一种用于药物性肝损伤早期诊断的近红外探针及制备方法

本发明属于生物医药，具体涉及一种用于药物性肝损伤早期诊断的近红外探针及其制备方法。

背景技术：

1、药物性肝损伤(dili)是引起急性肝损伤(ali)的主要原因，一旦进展为ali，短期死亡率较高，在没有肝移植的情况下一个月生存率仅为34％(pmid：20949552)。它既是临床关注的问题，也是药物开发失败或撤市的常见原因(pmid:25352323)。由于药物性肝损伤的临床表现多样且缺乏特异性，没有明确的潜伏期，早期缺乏确诊的血生化指标及肝脏组织病理，容易造成临床诊断的滞后，甚至造成误诊及漏诊，因此药物性肝损伤的实际发生率可能远高于目前所估计的数据(pmid:30742832)。n-乙酰半胱氨酸nac被临床用作治疗aili的唯一标准治疗药物，然而临床上观察到nac在药物性肝损伤的早期治疗更为有效，而对较晚使用的病人则无显著疗效(pmid:27474782)。因此，如果能在早期检出并加以治疗，可极大提高患者生存率，改善患者生存质量。

2、药物性肝损伤伴随着严重的肝脏损伤，同时大量单核细胞来源的巨噬细胞会聚集在受损肝脏(pmid:22821628)。细胞表面受体甲酰肽受体1(fpr1)是一种g蛋白偶联受体，介导巨噬细胞的趋化、吞噬和炎症过程，高表达于中性粒细胞、骨髓多形核细胞，并显示了物种之间的序列一致性，包括人、小鼠、黑猩猩、恒河猴、大鼠和兔(pmid:35712659)。fpr1是tafa4的受体，可以诱导巨噬细胞的趋化活性(pmid：25109685)。

3、近红外荧光成像因其快速、准确和非破坏性等特点可以实现深层组织的成像，应用于医学诊断领域。如果能够实现药物性肝损伤的近红外荧光成像，将有利于药物性肝损伤的早期诊断。然而，现有技术中尚缺乏能够对药物性肝损伤进行诊断的靶向近红外探针。因此，设计一种针对药物性肝损伤的靶向近红外探针，是解决药物性肝损伤缺乏早期诊断的关键。

技术实现思路

1、针对现有技术的问题，本发明提供一种用于药物性肝损伤早期诊断的近红外探针及其制备方法。

2、一种用于肝损伤诊断的近红外探针，它是连接有染料分子的tafa4蛋白。

3、优选的，所述tafa4蛋白的氨基酸序列如seq id no.1所示。

4、优选的，所述染料分子选自cy系列、icg系列、cf系列、alexa fluor系列、dylight系列或ir dye系列中的至少一种。

5、本发明还提供tafa4蛋白在制备上述用于肝损伤诊断的近红外探针中的用途。

6、本发明还提供上述近红外探针的制备方法，包括如下步骤：

7、步骤1，制备、纯化tafa4蛋白；

8、步骤2，将所述tafa4蛋白与染料分子连接，即得。

9、优选的，步骤1具体包括：

10、步骤1.1，将tafa4蛋白的编码基因构建在重组质粒上；

11、步骤1.2，将所述重组质粒转入工程菌，得到重组菌株；

12、步骤1.3，对重组菌株使用iptg诱导表达后提取含tafa4蛋白的蛋白液，纯化，即得tafa4蛋白。

13、优选的，步骤1.1中，所述编码基因的核苷酸序列如seq id no.2所示；所述重组质粒的载体质粒选自pqe30；

14、步骤1.2中，所述工程菌选自大肠杆菌m15；

15、步骤1.3中，所述iptg在培养基中的终浓度为0.05mmol/l；诱导的温度条件为28-37℃；诱导的时间为4-16h。

16、本发明还提供上述近红外探针在制备肝损伤诊断试剂盒中的用途。

17、本发明还提供一种肝损伤诊断试剂盒，它包括上述近红外探针。

18、优选的，所述试剂盒用于近红外荧光成像；

19、和/或，所述试剂盒用于药物性肝损伤的早期诊断；

20、和/或，所述试剂盒用于人或实验动物。

21、本发明将tafa4蛋白标记cyanine染料，构建用于药物性肝损伤早期诊断的荧光探针，利用该荧光探针进行近红外荧光成像，可以更为快速地定位受损肝脏，有助于肝损伤的早期发现。

22、采用上述技术方案后，本发明的有益效果是：

23、1、本发明提供了用于药物性肝损伤早期诊断的近红外探针，弥补了当前临床缺乏早期诊断药物性肝损伤的现状，减少药物性肝损伤患者进展为急性肝损伤的几率；

24、2、tafa4蛋白使得探针对药物性肝损伤具有很高的亲和力，因此，在利用近红外成像观察病变时，来自其他器官组织的干扰信号少，提高靶向的准确性。

25、显然，根据本发明的上述内容，按照本领域的普通技术知识和惯用手段，在不脱离本发明上述基本技术思想前提下，还可以做出其它多种形式的修改、替换或变更。

26、以下通过实施例形式的具体实施方式，对本发明的上述内容再作进一步的详细说明。但不应将此理解为本发明上述主题的范围仅限于以下的实例。凡基于本发明上述内容所实现的技术均属于本发明的范围。

技术特征：

1.一种用于肝损伤诊断的近红外探针，其特征在于：它是连接有染料分子的tafa4蛋白。

2.按照权利要求1所述的近红外探针，其特征在于：所述tafa4蛋白的氨基酸序列如seqid no.1所示。

3.按照权利要求1所述的近红外探针，其特征在于：所述染料分子选自cy系列、icg系列、cf系列、alexa fluor系列、dylight系列或ir dye系列中的至少一种。

4.tafa4蛋白在制备权利要求1-3任一项所述近红外探针中的用途。

5.权利要求1-3任一项所述近红外探针的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：

6.按照权利要求5所述的制备方法，其特征在于：步骤1具体包括：

7.按照权利要求6所述的制备方法，其特征在于：步骤1.1中，所述编码基因的核苷酸序列如seq id no.2所示；所述重组质粒的载体质粒选自pqe30；

8.权利要求1-3任一项所述近红外探针在制备肝损伤诊断试剂盒中的用途。

9.一种肝损伤诊断试剂盒，其特征在于，它包括权利要求1-3任一项所述近红外探针。

10.按照权利要求9所述的试剂盒，其特征在于：所述试剂盒用于近红外荧光成像；

技术总结本发明属于生物医药技术领域，具体涉及一种用于药物性肝损伤早期诊断的近红外探针及其制备方法。本发明将TAFA4蛋白标记染料分子，构建了用于药物性肝损伤早期诊断的荧光探针，利用该荧光探针进行近红外荧光成像，可以更为快速地定位受损肝脏，有助于肝损伤的早期发现。基于此，本发明首次提供了可以实现药物性肝损伤早期诊断的探针和方法，具有很好的应用前景。技术研发人员：李志慧,万琳,李晨,赵佳莹受保护的技术使用者：四川大学华西医院技术研发日：技术公布日：2024/6/18