MED12作为免疫治疗靶点在筛选治疗胰腺癌的药物中的应用

本发明属于生物医药领域，涉及免疫治疗筛选靶点，具体来说是med12作为免疫治疗筛选靶点在治疗胰腺癌的中的应用。

背景技术：

1、免疫疗法是一种增强患者自身免疫系统以消除癌细胞的癌症治疗方案，通过主动或被动方式使机体产生肿瘤特异性应答，发挥其抑制和杀伤肿瘤细胞功能的治疗方法。免疫治疗主要包括肿瘤疫苗治疗、溶瘤病毒治疗、树突状细胞免疫疗法（dc疗法）、过继细胞疗法(act)、抗体-药物偶联物（adc）和免疫检查点抑制剂(icis)等。其中，利用pd-1和pd-l1的icis是迄今为止应用最广和最成功的免疫治疗方法。免疫检查点抑制剂疗法在众多恶性实体瘤中都具有非常显著的疗效，能有效抑制肿瘤生长，延长患者的生存期。免疫检查点抑制剂的作用机制是主要通过对抗ctla-4，pd-1或pd-l1等免疫抑制性受体，恢复患者t细胞的免疫活性，从而增强抗肿瘤免疫反应。目前研究发现，对pd-1抗体，pd-l1抗体响应好的人群主要包括肿瘤基因突变负荷tmb高，肿瘤组织中浸润大量免疫细胞，微卫星不稳定（msh-i）及患者肿瘤大小较小、年纪较轻、身体状况较好等。

2、作为“癌中之王”的胰腺癌，由于其肿瘤突变负荷低、免疫原性差、高免疫抑制性和高纤维化的肿瘤微环境，而呈现出典型的“冷肿瘤”特征。目前免疫治疗在胰腺癌的应用还存在很大的挑战。以免疫检查点抑制剂为代表的免疫治疗在胰腺癌中几乎全军覆没，大多在i、ii期临床试验中即宣告失败。目前在胰腺癌中nccn指南仅推荐帕博利珠单抗可作为msi-h（微卫星高度不稳定）或dmmr（错配修复缺陷）的晚期胰腺癌患者的一线、二线治疗，但这部分患者在胰腺癌中只有不到1%。鉴于免疫检查点抑制剂在其他癌种中的有效性，以及胰腺癌的传统治疗的局限性，探索免疫治疗在胰腺癌中的应用具有重要意义。

3、目前的研究已经表明肿瘤内源性的表观调控因子在重塑免疫微环境中起到了非常关键的作用，抑制setdb1、kdm5b，phf8等表观调控因子能有效的增强免疫检查点抑制剂在黑色素瘤，结直肠癌中的有效性。

4、med12作为重要的表观调控分子，在以往报道的文献中， med12缺陷能通过tgf-b信号通路诱导肿瘤的上皮间质转化表型，促进肿瘤进展，从而导致化疗耐药。在对表观遗传库在胰腺癌中的免疫压力筛选后，我们的筛选结果表明 med12缺陷具有重塑免疫微环境的作用，在后续的实验中充分验证了med12在胰腺癌肿瘤细胞中的缺失能有效促进cd8+t细胞的浸润且增强免疫检查点抑制剂在胰腺癌中的响应性，显著延长患者的生存期。

5、人med12由2177氨基酸组成，我们已经证实med12在胰腺癌导管细胞中表达具有较大差异性。 med12基因位于人x染色体正义链上，其位点信息如下；homo sapienschromosome x, assembly grch38.p14, nc_000023.11：其转录本（nm_005120.3）（mrna）序列如seq id no.1所示；其蛋白氨基酸序列如seq id no.2所示。

6、人异染色质蛋白hp1a作为异染色质蛋白三大组分之一，通过锚定h3k9me2/3在异染色质上来维持异染色质的稳定性， cbx5(编码hp1a)缺失后，与 med12缺失引起的功能变化高度一致。hp1a由191氨基酸组成，我们已经充分论证med12通过稳定hp1a来抑制逆转录病毒的激活作用， cbx5基因(编码hp1a)位于人12号染色体反义链上，其位点信息如下；homosapiens chromosome 12，assembly grch38.p14，nc_000012.12：其转录本（nm_001127321.1） （mrna）序列如seq no.3所示；其氨基酸序列如seq id no.4所示。

