一种由次黄嘌呤核苷酸制备三磷酸腺苷的方法

专利名称：一种由次黄嘌呤核苷酸制备三磷酸腺苷的方法技术领域：本发明涉及生物化学领域，特别是一种三磷酸腺苷的制备方法。三磷酸腺苷(以下简称ATP)是一种核苷酸药物，它含有高能磷酸键，是能量转换器、贮存器，在人体能量代谢中起着重要的作用。临床上常用它做急救用药，也是重要的辅助用药。近年来开发了它的肠溶片剂，用做胃下垂的主治药物。ATP在食品中还可做熬合剂用。ATP的制备方法最早采用的是从兔肌中提取，或用菠菜的光合作用合成ATP。目前常用的生产方法是用一磷酸腺苷(AMP)和腺嘌呤核苷(AR)作原料，用酵母发酵法生产ATP，这种方法存在着成本高的问题。本发明的目的是提供一种利用次黄嘌呤核苷酸(IMP)作原料制备三磷酸腺苷的方法。本发明的方法为在葡萄糖、酵母、铵离子和镁离子存在下使次黄嘌呤核苷酸转化成一磷酸腺苷，然后使一磷酸腺苷通过酵母发酵转化成三磷酸腺苷。所述方法中的铵离子作为氨基的供体，特别优选使用氯化铵或氢氧化铵。所述镁离子起催化作用，可用氯化镁。其中IMP转化成AMP的反应温度优选为28～32℃，反应时间优选10～24小时，反应体系重量份数配方优选IMP0.1～0.2份，NH4OH(NH4Cl)0.02～0.1份，MgCl20.05～0.3份，葡萄糖0.6～1.5份，酵母3～4份。本发明方法的一磷酸腺苷转化成三磷酸腺苷的反应体系中，特别是含有葡萄糖、酵母、磷酸二氢钾和氯化镁，还可用氢氧化钠调PH，如调至PH7，该反应温度优选28～32℃，反应时间优选6～8小时，所述反应体系的重量份数配比优选为磷酸二氢钾0.5～1份，氯化镁0.05～0.1份，葡萄糖1～2份，酵母4～6份，AMP的量以0.1～0.2份IMP所转化成的量计。本发明的关键是IMP转化成AMP的步骤。在现有技术中，IMP转化生成AMP和GMP(鸟嘌呤核苷酸)，IMP转化成AMP的转化率只有50％左右。而在本发明的方法中IMP基本上只生成AMP，几乎没有GMP生成。这样使得低成本、高转化率地由IMP生产ATP成为可能，开辟了ATP生产的新的，可行途径。所以本方法使IMP生成AMP的转化率提高了近一倍，大大降低了ATP的生产成本。另外，本方法反应条件简单，反应速度较快。下面通过实施例进一步说明本发明。取IMP0.15克、NH4OH60μM、MgCl20.15克、酵母3.5克，混合后在30℃左右反应15小时，经后处理后然后加入0.75克磷酸二氢钾、0.08克氯化镁、1.5克葡萄糖，用氢氧化钠调PH为7，在水溶液中总体积10毫升，在30℃左右反应7小时。反应结束后通蒸汽加热(100℃)5～10分钟，离心(3000～5000转/分)5～10分钟，取上清液，用无离子水稀释3倍，上离子交换树脂柱进行分离。为得到适合针剂药检标准的ATP，用阴离子交换树脂(聚苯乙烯-二乙烯苯季胺型，交联度1×8，粒度100～200目)柱分离后，还需用硅藻土去热源。为得到适合片剂药检标准的ATP，用阴离子交换树脂柱分离后，再用阴柱(或好的活性炭柱)浓缩，洗脱下来即可用做压片。后处理法可采用现有技术的任何适用的方法，可参考“核苷酸类物质的生产和应用”资料汇编，科学出版社，1971。权利要求1.一种三磷酸腺苷的制备方法，其特征是在铵离子存在下使次黄嘌呤核苷酸转化成一磷酸腺苷，然后使一磷酸腺苷通过酵母发酵转化成三磷酸腺苷。2.如权利要求1的方法，其特征是次黄嘌呤核苷酸的反应体系中还有葡萄糖、酵母、镁离子。3.如权利要求1或2的方法，其特征是所述铵离子用氯化铵或氢氧化铵。4.如权利要求2的方法，其特征是所述镁离子用氯化镁。5.如权利要求1或2的方法，其特征是反应温度为28～32℃。6.如权利要求2的方法，其特征是次黄嘌呤核苷酸的反应体系重量份数配方为IMP0.1～0.2份，NH4OH(或NH4Cl)0.02～0.1份，MgCl20.05～0.3份，葡萄糖0.6～1.5份，酵母3～4份，反应温度为28～32℃，反应时间10～24小时。7.如权利要求1或2的方法，其特征是一磷酸腺苷转化成三磷酸腺苷的反应体系中，含有葡萄糖、酵母、磷酸二氢钾和氯化镁。8.如权利要求7的方法，其特征是一磷酸腺苷转化成三磷酸腺苷的反应体系的重量份数配比为磷酸二氢钾0.5～1份，氯化镁0.05～0.1份，葡萄糖1～2份，酵母4～6份，AMP的量以0.1～0.2份IMP所转化成的量计，反应温度为28～32℃，反应时间为6～8小时。9.如权利要求7的方法，其特征是AMP转化成ATP的反应体系用氢氧化钠调节PH值。10.如权利要求1或2的方法，其特征是转化得到ATP后，通蒸汽加热5～10分钟，离心(3000～5000转/分)5～10分钟，取上清液，用无离子水稀释后，上离子交换树脂柱进行分离。全文摘要本发明公开了一种用次黄嘌呤核苷酸生产三磷酸腺苷的方法。本方法为在铵离子、镁离子存在下使次黄嘌呤核苷酸以高转化率转化成一磷酸腺苷，然后经酵母发酵得到三磷酸腺苷。本发明的方法成本低、转化率高，开辟了三磷酸腺苷生产的新途径。文档编号C07H19/20GK1139114SQ95106298公开日1997年1月1日 申请日期1995年6月28日 优先权日1995年6月28日发明者陆传宗 申请人:陆传宗