一种基于特征标记物鉴别九龙藤蜂蜜的方法

本发明属于蜂蜜质量检测，具体涉及一种基于特征标记物鉴别九龙藤蜂蜜的方法。

背景技术：

1、九龙藤bauhinia championii(benth.)benth，亦称龙须藤、山道藤、乌藤或过岗龙，在桂北地区有广泛分布，以阳朔、平乐、恭城、全州、兴安和灵川等地分布最多，其中仅阳朔县九龙藤蜜源基地面积就有150多万亩，年泌蜜量5000余吨。九龙藤是桂北地区秋季重要野生蜜源植物，由于桂北地区山清水秀，空气清新，自然生态保护非常好，无污染，且九龙藤是野生蜜源植物，没有施用农药，所以桂北地区的九龙藤蜜是难得的绿色食品，愈来愈受到消费者的喜爱。九龙藤蜂蜜呈琥珀色,有一种特殊的药草香味，味道甜中微带清苦，舒口爽喉，回味悠长。

2、蜂蜜中的香气物质是区分蜂蜜植物源的特征指标之一，因此，发现与蜂蜜品种密切相关的特定挥发性化合物有利于鉴别蜂蜜植物源。国外大量研究表明，同一鲜花、花蜜及蜂蜜中具有相同的挥发性化合物和/或其代谢物，故找出其共有的挥发性化合物可作为蜂蜜的花源标记物。据报道，某些蜂蜜类型可通过一种特征化合物鉴定，如邻氨基苯甲酸甲酯和异佛尔酮可分别作为柑橘蜂蜜及杨梅蜂蜜、杜鹃花科蜂蜜的化学标记物。除此之外，某些挥发性化合物存在于多种蜂蜜中：苯乙醛对栗蜜、桉树蜜、薰衣草蜜的香气具有贡献作用；在薰衣草蜜和金合欢蜜中均含有庚醛；壬醛存在于杜鹃花蜜、荆条蜜、桉树蜜和蜜露中，因此绝大多数的蜂蜜品种需多种特征化合物才可以实现鉴别。

3、近年来，由于蜂蜜植物来源和地理来源的多样性使其营养成分不尽相同，产品质量和蜂蜜价值存在差异。受经济利益的趋使，市场上频繁出现蜂蜜掺假和以次充好的现象，导致蜂蜜品种、产地标识和市场价格混乱，严重损害了消费者的利益和蜂蜜市场的健康发展。因此，建立有效的九龙藤蜂蜜质量标准体系是急需解决的技术问题。

4、现有技术公开了t/gxas522—2023阳朔九龙藤蜂蜜团体标准，但该标准并未采用多种特征化合物作为九龙藤蜂蜜的鉴别指标，不够科学合理，可操作性不强。

5、本研究采用gc-ms/ms技术对6批九龙藤花和14批九龙藤蜂蜜进行挥发性成分测定，明确九龙藤蜂蜜的挥发性特征标记物，为九龙藤蜂蜜准确溯源鉴别与质量标准建立提供理论依据与数据支持。

技术实现思路

1、本发明旨在解决上述技术问题，提供一种基于特征标记物鉴别九龙藤蜂蜜的方法，所述方法操作简单，灵敏度和准确度高，可以作为九龙藤蜂蜜的鉴别依据。

2、本发明的技术方案为：

3、一种基于特征标记物鉴别九龙藤蜂蜜的方法，根据待测蜂蜜中是否含有苯甲醛、2-(5-甲基-5-乙烯基四氢呋喃-2-基)丙-2-基碳酸乙酯、3,4,5-三甲基苯酚、油酸酰胺、2,4,6-三甲基苯酚特征标记物来鉴别九龙藤蜂蜜。

4、进一步地，包括以下步骤：

5、(1)通过分析对比不同产地的九龙藤蜂蜜，确定九龙藤蜂蜜的特征标记物；

6、(2)将样品蜂蜜进行前处理后，采用gc-ms进行分析，检测样品蜂蜜是否含有苯甲醛、2-(5-甲基-5-乙烯基四氢呋喃-2-基)丙-2-基碳酸乙酯、3,4,5-三甲基苯酚、油酸酰胺、2,4,6-三甲基苯酚特征标记物来鉴别样品蜂蜜是否为九龙藤蜂蜜，从而鉴定九龙藤蜂蜜的真伪。

7、进一步地，步骤(1)中，九龙藤蜂蜜的特征标记物的确定过程为：采用gc-ms分析不同产地的九龙藤蜂蜜挥发性成分，将九龙藤蜂蜜中特征标记物的碎片离子信息进行表征，确定特征标记物为苯甲醛、2-(5-甲基-5-乙烯基四氢呋喃-2-基)丙-2-基碳酸乙酯、3,4,5-三甲基苯酚、油酸酰胺、2,4,6-三甲基苯酚。

8、进一步地，所述前处理为取九龙藤蜂蜜，加水提取挥发油，放冷至室温，收集挥发油，加适量乙酸乙酯溶解，用无水硫酸钠脱水，离心，取上清液，冷藏，备用。

9、进一步地，所述前处理为取九龙藤蜂蜜200ml，加水1000ml，按照《中国药典》(2020年版)挥发油测定法提取6h，放冷至室温，收集挥发油，加适量乙酸乙酯溶解，用无水硫酸钠脱水，离心，取上清液，冷藏，备用。

