一种预测仑伐替尼治疗肝癌效果的分子标志物及试剂盒

本发明涉及生物医药，具体涉及一种预测仑伐替尼治疗肝癌效果的分子标志物及试剂盒。

背景技术：

1、肝细胞癌是全球性最常见的恶性肿瘤之一。仑伐替尼作为肝细胞癌的一线药物被广泛使用，能够有效延长患者的总生存期，并且使得部分处于进展期的病人获得外科治疗的机会。然而仍然存在大量患者无法从仑伐替尼治疗中获益，在接受仑伐替尼治疗后病变大小稳定甚至进展。目前的影像和病理技术无法满足临床上筛选仑伐替尼耐药患者的需求，而且成本相对高昂。因此，有必要建立一种可以简便、快捷、有效地检测患者是否存在对仑伐替尼耐药的方法。

2、深入了解对仑伐替尼耐药和对仑伐替尼敏感的细胞之间的信号分子差异有助于理解耐药机制的成因，从而建立合适的检测方法。表皮生长因子受体(egfr)及其下游信号因子激活被广泛认为是仑伐替尼耐药细胞的重要特点，尤其是stat3的磷酸化所代表的信号通路的激活可以使得肝癌细胞获得耐药性质。然而egfr和stat3的生物性质决定了其难以在患者外周血中被检测，因而不适合作为门诊筛查仑伐替尼耐药的分子标志物。

3、高尔基体膜蛋白1(golm1)，又称高尔基体蛋白73(gp73)，是一种属于小膜糖蛋白家族且与高尔基体功能密切相关的跨膜蛋白。golm1长久以来被发现与肝细胞癌的不良预后密切相关，可以促进肝癌细胞的增殖、侵袭以及远处转移的能力，从而导致更快的进展速度和更高的复发风险。此外，golm1被发现能够上调肝癌细胞中egfr的表达量，通过调控egfr/rtk复合物的循环动力学，使得egfr及其下游信号分子持续激活。然而，之前的研究主要关注golm1与肝细胞远处转移的影响，而golm1与靶向药耐药性之间的关联则有待进一步研究。

技术实现思路

1、针对现有不足，发明人通过分析肿瘤细胞系和临床样本，发现golm1在对仑伐替尼耐药细胞株、仑伐替尼耐药的肝细胞癌患者肿瘤组织和外周血中显著升高。为了验证golm1过表达与仑伐替尼耐药之间的关联性，发明人在肝癌细胞系中敲除了golm1，发现其对仑伐替尼的敏感度显著上升。随后发明人在肝荷瘤小鼠模型中发现，敲除golm1之后荷瘤小鼠对仑伐替尼治疗的敏感性显著提升，表现出了更好的抑瘤效果。结合临床数据分析和实验结果，发明人确定了golm1作为肝细胞癌患者仑伐替尼耐药的分子标志物，并且通过检测患者的外周血血清golm1水平来反映患者仑伐替尼耐药的风险。

2、基于此，本发明的第一方面，是提供一种预测仑伐替尼治疗肝癌效果的分子标志物，该分子标志物为golm1。

3、本发明的第二方面，是提供检测分子标志物golm1表达水平的试剂在制备用于预测仑伐替尼治疗肝癌效果的产品中的应用。

4、进一步地，仑伐替尼治疗肝癌效果预测方法为：所述golm1表达水平越高，病人对仑伐替尼的耐药性越强，预测仑伐替尼治疗肝癌效果越差。

5、进一步地，所述产品的检测样本为血清。

6、本发明的第三方面，是提供一种基于检测血清golm1蛋白水平预测仑伐替尼治疗肝癌效果的试剂盒。

7、具体的，所述试剂盒包括彼此独立的试剂r1和试剂r2双液体组分；所述试剂r1包括以下含量的成分：nacl 120～300mmol/l，edta 40～100mmol/l，牛血清白蛋白20～100g/l，mops 50～180mmol/l，kh2po4 10mmol/l，山梨酸钾0.3g/l；溶剂为纯化水。所述试剂r2包括以下含量的成分：nacl 120～300mmol/l，edta 40～100mmol/l，牛血清白蛋白20～100g/l，mops 50～180mmol/l，kh2po410mmol/l，山梨酸钾0.3g/l，乳胶包被兔抗人golm1抗体2％；溶剂为纯化水。

8、该试剂盒通过将试剂r1和试剂r2分别与肝细胞癌患者血清样本混合后检测吸光度，试剂r2中乳胶包被兔抗人golm1抗体结合golm1蛋白使得试剂r1和试剂r2混合样本后会产生吸光度差异，通过这种差异实现golm1浓度的检测。

9、进一步地，所述试剂r1包括以下含量的成分：nacl 150mmol/l，edta 50mmol/l，牛血清白蛋白50g/l，mops120mmol/l，kh2po4 10mmol/l，山梨酸钾0.3g/l；溶剂为纯化水。所述试剂r2包括以下含量的成分：nacl 150mmol/l，edta 50mmol/l，牛血清白蛋白50g/l，mops120mmol/l，kh2po4 10mmol/l，山梨酸钾0.3g/l，乳胶包被兔抗人golm1抗体2％；溶剂为纯化水。

10、本发明具有以下有益效果：

11、1、本发明确定了golm1作为肝细胞癌患者仑伐替尼耐药的分子标志物，建立了golm1与靶向药耐药性之间的关联。

12、2、本发明通过患者的外周血检测血清golm1水平来反映患者仑伐替尼耐药的风险，为临床是否使用仑伐替尼治疗决策提供帮助。

13、3、本发明试剂盒填补了临床实践中缺乏有效预测和反应患者仑伐替尼耐药风险的空缺，并且操作简便、成本较低、检查损伤小、roc曲线下面积较大的好处。

技术特征：

1.检测分子标志物表达水平的试剂在制备用于预测仑伐替尼治疗肝癌效果的产品中的应用，其特征在于，所述分子标志物为golm1。

2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述golm1表达水平越高，病人对仑伐替尼的耐药性越强，预测仑伐替尼治疗肝癌效果越差。

3.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述产品的检测样本为血清。

4.一种基于检测血清golm1蛋白水平预测仑伐替尼治疗肝癌效果的试剂盒，

5.根据权利要求4所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂r1包括以下含量的成分：nacl150mmol/l，edta 50mmol/l，牛血清白蛋白50g/l，mops 120mmol/l，kh2po4 10mmol/l，山梨酸钾0.3g/l；溶剂为纯化水；

技术总结本发明属于生物医药技术领域，具体公开了一种预测仑伐替尼治疗肝癌效果的分子标志物及试剂盒。本发明确定了GOLM1作为肝细胞癌患者仑伐替尼耐药的分子标志物，建立了GOLM1与靶向药耐药性之间的关联。本发明还提供了基于检测血清GOLM1蛋白水平预测仑伐替尼治疗肝癌效果的试剂盒，利用该试剂盒检测患者外周血血清中GOLM1水平来反映患者仑伐替尼耐药的风险，为临床是否使用仑伐替尼治疗决策提供帮助。技术研发人员：郭磊,谢培一,吴梦源,赵雨菲,肖永胜,徐永峰受保护的技术使用者：复旦大学附属中山医院技术研发日：技术公布日：2024/7/25