用于靶向第一细胞的双特异性分子

背景技术：

1、癌症代表一类以异常细胞生长为特征的病症。癌细胞可能扩散并侵入身体的其他器官。最常见的癌症症状包括肿块、异常出血、长期咳嗽和不明原因的体重减轻。还存在不形成细胞团的血液癌症。人体内可发生超过100种类型的癌症，其中大多数是无法治愈的。

技术实现思路

1、在某些方面，本文所述的主题提供一种包含至少两个抗原结合区的双特异性分子，其中每个抗原结合区结合癌症的第一细胞(tfc)上的不同抗原。

2、在一些实施方案中，第一抗原是上皮细胞谱系标志物。在一些实施方案中，上皮细胞谱系标志物是图2的标志物中的任一种标志物。在一些实施方案中，上皮细胞谱系标志物是上皮细胞黏附分子(epcam)。在一些实施方案中，epcam包含seq id no：7或seq id：12。在一些实施方案中，第二抗原是巨噬细胞谱系标志物。在一些实施方案中，巨噬细胞谱系标志物是图1的标志物中的任一种标志物。在一些实施方案中，巨噬细胞谱系标志物是cd163。在一些实施方案中，cd163包含seq id no：8、seq id no：9、seq id no：10、seq id no：11或seq id no：13。

3、在一些实施方案中，癌症包括实体瘤。在一些实施方案中，癌症是乳腺癌、脑癌、胃肠癌、胰腺癌、肾癌、肝癌、肺癌、胸腺癌、卵巢癌、前列腺癌或子宫内膜癌。在一些实施方案中，胃肠癌是胃癌或结肠直肠癌。

4、在一些实施方案中，癌症包括液体癌症。在一些实施方案中，液体癌症是白血病、淋巴瘤或骨髓瘤。在一些实施方案中，液体癌症是急性髓系白血病(aml)。在一些实施方案中，液体癌症是b细胞恶性肿瘤。在一些实施方案中，液体癌症是髓系肿瘤、骨髓增生异常综合征(mds)、骨髓增殖性肿瘤(mpn)、mds/mpn重叠综合征、急性髓系白血病或慢性髓系白血病。

5、在一些实施方案中，第一抗原结合区包含轻链可变(vl)区和重链可变(vh)区，其中所述vl区包含seq id no：36的轻链cdr1(cdrl1)、seq id no：37的轻链cdr2(cdrl2)、seqid no：38的轻链cdr3(cdrl3)，并且所述vh区包含seq id no：33的重链cdr1、seq id no：34的重链cdr2和seq id no：35的重链cdr3。在一些实施方案中，第二抗原结合区包含轻链可变(vl)区和重链可变(vh)区，其中所述vl区包含seq id no：42的轻链cdr1(cdrl1)、seq idno：43的轻链cdr2(cdrl2)、seq id no：44的轻链cdr3(cdrl3)，并且所述vh区包含seq idno：39的重链cdr1、seq id no：40的重链cdr2和seq id no：41的重链cdr3。在一些实施方案中，第二抗原结合区包含轻链可变(vl)区和重链可变(vh)区，其中所述vl区包含seq idno：48的轻链cdr1(cdrl1)、seq id no：49的轻链cdr2(cdrl2)、seq id no：50的轻链cdr3(cdrl3)，并且所述vh区包含seq id no：45的重链cdr1、seq id no：46的重链cdr2和seq idno：47的重链cdr3。

6、在一些实施方案中，第一抗原结合区包含seq id no：28的轻链可变(vl)区和seqid no：27的重链可变(vh)区。在一些实施方案中，第二抗原结合区包含seq id no：30的轻链可变(vl)区和seq id no：29的重链可变(vh)区。在一些实施方案中，第二抗原结合区包含seq id no：32的轻链可变(vl)区和seq id no：31的重链可变(vh)区。

7、在一些实施方案中，第一抗原和所述第二抗原是巨噬细胞谱系标志物。在一些实施方案中，第一抗原是cd117、cd34或cd123，所述第二抗原是cd163。在一些实施方案中，tfc是转移性tfc。

8、在一些实施方案中，双特异性分子是双特异性抗体或其抗原结合片段。在一些实施方案中，双特异性抗体与药物缀合。在一些实施方案中，药物是毒素。在一些实施方案中，药物是化疗剂。在一些实施方案中，双特异性分子包括双纳米抗体、bite、tandab、dart、dart-fc、darpin、scfv、scfv-has-scfv和dnl-fab3。在一些实施方案中，双特异性分子是双特异性嵌合抗原受体(car)。在一些实施方案中，双特异性分子是包含第一多肽和第二多肽的co-lockr，其中所述第一多肽和所述第二多肽各自结合癌症的tfc上的不同抗原。

9、在一些实施方案中，第一多肽包含seq id no：14、seq id no：15、seq id no：18或seq id no：19。在一些实施方案中，第二多肽包含seq id no：16、seq id no：17、seq idno：20或seq id no：21。

