅和莱菔子。

4、瘿枯枣玫汤的各制备原料分别具有如下作用：

5、夏枯草：具有清肝泻火、明目、散结消肿的功效，主要用于治疗目赤肿痛、目珠夜痛、头痛眩晕、瘰疬、瘿瘤、乳痈、乳癖、乳房胀痛。

6、陈皮：具有理气健脾、燥湿化痰的功效，主要用于治疗脘腹胀满、食少吐泻、咳嗽痰多。

7、茯苓：具有利水渗湿、健脾、宁心的功效，主要用于治疗水肿尿少、痰饮眩悸、脾虚食少、便溏泄泻、心神不安、惊悸失眠。

8、酸枣仁：具有养肝、宁心、安神、敛汗的功效，主要用于治疗虚烦不眠、惊悸怔忡、烦渴、虚汗。

9、玫瑰花：具有和血、行血、理气的功效，主要用于治疗风痹、肝、胃气痛、胸腹胀满和月经不调等。

10、西洋参：具有益肺阴、清虚火、生津止渴的功效，主要用于治疗肺虚久嗽、失血、咽干口渴、虚热烦倦。

11、葛根：具有解肌退热、透疹、生津止渴、升阳止泻、通经活络、解酒毒的功效，主要用于治疗外感发热头痛、项背强痛、口渴、消渴、麻疹不透、热痢、泄泻、眩晕头痛、中风偏瘫、胸痹心痛、酒毒伤中。

12、乌梅：具有敛肺、涩肠、生津、安蛔的功效，主要用于治疗肺虚久咳、久泻久痢、虚热消渴、蛔厥呕吐腹痛。

13、莱菔子：具有消食除胀、降气化痰的功效，主要用于治疗饮食停滞、脘腹胀痛、大便秘结、积滞泻痢、痰壅喘咳。

14、在本技术提供的瘿枯枣玫汤中，全方以行气活血、消肿散瘀、养阴化痰、软坚散结为主，诸药合用，共奏益气养阴、祛痰散结兼扶正之功。其中，以夏枯草为君药，清肝明目、散结消肿、保肝护肝；葛根、酸枣仁、玫瑰花为臣药，葛根增强君药夏枯草清肝活络的作用，酸枣仁、玫瑰花发挥疏肝解郁、和血理气的作用助夏枯草保肝散结；陈皮、茯苓、西洋参为佐，共同发挥理气、健脾、渗湿的作用，调和肝脾，保护脾胃；乌梅、莱菔子为使，乌梅味酸，引药入肝，收敛肝气，莱菔子消食除胀，降气化痰。本方君臣佐使配合得当，共同达到理气消瘿、疏肝健脾的效果。

15、在本技术中，瘿枯枣玫汤的制备原料按照质量包括：5-12g夏枯草、5-10g陈皮、8-15g茯苓、8-15g酸枣仁、3-6g玫瑰花、3-6g西洋参、8-15g葛根、5-10g乌梅和5-10g莱菔子。最为优选的，瘿枯枣玫汤的制备原料按照质量包括：9g夏枯草、7g陈皮、10g茯苓、10g酸枣仁、5g玫瑰花、5g西洋参、10g葛根、7g乌梅和7g莱菔子。

16、第二方面，本技术提供一种基于响应面法的瘿枯枣玫汤的制备方法，该方法包括：将夏枯草、陈皮、茯苓、酸枣仁、玫瑰花、西洋参、葛根、乌梅和莱菔子加入去离子水中，采用响应面法优化后的工艺条件进行浸泡、加热回流提取，过滤后得到瘿枯枣玫汤。

17、其中，响应面法优化工艺条件的过程包括：

18、s01：以葛根素、橙皮苷、迷迭香酸、人参皂苷rb1的提取率以及瘿枯枣玫汤的干膏得率为关键质量属性，以浸泡时间、溶剂用量、提取时间和提取次数为提取影响因素进行plackett-burman 实验设计，确定关键工艺参数；其中，所述关键工艺参数包括浸泡时间、提取时间和提取次数。

19、在本技术提供中，以葛根素、橙皮苷、迷迭香酸、人参皂苷rb1作为瘿枯枣玫汤的指标成分，通过指标成分提取率和瘿枯枣玫汤的干膏得率为关键质量属性对瘿枯枣玫汤的制备工艺参数进行响应面法优化。

20、其中，瘿枯枣玫汤的指标成分确定过程为：

21、（1）分别精密称取0.098mg葛根素、2.13mg橙皮苷、2.82mg迷迭香酸、4.06mg人参皂苷rb1，置于5ml量瓶中，加甲醇定容至刻度，分别精密移取上述对照品溶液适量，加甲醇稀释成系列质量浓度的对照品溶液。

22、（2）分别精密吸取不同质量浓度的系列对照品溶液，采用高效液相色谱法对对照品溶液进行测定，记录其峰面积，进行线性关系考察。其中，高效液相色谱条件为：色谱柱：ecosil c18色谱柱（250 mm×4.6 mm，5μm）；流动相：a为乙腈，b 为0.1%磷酸；检测波长为238 nm；柱温为30 ℃；进样量为5μl；流速为0.3ml/min，流动相洗脱梯度为：

