一种基于气质联用技术表征包含淫羊藿的中药复方中挥发性成分的方法及其应用与流程

本发明涉及医药，具体涉及一种基于气质联用技术表征包含淫羊藿的中药复方中挥发性成分的方法及其应用。

背景技术：

1、气相色谱技术(gas chromatography technology，gc)是以气体为流动相，利用试样中各组份在流动相和固定相之间的分配系数不同，实现对各组份分离的色谱分离技术，具有柱效高、峰容量大及灵敏度高的特点。主要适用于分析分子量较小(一般小于400)，沸点较低(一般低于500℃)，可挥发并且对热稳定的化合物。由于其具有分离效率高、分析速度快和灵敏度高等优点，因此广泛地应用于中药成分分析、食品安全、农药分析、环境检测等各个领域。常用的检测器主要有氢火焰离子化检测器(fid)、电子俘获检测器(ecd)、火焰光度检测器(fpd)、脉冲火焰光度检测器和(pfpd)、氮磷检测器npd)和热导池检测器(tcd)等。八十年代以后，又发展了红外光谱检测器(ftir)和原子发射检测器(aed)、表面离子检测器(surface ionization detector，sid)。

2、质谱(mass spectrometry，ms)是一种定性能力非常强的分析工具，通常由进样器、离子源，质量分析器，离子检测器和真空系统几部分组成。化合物通过进样器进入质谱的离子源以后，在离子源内分子裂解成离子。离子再进入质量分析器，按质量不同进行分离。通过检测器对离子进行计数，每个质量的离子均产生一个正比于总离子数的信号。最后，将所有离子的质量及其丰度作图，得到每种化合物的特征谱图。因为所有的化合物均可以被裂解，所以质谱可以检测所有的化合物。常用的质谱分析器主要包括单个四极杆分析器、三重四极杆分析器、离子阱分析器、飞行时间质谱分析器。

3、气相色谱-质谱(gas chromatography-mass spectrometry，gc-ms)结合了色谱强大的分离能力与质谱优越的定性功能。具有灵敏度高，分析速度快，样品消耗量少等优点，并能获得丰富结构信息，已成为了一种对药用植物进行在线分析的强有力工具，尤其适用于天然药物中低沸点、含量少、难分离或在分离过程中易被忽略的有效成分。

4、传统的gc-ms主要是一维的gc和单ms联用。根据质量分析器工作原理不同，气相色谱和质谱联用仪可分为:气相色谱-单四级杆质谱、离子气相色谱质谱和气相色谱-飞行时间质谱等几种。20世纪80年代初，在传统的gc-ms的基础上，发展了气相色谱-串联质谱(gc-ms/ms)分析技术。在gc-ms/ms中，串联的ms可以是相同类型的ms串联，如气相色谱离子阱串联质谱，气相色谱三重四级杆串联质谱等；也可以是不同性质的ms串联，如气相色谱-四级杆-飞行时间串联质谱。同gc-ms相比，gc-ms/ms灵敏度更高，基质干扰更小，定性定量更加准确，可同时进行上百种不同成分的分离。

5、气相-三重四级杆串联质谱(liquie chromatography-triple quadrupole-massspectrometry)通过分析比对已知化合物的色谱及质谱特征，可对天然药物提取物中的已知、未知结构的成分进行定性定量分析；可以同时得到化合物的保留时间、分子量及特征结构碎片等丰富的信息，是组分复杂样品和微量样品分离分析最有力的研究手段。中药药物成分复杂多样，分离提纯难度大，气质联用技术对样品不需要进行繁琐和复杂的前处理，因此在中药成分分析研究得到广泛应用，而且能够通过串联质谱给出的结构信息推测某些未知成分，对下一步研究工作具有指导意义，加快寻找先导化合物的分析途径提供了一个便捷高效、切实可行的分析手段。气质联用技术作为比较成熟的技术，目前已在生化分析、天然产物分析、药物和保健食品分析以及环境污染物分析等许多领域得到了广泛的应用。

6、包含淫羊藿的中药复方中含挥发性成分的药材占比较少，且为水煎液干燥后所得，所以挥发性成分含量低，导致其检出困难，常规方法难以进行分析，并且现有技术中未见基于气质联用技术表征包含淫羊藿的中药复方中挥发性成分的方法及其应用的相关报道。

技术实现思路

1、基于此，本发明提供了一种基于气质联用技术表征包含淫羊藿的中药复方中挥发性成分的方法，该方法包括如下步骤：

2、(1)制备包含淫羊藿的中药复方供试品溶液；以及

3、(2)对该供试品溶液应用气相-三重四级杆-串联质谱联用仪对该中药复方供试品溶液中的挥发性成分进行检测：

4、其中，该检测的色谱条件为：采用毛细管柱，柱温：初始温度设置为60℃，保持2min；以8℃/min升至140℃，保持3min；然后以3℃/min升至210℃，保持3min；再以5℃/min升至250℃，保持5min；总分析时间为55min；进样口温度设置为200～300℃，柱流量为0.5～2.0ml/min，总流量为15～35ml/min，尾吹气流速1～10ml/min；

5、其中，该检测的质谱条件为：离子源温度设置为250℃，接口温度设置为250℃，溶剂切除时间为3min，光电倍增管电压为0.8kv，数据导出5min后开始，质量扫描范围设置为50～500amu，扫描间隔0.20s。