10、进一步地，所述gc-ms的气相色谱条件为：色谱柱：hp-5ms弹性石英毛细管色谱柱(30m×0.25mm，0.25μm)；程序升温：初始温度为70℃，保持1min，以10℃/min升至170℃，保持2min，以15℃/min升至240℃，保持5min，最后以20℃/min升至260℃，保持8min；载气为he气；分流比20∶1；流量：1.0ml/min；进样口温度：250℃；气化温度：250℃；进样量：1.0μl；溶剂延迟：3.5min。

11、进一步地，所述gc-ms的质谱条件为：电离方式ei(70ev)；离子源温度为230℃；质谱接口温度为300℃；四级杆温度为150℃；谱库检索nist17库；质量扫描范围为50-400u。

12、由于采用上述技术方案，本发明的有益效果为：

13、现有技术相比，本发明提供的一种基于特征标记物鉴别九龙藤蜂蜜的方法，以苯甲醛、2-(5-甲基-5-乙烯基四氢呋喃-2-基)丙-2-基碳酸乙酯、3,4,5-三甲基苯酚、油酸酰胺、2,4,6-三甲基苯酚特征标记物作为九龙藤蜂蜜中的特征标记物，对于准确鉴别九龙藤蜂蜜具有重要意义，且操作简单，灵敏度和准确度高，具有广阔的应用前景。

技术特征：

1.一种基于特征标记物鉴别九龙藤蜂蜜的方法，其特征在于：根据待测蜂蜜中是否含有苯甲醛、2-(5-甲基-5-乙烯基四氢呋喃-2-基)丙-2-基碳酸乙酯、3,4,5-三甲基苯酚、油酸酰胺、2,4,6-三甲基苯酚特征标记物来鉴别九龙藤蜂蜜。

2.如权利要求1所述的基于特征标记物鉴别九龙藤蜂蜜的方法，其特征在于，包括以下步骤：

3.如权利要求1所述的基于特征标记物鉴别九龙藤蜂蜜的方法，其特征在于：步骤(1)中，九龙藤蜂蜜的特征标记物的确定过程为：采用gc-ms分析不同产地的九龙藤蜂蜜挥发性成分，将九龙藤蜂蜜中特征标记物的碎片离子信息进行表征，确定特征标记物为苯甲醛、2-(5-甲基-5-乙烯基四氢呋喃-2-基)丙-2-基碳酸乙酯、3,4,5-三甲基苯酚、油酸酰胺、2,4,6-三甲基苯酚。

4.如权利要求2所述的基于特征标记物鉴别九龙藤蜂蜜的方法，其特征在于，所述前处理为：取九龙藤蜂蜜，加水提取挥发油，放冷至室温，收集挥发油，加适量乙酸乙酯溶解，用无水硫酸钠脱水，离心，取上清液，冷藏，备用。

5.如权利要求5所述的基于特征标记物鉴别九龙藤蜂蜜的方法，其特征在于，所述前处理为：取九龙藤蜂蜜200ml，加水1000ml，按照《中国药典》(2020年版)挥发油测定法提取6h，放冷至室温，收集挥发油，加适量乙酸乙酯溶解，用无水硫酸钠脱水，离心，取上清液，冷藏，备用。

6.如权利要求2所述的基于特征标记物鉴别九龙藤蜂蜜的方法，其特征在于：所述gc-ms的气相色谱条件为：色谱柱：hp-5ms弹性石英毛细管色谱柱(30m×0.25mm，0.25μm)；程序升温：初始温度为70℃，保持1min，以10℃/min升至170℃，保持2min，以15℃/min升至240℃，保持5min，最后以20℃/min升至260℃，保持8min；载气为he气；分流比20∶1；流量：1.0ml/min；进样口温度：250℃；气化温度：250℃；进样量：1.0μl；溶剂延迟：3.5min。

7.如权利要求2所述的基于特征标记物鉴别九龙藤蜂蜜的方法，其特征在于：所述gc-ms的质谱条件为：电离方式ei(70ev)；离子源温度为230℃；质谱接口温度为300℃；四级杆温度为150℃；谱库检索nist17库；质量扫描范围为50-400u。

技术总结本发明属于蜂蜜质量检测技术领域，具体涉及一种基于特征标记物鉴别九龙藤蜂蜜的方法，所述方法根据待测蜂蜜中是否含有苯甲醛、2‑(5‑甲基‑5‑乙烯基四氢呋喃‑2‑基)丙‑2‑基碳酸乙酯、3,4,5‑三甲基苯酚、油酸酰胺、2,4,6‑三甲基苯酚特征标记物来鉴别九龙藤蜂蜜。本发明对于准确鉴别九龙藤蜂蜜具有重要意义，且操作简单，灵敏度和准确度高，具有广阔的应用前景。技术研发人员：银胜高,岑燕霞,陈燕燕,陈诗曼,李耀华,谢洁兰,银倍侨,陆海琳,王青,黄麒受保护的技术使用者：广西中医药大学技术研发日：技术公布日：2024/7/25