23、0 min：10%a，90%b；10 min：15%a，85%b；

24、30 min：30%a，70%b；37 min：40%a，60%b；

25、40 min：80%a，20%b；45 min：90%a，10%b。

26、将对照品的质量浓度作为横坐标（x），峰面积作为纵坐标（y），绘制出标准曲线，得到葛根素、橙皮苷、迷迭香酸、人参皂苷rb1的回归方程分别为 y=0.0424x+0.0361，r=0.9999、y＝0.0173x＋0.0252，r=0.9997、y=0.0245x+0.0213，r=0.9996、y=0.0393x+0.0435，r=0.9994。结果表明，葛根素、橙皮苷、迷迭香酸、人参皂苷rb1分别在19.8~178.2ng、42.6~383.4ng、56.4~507.6ng、81.2~730.8ng线性关系良好。由此确定葛根素、橙皮苷、迷迭香酸、人参皂苷rb1作为瘿枯枣玫汤的指标成分。

27、确定好葛根素、橙皮苷、迷迭香酸、人参皂苷rb1作为瘿枯枣玫汤的指标成分后，依次进行瘿枯枣玫汤溶液的精密度、重复性、稳定性及加样回收率试验。试验过程中，采用高效液相色谱法按照上述色谱条件对瘿枯枣玫汤溶液进行检测，并分别测定葛根素、橙皮苷、迷迭香酸及人参皂苷rb1的保留时间和峰面积。结果表明，仪器精密度、重复性、含量测定方法准确度均良好（rsd 均小于3%），瘿枯枣玫汤溶液在24 h内稳定性良好。

28、瘿枯枣玫汤的干膏得率的测定包括：

29、s011：精密称取25ml瘿枯枣玫汤置于干燥至恒定质量的蒸发皿中，水浴蒸干后，放入105℃的电热鼓风干燥箱中干燥3h。

30、s012：干燥结束后，冷却，迅速称量；再置于105℃的电热鼓风干燥箱中干燥1h；重复干燥、冷却、称量过程，直至干燥至恒定质量，得到干膏质量。

31、s013：计算干膏得率为mv/(25m)，其中，m为25ml瘿枯枣玫汤的干膏质量，v为瘿枯枣玫汤总体积，m为药材质量。

32、在本技术提供中，以葛根素、橙皮苷、迷迭香酸、人参皂苷rb1的提取率以及瘿枯枣玫汤的干膏得率为关键质量属性，以浸泡时间、溶剂用量、提取时间和提取次数为瘿枯枣玫汤的提取影响因素，利用minitab 19 软件进行plackett-burman 实验设计，以便于从提取影响因素中筛选关键工艺参数。本技术中确定的关键工艺参数为浸泡时间、提取时间和提取次数。

33、在本技术中，去离子水的加入量为制备原料总质量的8-12倍量，过滤采用300目的尼龙筛网过滤。

34、s02：以葛根素、橙皮苷、迷迭香酸、人参皂苷rb1的提取率以及瘿枯枣玫汤的干膏得率的综合评分为评价指标，以所述关键工艺参数为自变量进行box-behnken design实验，得到实验结果。

35、其中，综合评分为葛根素提取率×30/最大葛根素提取率＋橙皮苷提取率×20/最大橙皮苷提取率＋迷迭香酸提取率×20/最大迷迭香酸提取率＋人参皂苷rb1提取率×20/最大人参皂苷rb1提取率＋干膏得率×10/最大干膏得率。

36、s03：采用design-expert 12 软件对实验结果进行模型拟合，得到二次多项式拟合方程为：

37、y=19.429+0.469951x1-0.002492x3+40.66662x4-0.000563x1x3-0.031986x1x4+0.059881x3x4-0.009409x12-0.000821x32-7.58551x42，其中，y为综合评分，x1为浸泡时间、x3为提取时间、x4为提取次数，r2= 0.966。

38、s04：根据所述二次多项式拟合方程确定最优工艺条件为：浸泡时间为22min、提取时间为65min、提取次数为3次。

39、根据所述二次多项式拟合方程确定最优工艺条件为：浸泡时间为22.46 min，提取时间为63.68 min，提取次数为2.87时，综合评分为83.6429。基于实际情况，确定浸泡时间为22min、提取时间为65min、提取次数为3次。

40、第三方面，本技术还提供一种应用，即瘿枯枣玫汤能够用于制备治疗结节性甲状腺肿的药物。

41、本发明具有以下有益效果：

42、1）本技术中的瘿枯枣玫汤中，以夏枯草为君药，清肝明目、散结消肿、保肝护肝；葛根、酸枣仁、玫瑰花为臣药，葛根增强君药夏枯草清肝活络的作用，酸枣仁、玫瑰花发挥疏肝解郁、和血理气的作用助夏枯草保肝散结；陈皮、茯苓、西洋参为佐，共同发挥理气、健脾、渗湿的作用，调和肝脾，保护脾胃；乌梅、莱菔子为使，乌梅味酸，引药入肝，收敛肝气，莱菔子消食除胀，降气化痰。全方以行气活血、消肿散瘀、养阴化痰、软坚散结为主，诸药合用，共奏益气养阴、祛痰散结兼扶正之功。

43、2）本技术采用plackett-burman 实验结合响应面法优化瘿枯枣玫汤的提取方法，通过实验设计、模型拟合、指标分析、试验验证，最后优化得到最佳提取工艺。这不仅能够对瘿枯枣玫汤活性成分进行最大程度的提取，还降低了试验成本，具有重要的研究意义。

44、3）基于响应面法制备得到的瘿枯枣玫汤能有效减轻模型大鼠甲状腺肿大面积，对结节性甲状腺肿患者有明显的疗效，应用效果好，具有重要的临床意义。