技术实现思路

1、针对现有技术中的上述技术问题，本发明提供了med12作为免疫治疗靶点在筛选治疗胰腺癌的药物中的应用，所述的这种应用要解决现有技术中的药物对于治疗胰腺癌的效果不佳的技术问题。

2、本发明还提供了med12作为免疫治疗靶点在筛选治疗胰腺癌的药物中的应用，所述的med12的氨基酸序列如seq id no.2所示。

3、进一步的，med12的免疫治疗是通过调控hp1a 实现的。

4、本发明还提供了免疫治疗药物或者化疗药物联合靶向抑制med12的药物在制备治疗胰腺癌的药物中的用途，所述的med12的氨基酸序列如seq id no.2所示。

5、进一步的，免疫治疗药物为pd-1单克隆抗体。

6、本发明还提供了med12在治疗胰腺癌中作为免疫治疗筛选靶点的生物标记物中的用途。

7、本发明还提供了med12在治疗胰腺癌中作为免疫治疗筛选靶点的生物标记物在制备检测试剂盒中的用途。

8、本发明还提供了一种检测试剂盒，其特征在于，含有检测med12的试剂，med12低表达，则患者对免疫抑制剂的响应更好。

9、本发明还提供了靶向抑制med12的药物在制备治疗胰腺癌的药物中的用途，所述的med12的氨基酸序列如seq id no.2所示。

10、本发明还提供了med12在制备胰腺癌的治疗中的筛选指标的用途，med12低表达，则患者对免疫抑制剂的响应更好。

11、本发明提供了rna聚合酶ii的主要组成元件之一的med12为筛选适用免疫抑制剂pd-1单克隆抗体在胰腺癌患者中的应用提供依据。med12在人和小鼠中具有高度同源性，本发明证实了在人和小鼠的胰腺癌细胞中缺失 med12 能增强胰腺癌细胞的免疫原性。

12、小鼠在体实验表明， med12缺失的肿瘤中能浸润更多的肿瘤杀伤性t细胞，且这群t细胞具有更强的细胞因子分泌能力和增殖能力。 med12的缺失能有效促进pd-1单克隆抗体对肿瘤的抑制作用，且明显延长荷瘤小鼠生存期。

13、在临床回顾性研究中发现，未经过免疫治疗的人群中，med12低表达的患者癌旁组织浸润的cd8+t细胞更多；在化疗与pd-1单克隆抗体联合治疗的患者中发现，对抑制剂响应更好的患者普遍低表达med12，同时med12低表达的患者生存期更长。

14、med12的功能在人和小鼠中是高度一致的。这些数据表明，med12能作为一个筛选指标指导免疫抑制剂在胰腺癌中的应用。同时靶向med12也有望增强icb(immunecheckpoint blockade)是指免疫检查点抑制剂治疗)等免疫治疗的疗效。med12能作为一个筛选指标指导免疫抑制剂在胰腺癌中的应用。同时靶向med12也有望增强icb等免疫治疗的疗效。

15、实验证明，在小鼠模型中，med12在肿瘤细胞中缺失能有效促进cd8+t细胞在肿瘤微环境中的累积，且这群cd8+t细胞的肿瘤杀伤功能和增殖能力都显著提高。在经过pd-1单克隆抗体治疗后， med12缺陷的肿瘤能被有效抑制，且这部分荷瘤小鼠的生存期明显延长。

16、本发明为胰腺癌的免疫治疗提供了新的靶点。机制研究表明， med12缺失后，异染色质蛋白1a（hp1a）的蛋白水平下降，从而减弱h3k9me3的抑制作用，进一步促进逆转录病毒的转录水平，激活逆转录病毒元件，最终介导i/iii干扰素途径激活。促进肿瘤细胞表面抗原提呈分子mhc-i的表达大幅度上调，从而增加cd8+t细胞对肿瘤的识别与杀伤作用，也正因为cd8+t细胞在肿瘤微环境的聚集使得pd-1单克隆抗体的有效性增强。