6、进一步地，该供试品溶液的制备方法包括：称取适量的中药复方制剂，研磨成粉末，置于适当体积的容器之中，加入第一溶剂与玻璃珠数粒，振摇混合后，连接挥发油测定器与回流冷凝管，自冷凝管上端加水使充满挥发油测定器的刻度部分，并溢流入烧瓶时为止，置电热套中或用其他适宜方法缓缓加热至沸，并保持微沸约5小时，至测定器中油量不再增加，停止加热，放置片刻，开启测定器下端的活塞，将水缓缓放出，至油层上端到达刻度0线上面5mm处为止，放置1小时以上，再开启活塞使油层下降至其上端恰与刻度0线平齐，干燥，得到所述供试品溶液。

7、进一步地，该第一溶剂为水，例如蒸馏水或纯净水。

8、进一步地，该中药复方制剂与该第一溶剂之间的质量/体积(g/ml)之比值为0.001～0.5，例如约0.067。

9、进一步地，该容器为烧瓶，例如圆底烧瓶。

10、进一步地，该烧瓶的体积为250ml。

11、进一步地，该提取的时间为0.5～2h，例如约1h。

12、进一步地，该干燥为无水硫酸钠干燥。

13、进一步地，该供试品溶液的制备方法进一步包括以下步骤：在该干燥之后存放在样品瓶中，密封保存于4℃冰箱。

14、进一步地，该中药复方制剂的制备方法包括：(1)称取适量的牡蛎，粉碎成牡蛎细粉；以及(2)称取适量的淫羊藿、续断、知母、地黄、三棱、莪术、川芎和赤芍，加水煎煮，滤过，滤液浓缩至清膏，加入该牡蛎细粉，混匀，干燥，粉碎成细粉，干燥。

15、进一步地，在步骤(2)中，在加入该牡蛎细粉的同时加入适量的淀粉。

16、进一步地，在步骤(2)中，在加入该牡蛎细粉的同时加入适量的蔗糖。

17、进一步地，该煎煮的次数为1～5次，例如3次。

18、进一步地，该煎煮的时间为0.5～3小时，例如1～2小时。

19、进一步地，该清膏在50℃下的相对密度为1.2～1.40，例如约1.35。

20、进一步地，该中药复方制剂的剂型为胶囊、无糖颗粒或含糖颗粒。

21、进一步地，该包含淫羊藿的中药复方包括淫羊藿、续断、知母、地黄、三棱、莪术、川芎、赤芍和牡蛎。

22、进一步地，该淫羊藿、该续断、该知母、该地黄、该三棱、该莪术、该川芎、该赤芍和该牡蛎之间的质量之比为(500～1000):(20～100):(20～100):(20～100):(20～100):(20～100):(20～100):(20～100):(5～20)。

23、进一步地，该淫羊藿、该续断、该知母、该地黄、该三棱、该莪术、该川芎、该赤芍和该牡蛎之间的质量之比为约650:约50:约50:约40:约50:约50:约50:约50:约10。

24、进一步地，该牡蛎为煅牡蛎。

25、进一步地，该进样口温度为220～280℃，例如约250℃。

26、进一步地，该柱流量为1.0～1.5ml/min，例如约1.2ml/min。

27、进一步地，该总流量为20～30ml/min，例如约24ml/min。

28、进一步地，该尾吹气流速为2～8ml/min，例如约5ml/min。

29、进一步地，该色谱柱为db-5毛细管柱。

30、进一步地，该色谱柱的规格为：柱长30mm，内径0.25mm，粒径0.25μm。

31、进一步地，该方法检测出24个挥发性成分。

32、进一步地，在该24个挥发性成分中，19个成分来自于川芎，9个成分来自于三棱，6个成分来自于莪术。

33、进一步地，该24个挥发性成分包括：苯乙醛、2,6,10-三甲基十四烷、4-乙烯基-2-甲氧基苯酚、苯戊酮、2,4-二叔丁基苯酚、丁苯酞、3-羟基-1a,5-双羟甲基-5,6b-二甲基-1,3,3a,4,6,6a-六氢环丙并[e]茚-2-酮、沉香四醇、z-亚丁基苯酞、1,1-二甲基-1,2,3,5,7,8.9,9a-八氢苯并环庚烯-6-酮、4,4-二甲基-3-(3-甲基丁-2-亚烯基)辛烷-2,7-二酮、洋川芎内酯、莪术烯醇、(z)-3-亚丁基-4,5-二氢异苯并呋喃-1(3h)-酮、香橙烯氧化物1、1,2-脱氢-α-香附酮、姜黄素酮、沉香四醇、1,2-脱氢-α-香附酮、蓬莪术环氧酮、1-七三醇、亚油酸乙酯、顺-13-二十烯酸甲酯和2,2'-亚甲基双-(4-甲基-6-叔丁基苯酚)。

34、根据本发明的另一个方面，提供了一种上述方法在包含淫羊藿的中药复方的挥发性成分鉴定或质量鉴定或质量检测或质量评价或质量控制中的用途。

35、本发明的有益效果：

36、本发明中的质谱检测器为中药复杂成分的快速检出与结构鉴定提供了新的技术策略，在获取准分子离子峰的基础上，得到蕴含丰富结构信息的碎片离子峰，从而快速准确指认化合物结构信息，综合上述信息，采用气质联用指纹图谱技术表征包含淫羊藿的中药复方中挥发性成分组成。气质联用技术可以提供丰富的定性鉴别信息，自动分析样品，检测效率高，灵敏度高，重现性好，以上各方面都大大优于现有的常规定性鉴别技术。

37、因此，本发明的气质联用技术为包含淫羊藿的中药复方的品质评价、质量控制提供了一种有效的途径，对包含淫羊藿的中药复方的发展具有重要的指导意义。