10、在一些实施方案中，双特异性car是synnotch car。在一些实施方案中，双特异性分子是包含第一多肽、第二多肽和第三多肽的co-lockr，其中所述第一多肽和所述第二多肽各自结合癌症的tfc上的不同抗原，其中所述第三多肽与car结合，并且其中所述第三多肽与所述第一多肽或所述第二多肽可操作地连接。

11、在一些实施方案中，双特异性分子包括分裂型car-t系统，所述分裂型car-t系统包含嵌合抗原受体(car)模块和嵌合共刺激受体(ccr)模块，其中所述car模块包含含有第一抗原结合区和cd3z信号传导结构域的多肽，其中所述ccr模块包含含有第二抗原结合区和两个或更多个共刺激结构域的多肽，并且其中所述car模块和所述ccr模块各自结合癌症的tfc上的不同抗原。在一些实施方案中，分裂型car-t系统包含表4的多肽序列中的一个或多个多肽序列。

12、在某些方面，本文所述的主题提供了一种药物组合物，其包含根据本文所述的任何实施方案所述的双特异性分子。

13、在某些方面，本文所述的主题提供了一种多核苷酸，其编码根据本文所述的任何实施方案所述的双特异性分子。

14、在某些方面，本文所述的主题提供了一种载体，其包含根据本文所述的任何实施方案所述的多核苷酸。

15、在某些方面，本文所述的主题提供了一种病毒，其包含根据本文所述的任何实施方案所述的多核苷酸。

16、在某些方面，本文所述的主题提供了一种基因工程改造的细胞，其包含根据本文所述的任何实施方案所述的双特异性分子。

17、在某些方面，本文所述的主题提供了一种基因工程改造的细胞，其包含根据本文所述的任何实施方案所述的多核苷酸。

18、在某些方面，本文所述的主题提供了一种治疗或预防有需要的受试者的癌症的方法，所述方法包括向所述受试者施用包含至少两个抗原结合区的双特异性分子，其中每个抗原结合区结合癌症的第一细胞(tfc)上的不同抗原。

19、在一些实施方案中，第一抗原是上皮细胞谱系标志物。在一些实施方案中，上皮细胞谱系标志物是图2的标志物中的任一种标志物。在一些实施方案中，上皮细胞谱系标志物是上皮细胞黏附分子(epcam)。在一些实施方案中，epcam包含seq id no：7或seq id：12。

20、在一些实施方案中，第二抗原是巨噬细胞谱系标志物。在一些实施方案中，巨噬细胞谱系标志物是图1的标志物中的任一种标志物。在一些实施方案中，巨噬细胞谱系标志物是cd163。在一些实施方案中，cd163包含seq id no：8、seq id no：9、seq id no：10、seq idno：11或seq id no：13。

21、在一些实施方案中，癌症包括实体瘤。在一些实施方案中，癌症是乳腺癌、脑肿瘤、胃肠癌、胰腺癌、肾癌、肝癌、肺癌、胸腺癌、卵巢癌、前列腺癌或子宫内膜癌。在一些实施方案中，胃肠癌是胃癌或结肠直肠癌。

22、在一些实施方案中，癌症是液体癌症。在一些实施方案中，液体癌症是白血病、淋巴瘤或骨髓瘤。在一些实施方案中，液体癌症是急性髓系白血病(aml)。在一些实施方案中，液体癌症是b细胞恶性肿瘤。在一些实施方案中，液体癌症是髓系肿瘤、骨髓增生异常综合征(mds)、骨髓增殖性肿瘤(mpn)、mds/mpn重叠综合征、急性髓系白血病或慢性髓系白血病。

23、在一些实施方案中，第一抗原结合区包含轻链可变(vl)区和重链可变(vh)区，其中所述vl区包含seq id no：36的轻链cdr1(cdrl1)、seq id no：37的轻链cdr2(cdrl2)、seqid no：38的轻链cdr3(cdrl3)，并且所述vh区包含seq id no：33的重链cdr1、seq id no：34的重链cdr2和seq id no：35的重链cdr3。在一些实施方案中，第二抗原结合区包含轻链可变(vl)区和重链可变(vh)区，其中所述vl区包含seq id no：42的轻链cdr1(cdrl1)、seq idno：43的轻链cdr2(cdrl2)、seq id no：44的轻链cdr3(cdrl3)，并且所述vh区包含seq idno：39的重链cdr1、seq id no：40的重链cdr2和seq id no：41的重链cdr3。在一些实施方案中，第二抗原结合区包含轻链可变(vl)区和重链可变(vh)区，其中所述vl区包含seq idno：48的轻链cdr1(cdrl1)、seq id no：49的轻链cdr2(cdrl2)、seq id no：50的轻链cdr3(cdrl3)，并且所述vh区包含seq id no：45的重链cdr1、seq id no：46的重链cdr2和seq idno：47的重链cdr3。

