赤藓糖醇诱导性启动子和使用其的目标物质的制造方法与流程

本发明涉及赤藓糖醇诱导性启动子和使用其的目标物质的制造方法。

背景技术：

1、木霉属菌能够大量生产纤维素酶、木聚糖酶等酶，作为纤维素分解酶生产用微生物比以前更引人注目(非专利文献1)。另外，在非专利文献2中记载了对于里氏木霉，利用其高的蛋白质生产能力，作为生产来自人或其它微生物的异种蛋白质的微生物得到了利用。

2、迄今为止，作为用于木霉属菌的目标蛋白质的基因的表达诱导的启动子，报告了烯醇化酶基因eno1的启动子、翻译延伸因子tef1的启动子等组成型表达启动子等(非专利文献3)。然而，这些启动子的基因表达诱导能不高，作为目标物质的表达用的启动子不能说是充分的。

3、作为基因表达诱导能更高的木霉属启动子，使用了作为纤维素酶基因的cbh1、cbh2的启动子、木聚糖酶基因xyn3的启动子等(非专利文献3)。然而，这些启动子在纤维素酶生产条件下被活化，因此在使这些启动子活化的情况下，同时存在于木霉属菌的细胞内的多个纤维素酶基因进行表达而大量生产纤维素酶，因此无法单独生产目标蛋白质。通过使木霉属菌的纤维素酶基因缺损，能够抑制纤维素酶的生产，但使基因组上的多个纤维素酶基因全部缺损是非常困难的。另外，使主要的纤维素酶基因缺损时，纤维素酶生产条件下的木霉属菌的生长显著变差。

4、(非专利文献1)化学和生物,2012,50(8):592-599,2012

5、(非专利文献2)appl biochem biotechnol,2011,165(5-6):1169-77

6、(非专利文献3)front bioeng biotechnol,2018,11(6):article 135,doi:10.3389/fbioe.2018.00135

技术实现思路

1、在一个方式中，本发明提供一种赤藓糖醇诱导性启动子，其中，其由选自下述(a)～(c)中的dna构成：

2、(a)由序列号1～4中的任意核苷酸序列构成的dna；

3、(b)由与序列号1～4中的任意核苷酸序列具有至少90％的同一性的核苷酸序列构成的dna；和

4、(c)由对序列号1～4中的任意核苷酸序列缺失、取代、添加或插入有1个或多个核苷酸的核苷酸序列构成的dna。

5、在另一个方式中，本发明提供一种表达载体，其中，包含上述赤藓糖醇诱导性启动子。

6、在另一个方式中，本发明提供一种赤藓糖醇诱导性基因表达盒，其中，包含：编码目标物质或其合成所涉及的酶的基因；和上述赤藓糖醇诱导性启动子。

7、在另一个方式中，本发明提供转化木霉属菌细胞，其中，包含上述表达载体或上述基因表达盒。

8、在另一个方式中，本发明提供一种目标物质的制造方法，其中，包括将上述转化木霉属菌细胞在含有赤藓糖醇的培养基中进行培养的步骤。

9、在另一个方式中，本发明提供选自上述(a)～(c)中的dna在作为赤藓糖醇诱导性启动子中的用途。

技术特征：

1.一种赤藓糖醇诱导性启动子，其中，

2.一种表达载体，其中，

3.如权利要求2所述的表达载体，其中，

4.一种赤藓糖醇诱导性基因表达盒，其中，

5.一种转化木霉属菌细胞，其中，

6.如权利要求5所述的转化木霉属菌细胞，其中，

7.一种目标物质的制造方法，其中，

8.如权利要求7所述的制造方法，其中，

9.选自下述(a)～(c)中的dna在作为赤藓糖醇诱导性启动子中的用途：

10.如权利要求9所述的用途，其中，

11.权利要求3所述的表达载体或权利要求4所述的赤藓糖醇诱导性基因表达盒在用于表达编码目标物质或其合成所涉及的酶的基因中的用途。

12.权利要求5或6所述的转化木霉属菌细胞在用于制造目标物质中的用途。

技术总结本发明提供一种由选自下述(a)～(c)中的DNA构成的赤藓糖醇诱导性启动子：(a)由序列号1～4中的任意核苷酸序列构成的DNA；(b)由与序列号1～4中的任意核苷酸序列具有至少90％的同一性的核苷酸序列构成的DNA；和(c)由对序列号1～4中的任意核苷酸序列缺失、取代、添加或插入有1个或多个核苷酸的核苷酸序列构成的DNA。技术研发人员：一瀬樱子,柴田望,高桥史员受保护的技术使用者：花王株式会社技术研发日：技术公布日：2024/6/18