一种同时检测杜仲中四种不同类型成分含量的HPLC方法

本发明涉及检测，更具体的说是涉及一种同时检测杜仲中四种不同类型成分含量的hplc方法。

背景技术：

1、杜仲(eucommia ulmoides oliv.)，又名胶木，为杜仲科(eucommiaceae)落叶乔木，是我国特有的乡土树种，也是重要的国家战略资源。杜仲是我国特有的单属科、单种属植物，在研究被子植物系统演化上有重要的科学价值；杜仲全株除木质部外，各部分均含硬橡胶，是一种重要的工业原料；杜仲的树皮是著名的中药材，目前发现其药理作用涉及抗骨质疏松、抗炎、降血压、抗氧化、抗肿瘤等方面，具有很高的药用价值。然而，杜仲自身的生物学特性使其在资源开发利用上，尤其是药用活性成分的提取方面，只能依赖于自身的组织或器官，在同一物种中发现新的可替代来源几乎是不可能的。随着对杜仲需求的增加，寻找合适的部位作为潜在药物来源是解决杜仲皮短缺的关键。

2、大量研究显示，除了杜仲的树皮外，其枝叶等组织中也富含丰富的天然活性成分，主要包括环烯醚萜类、苯丙素类、木脂素类及黄酮类等，并且以桃叶珊瑚苷、绿原酸、松脂醇二葡萄糖苷以及槲皮素这四种物质为主要药效成分。然而，不同类型的化合物其结构和理化性质差异较大，在同时分离和测定时往往具有较大的难度。此外，不同类型物质的吸收波长范围不同，单一波长下的检测往往出现不出峰或潜在的各种峰型问题，对含量计算造成较大的影响。目前，对杜仲中不同类型活性成分的分析和含量测定主要是分别建立分离和分析的hplc法，以及基于此基础上的uplc、hplc-ms法等。这些方法程序繁琐，工作量大，化学试剂消耗量及花费较大。

3、因此，提供一种同时检测杜仲中四种不同类型成分含量的hplc方法是本领域技术人员亟需解决的问题。

技术实现思路

1、有鉴于此，本发明提供了一种同时检测杜仲中四种不同类型成分(桃叶珊瑚苷、绿原酸、松脂醇二葡萄糖苷以及槲皮素)含量的hplc方法。本发明提供的是一种科学合理的能同时检测杜仲不同部位中环烯醚萜类、苯丙素类、木脂素类和黄酮类等不同类型成分含量的高精度hplc方法。

2、为了实现上述目的，本发明采用如下技术方案：

3、一种同时检测杜仲中四种不同类型成分含量的hplc方法，具体步骤如下：

4、(1)杜仲样品前处理及供试溶液的制备；

5、(2)hplc法检测供试样品中桃叶珊瑚苷、绿原酸、松脂醇二葡萄糖苷和槲皮素的含量；

6、hplc分离检测桃叶珊瑚苷、绿原酸、松脂醇二葡萄糖苷和槲皮素的条件为：采用phenomenex gemini c18(4.6mm×250mm,5μm)色谱分析柱，0.2％磷酸水溶液和乙腈两种试剂分别作为流动相a和流动相b，梯度洗脱程序为：0～10min，5％～12％b；10～20min，12％b；20～21min，12～14％b；21～30min，14％b；30～31min，14～30％b；31～45min，30％b；检测波长为0～10min 203nm，10～20min 320nm，20～30min 232nm，30～45min 367nm，柱温35℃，流速为1ml/min，进样量为10μl。

7、进一步，步骤(1)杜仲样品前处理及供试溶液的制备，步骤如下：

8、将杜仲组织40-50℃烘干至恒重，并粉碎成粉末；准确称取杜仲干粉，按料液比1:10-1:15(g/ml)加入50％甲醇，于30-40℃超声提取40-60min，将浸泡液以8000-10000r/min离心8-10min，取上清液，经0.22μm微孔滤膜过滤，得到供试溶液。

9、根据上述检测条件，可以实现供试溶液中桃叶珊瑚苷、绿原酸、松脂醇二葡萄糖苷及槲皮素四种成分峰同时在色谱图上的基线分离。

10、经由上述的技术方案可知，与现有技术相比，本发明公开提供了一种同时检测杜仲中四种不同类型成分含量的hplc方法，具有以下有益效果：

11、(1)本发明在无需使用质谱仪条件下，仅采用hplc方法即可完成杜仲中桃叶珊瑚苷、绿原酸、松脂醇二葡萄糖苷及槲皮素(分别属于环烯醚萜类、苯丙素类、木脂素类及黄酮类四种不同类型)含量的同步检测与分析，变波长的设置使四种不同类型物质在分离后被最大限度地检测，大大提高了检测精度。

12、(2)本发明方法采用了简便的样品前处理方式和梯度洗脱法，整个过程操作简便，使用的试剂简单易得，即可使桃叶珊瑚苷、绿原酸、松脂醇二葡萄糖苷及槲皮素在hplc色谱图上实现很好的基线分离，方法稳定，可靠性强。

13、(3)本发明适用于不同杜仲品种及杜仲不同药用部位，在杜仲环烯醚萜类、苯丙素类、木脂素类及黄酮类这4种不同类型成分含量的检测中具有较强的广谱性，为企业和科研机构的研发与生产节省了时间成本与经济成本。

技术特征：

1.一种同时检测杜仲中四种不同类型成分含量的hplc方法，其特征在于，具体步骤如下：

2.根据权利要求1所述的一种同时检测杜仲中四种不同类型成分含量的hplc方法，其特征在于，步骤(1)杜仲样品前处理及供试溶液的制备，步骤如下：

技术总结本发明公开了一种同时检测杜仲中四种不同类型成分含量的HPLC方法，属于检测技术领域。本发明公开的一种同时检测杜仲中四种不同类型成分含量的HPLC方法，包括杜仲样品前处理及供试溶液的制备和HPLC法检测供试样品中桃叶珊瑚苷、绿原酸、松脂醇二葡萄糖苷和槲皮素的含量。本发明使用变波长‑梯度洗脱HPLC法可实现杜仲中桃叶珊瑚苷、绿原酸、松脂醇二葡萄糖苷和槲皮素四种不同类型成分含量的同步检测，消耗样品与试剂量少，节约高效，同时具有准确、可信度高、专属性强的特点。技术研发人员：王涛,李乃伟,张帆,庄维兵,吕克,徐子恒,王忠,束晓春,韦庆娟,张蕾受保护的技术使用者：江苏省中国科学院植物研究所技术研发日：技术公布日：2024/7/25