24、在一些实施方案中，第一抗原结合区包含seq id no：28的轻链可变(vl)区和seqid no：27的重链可变(vh)区。在一些实施方案中，第二抗原结合区包含seq id no：30的轻链可变(vl)区和seq id no：29的重链可变(vh)区。在一些实施方案中，第二抗原结合区包含seq id no：32的轻链可变(vl)区和seq id no：31的重链可变(vh)区。

25、在一些实施方案中，第一抗原和所述第二抗原是巨噬细胞谱系标志物。在一些实施方案中，第一抗原是cd117、cd34或cd123，所述第二抗原是cd163。

26、在一些实施方案中，tfc是转移性tfc。在一些实施方案中，双特异性分子是双特异性抗体或其抗原结合片段。

27、在一些实施方案中，双特异性抗体与药物缀合。在一些实施方案中，药物是毒素。在一些实施方案中，药物是化疗剂。

28、在一些实施方案中，双特异性分子包括双纳米抗体、bite、tandab、dart、dart-fc、darpin、scfv、scfv-has-scfv和dnl-fab3。在一些实施方案中，双特异性分子是双特异性嵌合抗原受体(car)。在一些实施方案中，双特异性分子是包含第一多肽和第二多肽的co-lockr，其中所述第一多肽和所述第二多肽各自结合癌症的tfc上的不同抗原。在一些实施方案中，第一多肽包含seq id no：14、seq id no：15、seq id no：18或seq id no：19。在一些实施方案中，第二多肽包含seq id no：16、seq id no：17、seq id no：20或seq id no：21。

29、在一些实施方案中，双特异性car是synnotch car。在一些实施方案中，双特异性分子是包含第一多肽、第二多肽和第三多肽的co-lockr，其中所述第一多肽和所述第二多肽各自结合癌症的tfc上的不同抗原，其中所述第三多肽与双特异性car结合，并且其中所述第三多肽与所述第一多肽或所述第二多肽可操作地连接。

30、在一些实施方案中，双特异性分子包括分裂型car-t系统，所述分裂型car-t系统包含嵌合抗原受体(car)模块和嵌合共刺激受体(ccr)模块，其中所述car模块包含含有第一抗原结合区和cd3z信号传导结构域的多肽，其中所述ccr模块包含含有第二抗原结合区和两个或更多个共刺激结构域的多肽，并且其中所述car模块和所述ccr模块各自结合癌症的tfc上的不同抗原。在一些实施方案中，分裂型car-t系统包含表4的多肽序列中的一个或多个多肽序列。

31、在某些方面，本文所述的主题提供了一种工程改造的细胞，其表达至少一种上皮细胞谱系标志物和至少一种巨噬细胞谱系标志物。

32、在一些实施方案中，至少一种上皮细胞谱系标志物是图2的标志物中的任一种标志物。在一些实施方案中，至少一种上皮细胞谱系标志物是上皮细胞黏附分子(epcam)。在一些实施方案中，epcam包含seq id no：7或seq id：12。

33、在一些实施方案中，至少一种巨噬细胞谱系标志物是图1的标志物中的任一种标志物。在一些实施方案中，至少一种巨噬细胞谱系标志物是cd163。在一些实施方案中，cd163包含seq id no：8、seq id no：9、seq id no：10、seq id no：11或seq id no：13。

34、在某些方面，本文所述的主题提供了一种诊断癌症的方法，其中所述方法包括检测表达至少一种上皮细胞谱系标志物和至少一种巨噬细胞谱系标志物的细胞。

35、在一些实施方案中，至少一种上皮细胞谱系标志物是图2的标志物中的任一种标志物。在一些实施方案中，至少一种上皮细胞谱系标志物是上皮细胞黏附分子(epcam)。在一些实施方案中，epcam包含seq id no：7。

36、在一些实施方案中，至少一种巨噬细胞谱系标志物是图1的标志物中的任一种标志物。在一些实施方案中，至少一种巨噬细胞谱系标志物是cd163。在一些实施方案中，cd163包含seq id no：8、seq id no：9、seq id no：10或seq id no：11。

37、在一些实施方案中，检测包括其中双特异性分子与所述至少一种上皮细胞谱系标志物和所述至少一种巨噬细胞谱系标志物结合的测定。

38、在一些实施方案中，癌症包括实体瘤。在一些实施方案中，癌症是乳腺癌、脑癌、胃肠癌、胰腺癌、肾癌、肝癌、肺癌、胸腺癌、卵巢癌、前列腺癌或子宫内膜癌。在一些实施方案中，胃肠癌是胃癌或结肠直肠癌。在一些实施方案中，癌症是液体癌症。在一些实施方案中，液体癌症是白血病、淋巴瘤或骨髓瘤。在一些实施方案中，液体癌症是急性髓系白血病(aml)。在一些实施方案中，液体癌症是b细胞恶性肿瘤。在一些实施方案中，液体癌症是髓系肿瘤、骨髓增生异常综合征(mds)、骨髓增殖性肿瘤(mpn)、mds/mpn重叠综合征、急性髓系白血病或慢性髓系白血病。